克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制

本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multistrip).用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multistrip.该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2 mm.结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2 ng·mL-1,检测时间5～8 min.基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例.该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选.     

莱克多巴胺胶体金免疫层析法快速检测试纸条的研制

为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺（ractopamine,RAC药物残留）,采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。     

沙门氏菌快速检测试纸条的研制与应用

应用提纯的兔抗沙门氏菌IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,羊抗兔IgG包被对照线,然后用胶体金标记纯化的兔抗沙门氏菌IgG-1建立了检测沙门氏菌的快速检测试纸条。该法通过胶体金标记兔抗沙门氏菌抗体直接显色,阳性者检测线出现红色线,整个试验过程仅需10~15min即可判断结果。与大肠杆菌、枸橼酸杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌等常见肠道菌不发生交叉反应。与沙门氏菌的最低检测量为2.3×105cfu/ml。试纸条4℃或37℃存放9个月,检测结果稳定。     

厦门地区饲料中沙门氏菌污染情况调查

通过用常规方法、PCR方法和金标试纸条方法,同时对厦门地区饲料厂生产和养殖场使用的饲料和添加剂(200份),展开沙门氏菌污染情况的调查。结果从一份乌龟配合饲料中检出一株沙门氏菌。经血清学鉴定为纳米比亚沙门氏菌(S．Namibia,血清型为6,7:c,enx),同时 PCR检出与预计相符合的产物,电泳条带大小为529bp,金标快速检测试纸检测显示阳性结果。该菌国内至今未见报道。说明厦门地区饲料总体状况良好,沙门氏菌污染轻微,但应不断加强管理。     

黄曲霉毒素B1免疫层析检测方法的研究

以柠檬酸三钠为还原剂,制备了20nm胶体金颗粒,以此胶体金标记纯化的单抗4G6,喷于玻璃纤维上,AFBl蛋白偶联物和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装,切割成胶体金试纸条。结果：组装的试纸条特异性好,与AF类似物无交叉反应,对AFBl标准品最低检测限为3μg／L,检测时间约为10min,批内和批间重复性为100％,假阳性率和假阴性率均为0。操作简便,成本很低,适于AFBl的现场快速检测。在制备了单克隆抗体的基础上,应用胶体金免疫层析技术,建立了食品中黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFBl）快速检测方法。     

蛋鸡场沙门氏菌快速检测方法应用比较

探索蛋鸡场沙门氏菌快速检测方法.经试纸条、分离培养初步确定沙门氏菌阳性菌株后,进行血清学分型和荧光PCR鉴定.在601份鸡棉拭子、粪便、饮水和饲料样品中分离出37株沙门氏菌,其中沙门氏菌D群2株、其他群35株.试纸条、分离培养和荧光PCR方法相比较,快速分离培养结合荧光PCR方法敏感、快速、准确,适合实验室检测;试纸条法快速、简便,适合蛋鸡场的快速初筛和日常监测;传统方法培养时间长,有待改进.     

猪尿中莱克多巴胺残留量快速检测方法的建立

为了现场灵敏、特异、快速地检测猪尿中莱克多巴胺(RAC)的残留情况,试验用胶体金标记RAC单克隆抗体构建一种能够快速检测猪尿中RAC的免疫层析试纸条,通过正交试验优化试纸条中标记抗体的量、胶体金结合垫上胶体金单克隆抗体(CG-mAb)溶液的体积和牛血清白蛋白封闭的莱克多巴胺(RAC-BSA)的浓度得到最优组合,并测定试纸条的特异性、稳定性、检测时间和检测限。结果表明:经过优化后得到的最优组合为标记抗体的量1.5μg/mL,胶体金结合垫上CG-mAb溶液的体积1.5μL,RAC-BSA的浓度0.2 mg/mL;该试纸条可在3 min内特异性地检测RAC,检测限为3 ng/mL,在室温条件下能保存12个月。说明试验构建的快速检测猪尿中RAC试纸条能达到现场使用的要求,适用于快速筛查猪尿中RAC的残留。     

犬细小病毒胶体金检测试纸条的制备与初步评价

为快速检测及诊断犬细小病毒及其引起的传染性疾病,应用胶体金免疫层析技术．采用柠檬酸三钠还原法制备25nm的胶体金颗粒,标记抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—F1株后包被于玻璃纤维膜作为金标垫,在硝酸纤维素膜上分别包被羊抗小鼠IgG二抗和抗犬细小病毒单克隆抗体CPV—B6株作为质控线和检测线,将吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫分别粘贴于背衬板上制成犬细小病毒抗原胶体金检测试纸条。特异性试验及与血凝试验的对比结果表明,该试纸条具有良好的特异性和敏感性,与进口产品的总符合率为98％。本研究为进一步研发犬细小病毒检测试纸奠定了基础。     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。     

动物尿液中沙丁胺醇残留检测试纸条的研制

为了制备可用于检测动物尿液中沙丁胺醇(SAL)残留的试纸条,试验采用胶体金免疫层析方法,首先将小分子SAL进行改造,并在此基础上制备SAL抗原和抗SAL抗体,进而制备得到胶体金标记抗体,然后将其喷涂于胶体金结合垫,并与样品垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸及塑料底板组装,得到SAL检测试纸条。结果表明:试纸条对猪尿、牛尿、羊尿中SAL的检测限为3.0μg/L,检测时间为5 min,特异性高,重复性良好,与仪器检测方法结果一致,可用于动物尿液中SAL的现场快速检测和筛选工作。