鸡传染性法氏囊病病毒BJQ902株在DF-1细胞系上增殖工艺研究

试验旨在通过DF-1细胞增殖获得高效价的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）抗原。通过病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度5个培养条件的筛选和优化,对IBDV BJQ902株在DF-1细胞上的增殖工艺进行了研究。结果表明,IBDV BJQ902株在DF-1细胞上最佳增殖条件为：在37℃条件下培养,接毒量在0.01%~0.1%之间,接种时间为细胞传代后生长48~72 h,维持液血清浓度为1%~2%,收毒时间为病毒接种后60~72 h。在此培养条件下增殖病毒毒价在10^8.3~10^8.7 TCID₅₀/0.1 mL之间。     

鸡传染性法氏囊病灭活疫苗接毒方法改进试验

利用鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊病(X株)灭活疫苗的过程中,生产规程要求在接毒时一般采用弃去原生长液,接种病毒后37℃吸附1 h,再加入维持液进行病毒增殖的方法。本试验通过直接接毒的方法进行病毒繁殖,并与吸附接毒法对比。结果表明,直接接毒法不论是抗原收获的时间还是病毒含量(TCID50),与传统吸附接毒法都无显著差异,且按直接接毒法生产的疫苗安全性检验全部合格,说明可用不换液直接接毒来进行(X株)灭活苗的生产。     

鸡传染性支气管炎病毒M41株鸡胚增殖工艺研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41标准毒株在鸡胚上的最佳生产工艺,试验用IBV M41株分别以不同剂量接种同一胚龄不同鸡胚、不同胚龄普通鸡胚,以及IBV M41株接种普通鸡胚后不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备病毒液的产量及病毒效价。结果显示:IBV M41株接种无传染性支气管炎病毒母源抗体的SPF鸡胚最佳病毒接种剂量为104.5EID50,接种含有IBV母源抗体的普通鸡胚最佳病毒接种剂量为105.1EID50,最佳接种胚龄为11日胚龄,最佳收毒时间为48 h。按照此工艺制备疫苗,免疫SPF鸡,IBV抗体效价均符合规程标准。研究结果为用鸡胚高效、大量生产IBV M41株病毒抗原进而生产合格的IB疫苗提供了数据支持。     

应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究

试用鸡胚法氏囊原代细胞传代、增殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），均不同程度地产生特征性细胞病变效应。采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ和细胞毒回归鸡试验证实，ＩＢＤ－ＶＨ株组织毒适应于鸡胚法氏囊细胞，并随传代次数增加，病毒增殖能力增强；而在鸡胚成纤维细胞上盲传２代之后才开始出现细胞病变效应。比较了ＩＢＤＶ在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异，讨论了培养基ＰＨ值、小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培养及病毒增殖的影响。     

囊素对鸡传染性法氏囊病弱毒苗免疫的影响

为了研究囊素对鸡传染性法氏囊弱毒苗免疫效果的影响,将囊素按不同剂量与法氏囊弱毒苗混合滴鼻接种雏鸡。对接种后7,14,21和51日龄的鸡进行抗体琼扩效价检测、抗体转阳率检测和囊指数测定。结果显示:中等剂量(10μg/羽)囊素添加的鸡传染性法氏囊弱毒疫苗组抗体效价产生和持续时间高于其他剂量组和疫苗对照组(低毒力),囊指数值也高于其他组;鸡传染性法氏囊弱毒疫苗(中等毒力)接种试验鸡,能长时间维持较高抗体,但对鸡的法氏囊损伤较大。试验证明,适当剂量的囊素对鸡传染性法氏囊弱毒疫苗具有免疫增强作用和减少法氏囊损伤作用。     

悬浮培养和鸡胚尿囊液抗原制备的H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较试验

为了探讨悬浮培养和鸡胚尿囊液培养得到的H9亚型禽流感病毒(AIV)抗原制备的疫苗的免疫效力,试验用3株H9亚型AIV株分别接种微载体悬浮培养的MDCK细胞制备3种悬浮培养的细胞疫苗抗原,以3株H9亚型AIV株接种10日龄SPF鸡胚制备3种鸡胚尿囊液抗原,测定6种抗原液HA效价和鸡胚半数感染量(EID50);分别使用6种抗原液制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF鸡,并在免疫后第21天采血测定HI抗体水平,采血后进行攻毒并在攻毒后第5天进行病毒分离试验。结果表明:两种方式制备的AIV抗原HA效价为7~9 lb,鸡胚半数感染量为1×106.9~7.9EID50,疫苗免疫后第21天用同源毒株作为工作抗原测定的免疫鸡HI效价差异不大,用异源毒株测定时有一定差异;两种方法得到的抗原制备的疫苗均能获得很好攻毒保护。     

