磺胺甲口恶唑人工抗原的制备与鉴定

磺胺甲口恶唑(Sulfamethoxazole,简称SMZ)是一种中效磺胺类药物,其性质稳定、使用方便、价格低廉、具有广谱抗菌作用,在兽药临床中用于呼吸道和泌尿系统疾病的治疗,现多与甲氧苄啶合用,称为复方磺胺甲口恶唑(又名复方新诺明),抗菌作用可增强数倍至数十倍.磺胺甲口恶唑在畜禽疾病的控制和治疗中发挥着重要的作用[1],不合理使用使其残留对食品安全特别是动物源性食品安全和人类身体健康具有潜在危害性.因此,各国对磺胺类药物在动物性食品中的残留都有规定,美国和欧盟国家制定的动物源性食品SMZ最高残留限量为0.1 μg/g[2,3],我国农业部从2005年起,把畜产品中磺胺类药物的残留情况作为继盐酸克伦特罗之后的又一个重点予以监控.     

磺胺甲噁唑人工抗原的制备与鉴定

磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole,简称SMZ）是一种中效磺胺类药物,其性质稳定、使用方便、价格低廉、具有广谱抗菌作用,在兽药临床中用于呼吸道和泌尿系统疾病的治疗,现多与甲氧苄啶合用,称为复方磺胺甲噁唑（又名复方新诺明）,抗菌作用可增强数倍至数十倍。磺胺甲噁唑在畜禽疾病的控制和治疗中发挥着重要的作用,不合理使用使其残留对食品安全特别是动物源性食品安全和人类身体健康具有潜在危害性。     

磺胺甲恶唑单克隆抗体的研制

常用的磺胺类药物有十几种，磺胺甲恶唑（Sulfamethoxazole，SMX）是其中一种。近年来磺胺类药物不合理应用带来其不良后果，造成耐药菌株增加，动物性食品中磺胺类药物的残留，以及可能对人们的健康造成潜在的危害等，由此已引起了国内外的高度重视。因此对磺胺类药物残留的检测日显其重要。目前检测磺胺类药物残留的化学方法有高效液相色谱法、薄层色谱法和气相色谱法等，这些方法虽然灵敏、准确，但检测时间长、耗资大、对人员要求高，不适合大量样品的筛选测定。     

磺胺母核人工半抗原的合成与鉴定

合成磺胺母核人工半抗原,并对其产物进行鉴定。采用4-氨基苯甲酸甲酯（PBPA）和对乙酰氨基苯磺酰氯（ASC）为原料,经过亲和取代,酯的水解反应合成磺胺药物共有的母核结构苯甲酸对氨基苯磺酰胺（SH）,应用质谱法（ESI—MS）与核磁共振氢谱法（1H—NMR）鉴定SH。质谱结果显示[M-]=291.03766,与理论值[M]-292相符,表明SH合成成功;核磁共振氢谱（1H—NMR）的数据与SH化合物的结构相符。磺胺母核人工半抗原合成成功,为研制磺胺药多残留检测试剂盒和胶体金免疫层析试纸条奠定基础。     

新霉素人工抗原的合成与鉴定

用水溶性碳化二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于栽体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(O-vA),合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE法进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/C小鼠,问接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性.结果表明,BSA-NEO的红外光谱与BSA相比发生了改变,BSA-NEO的电泳条带与BSA的相比出现了明显的拖尾现象;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为NEO残留免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

沙丁胺醇人工抗原的合成与鉴定

通过沙丁胺醇(SAL)与琥珀酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,用EDC法将SAL琥珀酸衍生物偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SAL和包被原OVA-SAL,用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SAL免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-SAL的UV与BSA、SAL的相比发生了改变;通过UV分析,SAL-HS与BSA的分子结合比约为7.2∶1;通过系列ELISA鉴定,获得了高价、敏感、特异的pAb,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

庆大霉素人工抗原的合成与鉴定

庆大霉素（gentamicin,GM）属于氨基糖甙类抗生素,抗菌谱较广,对革兰阳性菌和革兰阴性菌都有作用,对革兰阴性菌作用强。在兽医临床和畜禽的养殖生产中,常用于治疗动物的消化道疾病和呼吸道疾病。随着庆大霉素在畜牧业中的应用越来越广泛,其在动物体内的残留问题也日益严重。研究旨在为GM残留免疫学检测方法的建立奠定基础。     

氟苯尼考人工抗原的合成与鉴定

氟苯尼考(FF)为新一代氯霉素的替代品,以其广谱、高效、吸收迅速、分布广泛、安全、动物专用等特点,在国内外畜牧和水产业迅速获得广泛应用.但是如果使用不当或滥用,则会导致药物残留以及耐药性问题的出现,危害人类健康.为此,许多国家已经建立了其最高残留限量.为保障我国人民的消费安全,提高我国动物源食品在国际市场上的贸易,必须建立适合FF的残留检测方法[1].     

