高质量的小麦种子总RNA的快速提取方法

提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究小麦种子发育的必要条件。现有提取方法难以快速得到高纯度的小麦种子总RNA。本试验将冷酚法和Trizol一步法相结合,在5h左右就可得到高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,OD260/DO280比值在1．90-2．00之间。将提取的总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,在cDNA—AFLP分析上可得到清晰的条带。说明这种方法获得的总RNA纯度和完整度非常高,完全满足分子生物学研究的要求。     

两种同时提取小麦根腐离蠕孢菌DNA和RNA的方法比较

获得足够数量和高质量的RNA和DNA是进行分子生物学研究工作的基础。以小麦根腐离蠕孢菌为原料,分别采用溶菌酶法和液氮研磨法破碎真菌细胞壁提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外吸收及聚合酶链式反应（PCR）技术进行核酸完整性和纯度检测。结果表明：两种方法在提取DNA时都同时得到了高质量的RNA;PCR检测结果表明DNA完整性比较高,两种方法得到的DNA质量相当;溶菌酶法中得到的RNA质量优于液氮法。利用溶菌酶破壁法提取小麦根腐离蠕孢菌DNA的提取体系可用于RNA的提取,为小麦根腐离蠕孢菌核酸的DNA和RNA的同时提取提供了一种简便、安全、可行的方法。     

羊蹄甲果荚中总RNA提取的新方法

高质量RNA的获得是开展羊蹄甲分子生物学研究的基础,但要获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而有较大差异。目前已有多种从植物组织中提取RNA的方法。但是由于羊蹄甲中的次生物质含量较高,这些常用方法并不适用于羊蹄甲RNA的提取。本文介绍一种羊蹄甲果荚中总RNA的提取方法,它可以有效的排除羊蹄甲组织中大量存在的多酚类和多糖类物质的干扰。所得RNA样品经紫外分光光度计检测和1%琼脂糖凝胶电泳分析证明无明显降解,且具有较高的纯度。获得的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足RT-PCR,Northernblot和cDNA文库构建等分子生物学实验的要求。本方法尤其适用于多酚和多糖含量较高的植物组织的RNA提取,且试剂简单经济,试验结果稳定,重现性强。     

番茄果实总RNA提取与cDNA-AFLP

从番茄果实中提取高质量的RNA是对调控番茄果实品质、生长发育和代谢等相关基因进行分子生物学研究的基础。实验表明,已报道的相关RNA的提取方法,即使利用已经报道的从其它果实中成功提取出高质量RNA的方法,也不能从番茄果实中分离出高质量的RNA。 这主要是由于番茄果实中多糖、多酚类物质及其他次生代谢,在RNA提取过程中与RNA共同沉淀,从而影响RNA的产量和质量。目前,商业化的RNA抽提试剂盒无法直接用于番茄果实RNA的提取。笔者采用4种方法对番茄果实总RNA进行提取,筛选出一种最佳的改进方法。可以从不同时期番茄果实中成功提取高质量的RNA,产量可达401.6--840.2μg/g,通过测定A260/A230和A260/A280 的比值表明,该方法排除了番茄果实中蛋白、多糖、以及多酚等次生物质的干扰,提取到了高质量番茄果实总RNA;1.2%琼脂糖电泳结果表明RNA在整个提取过程中结构完整,未发生明显降解;所提取的RNA用于cDNA-AFLP等到了清晰的表达图谱,这表明其质量完全可满足下一步分子生物学研究。     

一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质，用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-LiCl法，提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染。该方法提取的盐桦叶片总RNA，完整性好、纯度高，可用于RT-PCR等实验操作，此法无需特殊试剂和贵重仪器，实验结果稳定，重复性好，适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取。     

芝麻SRAP反应体系的建立与优化

以芝麻幼叶提取的DNA为试验材料,通过对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 + 、Taq酶、随机引物及模板DNA进行优化,建立了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系：dNTPs（10mmol／L）0.30μl,Mg2 +（25mmol／L）1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer 1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础。     

花生总RNA提取方法比较研究

通过对2种RNA提取方法（改良CTAB法和Trizol法）和2种RNA提取试剂盒（AXYGEN总RNA提取试剂盒和TIANDZ总RNA提取试剂盒）进行比较研究,以期获得质量较好的花生不同器官的总RNA,为后续分子生物学实验奠定基础。实验结果表明,与TRIZOL法及2种RNA提取试剂盒相比,改良CTAB法提取的花生总RNA完整性好,得率高,稳定性好,并且无DNA污染,可以进一步满足半定量RT-PCR等实验需要。     

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法

摘 要：在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。     

山豆根基因组DNA高效提取方法的建立与优化

为了探寻优化山豆根DNA提取的方法,本研究以山豆根的叶片为材料,用3种改良的CTAB法提取山豆根DNA,并将提取的DNA经分光光度计和电泳检测,用于cpDNA引物筛选试验,找出最有效的山豆根DNA提取方法。结果显示,高PVP和β-巯基乙醇提取法和样品预处理法可用于提取山豆根基因组DNA。其中,样品预处理法山豆根DNA的效果最好,提取DNA浓度高、质量好,引物筛选结果条带清晰且单一。本研究建立了山豆根高质量的DNA提取方法,为进行分子生物学研究提供支持。     

火龙果总DNA提取方法比较研究

摘要：火龙果组织中含有多糖及其他次生代谢物质,因而难以提取高质量的DNA。本试验以火龙果嫩茎为材料,进行多种DNA提取方法比较研究,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA样品进行检测,结果表明,改良CTAB法和微量CTAB法均可用于火龙果DNA提取,尤其是微量CTAB法,提取的DNA纯度较为理想,能满足后续分子生物学研究的要求。     

板栗子叶总RNA提取方法研究?