囊素对鸡传染性法氏囊病弱毒苗免疫的影响

为了研究囊素对鸡传染性法氏囊弱毒苗免疫效果的影响,将囊素按不同剂量与法氏囊弱毒苗混合滴鼻接种雏鸡。对接种后7,14,21和51日龄的鸡进行抗体琼扩效价检测、抗体转阳率检测和囊指数测定。结果显示：中等剂量（10μg／羽）囊素添加的鸡传染性法氏囊弱毒疫苗组抗体效价产生和持续时间高于其他剂量组和疫苗对照组（低毒力）,囊指数值也高于其他组;鸡传染性法氏囊弱毒疫苗（中等毒力）接种试验鸡,能长时间维持较高抗体,但对鸡的法氏囊损伤较大。试验证明,适当剂量的囊素对鸡传染性法氏囊弱毒疫苗具有免疫增强作用和减少法氏囊损伤作用。     

提高鸡法氏囊病双价弱毒苗效价的经验

我厂１９９３年开始，引进生产鸡传染性法氏囊炎ＢＤ５、Ｄ７８双价弱毒疫苗，此苗能够保护鸡群不受鸡传染性法氏囊炎病毒多种血清亚型毒株的感染，从而达到比一般单价疫苗更好的防疫效果。在疫苗的试产中，经过一段时间的摸索总结，改进了部分生产环节，提高并稳定了效价，现将经验介绍如下。１生产原料：１．１种毒：哈兽研提供的ＩＢＤＶ的ＢＤ５与Ｄ７８株。１．２鸡胚：本厂自繁自养的鸡所产种蛋孵化。１．３小牛血清：杭州《四季青》牌犊牛血清。２生产步骤：细胞制备、培养、接毒及收毒均按常规方法进行。３生产条件的选择与改进：３…     

Ⅰ群4型禽腺病毒DC株在LMH细胞的增殖工艺研究

为探索Ⅰ群4型禽腺病毒DC株在LMH细胞的生长特性和增殖规律,通过研究病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度等病毒增殖条件,筛选、优化了病毒增殖工艺。结果表明病毒最佳的增殖条件为:在37℃条件下培养,最佳接种量为1%,接种时间为细胞传代后生长72 h,维持液血清浓度为2%,维持液中不添加0.25%胰蛋白酶,收获时间为病毒接种后72 h。LMH细胞是Ⅰ群4型禽腺病毒DC株较适合的病毒培养系统,为研制Ⅰ群4型禽腺病毒疫苗提供了有利工具。     

鸡４种病毒抗原液的浓缩其四联没油佐剂灭活苗的研制

本研究通过超滤浓缩技术对鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征症病毒和传染性法氏囊病毒的尿囊液进行了１０倍或１０倍以上的浓缩处理，并按一定的比例配比研制成四联油乳剂灭活疫苗，对鸡的最小免疫剂量是０．２５ml，免疫接种二周后，鸡新城疫和产蛋下降综合征病毒的ＨＩ抗体效价分别达到８log2和７log２以上，传染性支气管炎和传染性法氏囊病病毒抗体Ｓ／Ｐ值均在０．２以上，抗体效价呈现明显的递增，抗体水平至少可持续４个月以上，这一结果证明该试验采用的禽类病毒性抗原的浓缩方法，适用新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒和传染性法氏囊病病毒等不同抗原液和的浓缩，同时为其他病毒尿囊液工细胞培养的浓缩以及不同种多联疫苗的研制奠定了基础。     

猪圆环病毒悬浮培养工艺研究

为了降低疫苗生产成本,本研究通过优化悬浮细胞培养和猪圆环病毒2型的增殖工艺,提高了病毒液的滴度和产量,从而提升疫苗效果。研究发现,悬浮细胞最佳的传代密度和培养时间分别为1.0×106 CFU/mL和72 h,在猪圆环病毒2型的增殖工艺优化中确定的最佳接毒剂量为5%,病毒液滴度最高的收毒时间为72 h。     

鸡传染性法氏囊病（B87株）组织毒液生产工艺探讨

通过计算ELD50,将已知效价的鸡传染性法氏囊病(B87株)生产种毒分几个滴度进行稀释,分别接种SPF鸡胚,结果各组鸡胚随病毒接种量的提高,高峰期死亡时间逐渐靠前,高峰期死亡率也逐渐增加,抗原效价也逐渐提高,抗原产量也有明显变化,病毒滴度以102.0 ELD50/0.1mL接种鸡胚更合适.     