环丙沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将半抗原环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白进行偶联。采用非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法对偶联物中环丙沙星与载体蛋白的分子结合比进行分析。紫外分光光度法表明，环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白的分子结合比分剐为6：1和13：1。非变性凝胶电泳显示，即使只有6个环丙沙星分子与栽体蛋白偶联，偶联物在凝胶中的迁移轨迹与栽体蛋白和偶联剂处理的载体蛋白对照样品均有明显不同。结果表明，非变性凝胶电泳法和紫外分光光度法可用于环丙沙星与卵清蛋白和牛血清白蛋白分子结合比的定性分析和定量分析。     

磺胺甲噁唑人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将磺胺甲噁唑以重氮化方法使之分别与人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA)载体蛋白连接,分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验,结果产生了特异性抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与磺胺甲口恶唑反应明显,与其他类似物交叉反应不明显。     

氯霉素免疫原的合成与鉴定

分别采用混合酸酐法和重氮化法合成氯霉素（ＣＡＰ）免疫原。混合酸酐法：将ＣＡＰ与琥珀酸酐反应生成氯霉素琥珀酸酯（ＣＡＰ－ＨＳ）,接着进行混合酸酐反应,将ＣＡＰ－ＨＳ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）相连,得ＣＡＰ－ＨＳ－ＢＳＡ复合物。重氮化法：将ＣＡＰ分子中的芳香硝基还原为芳香氨基,重氮化处理后,与ＢＳＡ连接。通过红外光谱和动物免疫试验鉴定合成的免疫原,结果表明ＣＡＰ－ＨＳ－ＢＳＡ合成成功。     

多西环素人工抗原的合成与鉴定

建立多西环素人工抗原(Doxycycline,DOX)的合成及鉴定方法。采用戊二醛偶联法将DOX分别与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原(DOX-BSA)和包被抗原(DOX-OVA)。经SDS-PAGE电泳法、紫外可见吸收光谱鉴定,证实人工抗原成功合成,偶联比分别为8.6∶1和3.8∶1。结果表明建立了一种新的DOX抗原合成方法,为进一步制备特异性DOX抗体和建立检测食品中DOX的酶联免疫方法奠定了基础。     

磺胺二甲嘧啶免疫抗原的合成研究

试验旨在研究磺胺二甲嘧啶（SM2）免疫抗原的合成。用重氮化方法将SM2分别与牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成了免疫抗原SM2-BSA和包被抗原SM2-OVA。紫外扫描和聚丙烯胺凝胶电泳结果表明, SM2-BSA的紫外吸收光谱与BSA、SM2相比均发生了改变,证明偶联成功,并测得SM2-BSA的结合比为13∶1;用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,获得了高效价和特异的多克隆抗体。结果表明,半抗原SM2和载体蛋白偶联成功,并可获得高价、敏感的多克隆抗体。     

己烯雌酚免疫抗原的合成与鉴定

通过重氮化法引入羧基,再用碳二亚胺法偶联BSA获得己烯雌酚(DES)免疫抗原.经紫外光谱、电泳图谱分析确证获得DES-BSA偶联物.间接酶联免疫法分析证明其免疫鼠所获得的抗体与己烯雌酚有良好的特异性.     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。     

甲硝唑人工抗原的制备及其ELISA检测

采用碳二亚胺法将甲硝唑半抗原与牛血清白蛋白(BSA)连接制备人工免疫原,同样方法将其与卵清蛋白(OVA)连接制备人工包被原.经紫外扫描分析,两种方法合成的免疫原和包被原的结合比分别为8∶1、2∶1和6∶1、2∶1;动物免疫试验分析偶联物,小鼠抗体效价达1∶5 000,与3种硝基咪唑类药物的交叉反应率均小于10%.表明制备的抗体可以用于甲硝唑残留的检测,同时为检测试剂盒的研制奠定了基础.     

人工抗原的鉴定

综述了目前国内外对人工抗原的鉴定方法,即:紫外分光光度法、红外分光光度法、电泳法、质谱法.并分析了各鉴定方法的优缺点,认为质谱法是鉴定人工抗原的最佳方法.     

磺胺甲噁唑抗原合成及其抗体的制备

采用重氮化法将磺胺甲噁唑(SMZ)与人血清白蛋白偶联形成免疫原,免疫大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描和高效液相色谱分析偶联物,免疫抗原的偶联率为19∶1,改良辛酸-饱和硫酸铵纯化抗体,多克隆抗体效价达1∶105,间接酶联免疫吸附试验建立的SMZ检测的线性范围在0.1ng/mL~10μg/mL之间,50%抑制率检测限为22.53ng/mL,抗体与磺胺甲噁唑交叉反应率为100%,与其他7种磺胺药交叉反应率很低。表明制备的磺胺甲噁唑多克隆抗体具有很高的特异性,可用于SMZ在动物性产品中残留的检测。