为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。     

银杏叶片RNA提取方法的研究

为了获得一种银杏（Ginkgo biloba L.）叶片总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,笔者以不同生长期的叶片为材料,利用生物分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、乙二醇丁醚法以及改良Trizol法提取的银杏总RNA的产率和纯度。结果表明：改良Trizol法所提取RNA的OD260/OD280比值介于1.8~2.0之间,并且OD260/OD230在1.9~2.1之间,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良Trizol法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;CTAB法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象,乙二醇丁醚法提取效果较差。这表明改良Trizol法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

盐爪爪核酸提取方法研究

土壤盐渍化是一个世界性的生态问题,与传统的水利工程改良措施相比,挖掘盐生植物的生物潜力对实现盐渍土的生物改良和有效利用具有重要作用。本实验所用材料为藜科植物盐爪爪,提取高质量的核酸是对盐爪爪进行分子研究的前提和基础,也是进行植物耐盐基因工程研究的基础。因此,本实验研究了盐爪爪核酸的提取方法,所得结果为盐爪爪耐盐机理的进一步研究奠定基础,也为其它植物的核酸提取提供借鉴。     

剑麻不同组织RNA提取方法比较分析

本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。     

芝麻成株期茎点枯病原菌致病性研究

本研究通过对感茎点枯病芝麻植株进行病原菌分离纯化及鉴定（包括表型鉴定、分子鉴定以及芽期致病力鉴定）获得了具有高致病力的病原菌株M. phaseolina,然后对获得的M. phaseolina进行芝麻成株期致病性研究,并对感病植株进行病原菌再分离鉴定从而确定获得的真菌为M. phaseolina。芝麻茎点枯病原菌M. phaseolina的致病性鉴定方法采用受侵染牙签接种法,在芝麻茎杆内,M. phaseolina会导致维管束组织形成一个由上往下逐渐坏死的棕黑色条纹,随后开始呈放射性收缩并坏死并逐渐扩大;所有病原菌接种的茎杆上都出现大量的菌核。对所有接种病原菌的植株感病茎杆进行M. phaseolina再分离纯化。茎点枯病原菌的分离鉴定、致病性鉴定以及病原菌再分离结果都符合科赫法则,为芝麻茎点枯病相关研究提供方法支持。     

2种蚜虫DNA提取方法的比较与改进研究

蚜虫是农业生产上的重要害虫,蚜虫分子生物学研究的快速发展对于植物-蚜虫间的互作机理探讨、抗蚜基因的克隆和抗蚜农作物品种的选育越来越重要,而简便高效的单头蚜虫基因组DNA的提取一直是蚜虫分子生物学研究中的难点。为了提高单头蚜虫DNA提取的产量和质量,通过采用改进的DNA提取方法,对2种不同提取方法（蛋白酶K法和CTAB法）的蚜虫DNA产量和质量进行了比较研究。结果表明,无论从DNA的产量和质量上,CTAB法都优于蛋白酶K法,能达到测序要求,且方法简便,但是成功率低于蛋白酶K法;蛋白酶K法提取的产量较CTAB法偏低,产量和质量均达到了测序要求,且从DNA的提取成功率上高于CTAB法。2种改进后的DNA提取方法都能得到满足测序要求的DNA,2种方法各具优缺点,可根据具体实验要求进行选择。     

高质量提取银杏种仁总RNA的改良方法

提取高质量的RNA是获取银杏(Ginkgo biloba L.)种仁药用蛋白基因以及从基因表达水平研究林木良种银杏种子发育和后熟的必要条件。现有提取方法难以获得高纯度的银杏种仁总RNA。本研究旨在改良现有提取方法,以满足抽提富含蛋白质、多糖、多酚等特殊材料高质量RNA的需要。文中将改进的CTAB法和Trizol一步法相结合,优化了试剂组合并改进实验细节,从银杏种仁中获得了高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28SrRNA、18SrRNA条带,亮度满足2：1比例关系。OD260/OD280比值在1.85~2.00之间。将提取的总RNA用于Northern杂交分析可检测到清晰的信号,而用于RT-PCR和5'-RACE也可获得清晰的目的条带。说明这种方法获得的总RNA完整度和纯度很高,完全可以满足下游分子生物学实验要求。     

一个芝麻应用核心种质的DNA分子身份证构建

构建并研究应用核心种质是深入挖掘芝麻优异基因和提高育种效率的有效途径。经过对核心种质农艺、形态等性状4年4点的观察统计, 构建了包括大粒、高木酚素、高油等23种应用型在内的131份芝麻应用核心种质。为了准确鉴别这批应用核心种质并对芝麻DNA分子身份证的构建方法进行探索, 本研究利用SSR变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术, 从基于芝麻全基因组开发的32对SSR引物中, 筛选出7对核心引物, 进而采用SSR荧光标记毛细管电泳技术, 共检测出53个多态性位点, 最多一个引物检测到12个多态性位点。将毛细管电泳得到的分子量数据以数字+英文字母方式编码, 用ID Analysis 4.0软件根据最少引物区分最多种质的原则选核心引物中的6对(ZMM1494、ZMM1648、ZMM3037、ZMM2818、ZMM1851、ZMM1935)组合, 构建出如“4A32645(AC017)”这种简单、易使用的字符串DNA分子身份证, 并确定了不同应用型的组内引物组合。还对131份应用核心种质构建了条形码和二维码DNA分子身份证, 可迅速被电子设备识别, 拓宽了DNA分子身份证的使用范围, 并为以后芝麻种质标准化和品种DNA分子身份证库的构建奠定了重要的技术基础。