鸡传染性法氏囊病组织病毒液（B87株）生产工艺探讨

通过计算ELD50,将已知效价的鸡传染性法氏囊病（B87株）生产种毒分几个滴度进行稀释,分别接种SPF鸡胚,结果各组鸡胚随病毒接种量的提高,高峰期死亡时间逐渐靠前,高峰期死亡率也逐渐增加,抗原效价也逐渐提高,抗原产量也有明显变化,病毒滴度以102.0ELD50/0.1mL接种鸡胚更合适。     

鸡传染性支气管炎H120、W93株活疫苗生产工艺的改进

分别以鸡传染性支气管炎病毒(In-fectiousbronchitisvirus,IBV)H120株、W93株不同病毒量接种10、12日龄SPF鸡胚,并改变后孵化温度生产抗原液,接种后不同时间收获胚液,根据鸡胚的早死率以及胚液的收获量、病毒滴度,选择最佳的生产工艺。结果表明,IBVH120株、W93株以102.7EID50/0.1mL的病毒量接种12日龄鸡胚尿囊腔,在34.5℃孵育35h,可较为显著地降低早死胚率,提高产毒量,且抗原液病毒滴度符合疫苗制备规程的要求。     

鹅副黏病毒胶体金检测卡的研究

将制备的抗鹅副黏病毒(GPMV)JG04株单克隆抗体3A5标记胶体金颗粒,提纯的鸡IgG(抗JG04株GPMV)喷涂在NC膜上,建立检测GPMV的快速夹心胶体金免疫层析检测卡(ICS)。该检测卡检测鸡减蛋综合征病毒、传染性法氏囊炎病毒、传染性支气管炎病毒、小鹅瘟病毒鸡胚或鸭胚尿囊液和麻疹病毒、犬瘟热病毒细胞培养物呈阴性,与鹅副黏病毒、孔雀源新城疫毒株,鸽源新城疫毒株、新城疫La sota株、鸡源新城疫病毒的尿囊液出现阳性反应。敏感性试验结果表明,该检测卡可检出血凝效价为24以上的鹅副黏病毒尿囊液。     

鸡病毒性关节炎病毒S1133株在鸡胚成纤维细胞培养传代效果观察

鸡病毒性关节炎病毒Ｓ１１３３株，在鸡胚成纤维细胞培养传代，至第６代后，细胞产毒效价明显提高，已达到了鸡培养的产毒水平。这为开发细胞培养工艺提供重要依据。     

牛传染性鼻气管炎弱毒与牛病毒性腹泻弱毒抗原免疫干扰的研究

本试验使用3~6月龄健康易感牛9头(牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体均阴性),共分3组,每组3头犊牛。第1组首免肌肉注射IBRV-LNM弱毒疫苗株种毒,接种1周后,每头牛接种BVDV-SM弱毒疫苗株;第2组只接种BVDV-SM弱毒疫苗株种毒,接种时间同第1组;第3组为对照组,接种MDBK细胞培养液。接种BVDV-SM疫苗毒后每周采血至疫苗毒接种后28 d,测定接种后BVDV抗体效价,并采用BVDV-JL检验用强毒进行攻毒试验。结果表明,第1组与第2组试验动物血清中牛病毒性腹泻病毒抗体水平无明显差异,能够抵抗BVDV-JL强毒攻击达到免疫保护的效果,说明牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LNM弱毒疫苗株接种后在牛体内对牛病毒性腹泻病毒BVDV-SM疫苗毒不产生免疫干扰作用。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄低母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法代囊病病毒(IBDV)BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5(分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体),用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9 d观察法氏囊病变,免疫后28 d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9 d,复合物疫苗1~3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28 d,复合物疫苗1~5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3(分别含8、4单位IBDV中和抗体)免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。     

鸡传染性法氏囊病疫苗毒生产工艺改进

<正>目前鸡传染性法氏囊病疫苗毒主要通过接种鸡胚成纤维细胞培养,本试验主要从病毒的不同接毒时间入手,通过对细胞病变的观察、病毒含量的对比,确定最佳接毒时间,为获得高质量的半成品奠定基础。     

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获－酶联免疫吸附试验（AC－ELISA），琼脂扩散试验（ACP）快速诊断试纸条（ISK）对感染同株强毒或弱毒囊病病毒（IBDV）的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较，结果表明，上述3种方法测得法氏囊中温毒IBDV抗原效价分别为10^6.0(AC-ELISA),2^-3.0(AGP)t 10^-3.0，测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为10^-1.0,0和0。强毒株接种鸡胚后，只有第1代鸡胚组织可被AC－ELISA测到低效价的IBDV抗原，而第2代以后则未能测到病毒抗原，弱毒疫苗株IBDV感染鸡后，法氏囊中可测到低效价抗原，但感染鸡胚后则无可测性病毒抗原。