黄瓜基因组DNA提取与RAPD分析

采用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄法和CTAB法对黄瓜的基因组DNA进行提取。结果表明，改良SDS法提取的黄瓜叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点，其A260／A280在1．7－1．9之间，DNA的产量为450μg/g。用该法提取的黄瓜DNA适合进行RAPD分析。     

云南岩白菜资源的DNA提取和ISSR引物筛选

提取滇产岩白菜资源的基因组DNA并进行ISSR引物的筛选,为用ISSR标记研究云南岩白菜资源的遗传多样性奠定基础。DNA提取采用改良的CTAB法,质量检测采用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度计法,ISSR引物选用加拿大哥伦比亚大学开发的100条引物。结果表明,从18份云南岩白菜资源的幼叶中提取了基因组DNA,浓度在1 387.5～12 000 ng/μL之间,A260/A280的值在1.61～1.85之间,琼脂糖凝胶电泳检测呈一条带;从100种ISSR引物中筛选出了22种扩增结果好的引物。所提DNA质量较高,该提取方法适用于从酚类和蛋白质含量高的植物材料中提取DNA;22个ISSR引物可用于岩白菜资源的遗传多样性研究。     

红叶石楠RAPD反应体系的优化

建立并研究适合红叶石楠的RAPD的最佳反应体系,为以后开展红叶石楠的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。采用改进后的CTAB法,成功地提取了红叶石楠基因组DNA,通过单因素试验,研究了Mg2+、dNTP、引物的浓度和模板DNA,Taq酶的用量对RAPD反应的影响,建立适合于红叶石楠的RAPD反应体系。结果表明,在25 μL的RAPD反应体系中最佳反应条件分别是10×PCR Buffer 2.5 μL、Mg2+ (25 mmol/L) 2.0 μL、引物(20 μmol/L) 2.0 μL、dNTPs (2.5 mmol/L) 1.8 μL、DNA模板(49.5 μg/mL) 2.0 μL、Taq聚合酶0.3 μL (5 U/μL)。适宜的PCR循环程序为94℃预变性4 min,然后44个循环（94℃变性30 s,36℃退火30 s,72℃延伸2 min）后,72℃延伸10 min,最后16℃保存。改进的CTAB法能成功地提取红叶石楠基因组DNA,利用单因素试验设计所建立的RAPD反应体系,通过重复试验证明了该体系稳定可靠,可应用于红叶石楠遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为红叶石楠在分子生物学研究奠定了基础。     

适于SSR分析的茶树高质量基因组DNA提取方法

对野生型、过渡型和栽培种茶树分子遗传多样性研究中遇到的DNA提取问题进行了试验,针对茶树组织内富含多酚、多糖、色素及次生代谢物质的特点,以茶树嫩叶为试材,采用改良CTAB法获得了高质量的茶树基因组DNA。运用本方法提取的茶树总DNA作为模板用多条EST-SSR引物和自身开发的基因组SSR引物进行PCR扩增并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条带,结果表明,改良后的方法适用于不同类型的茶树叶片DNA提取,所得DNA带型完整,质量较高,扩增SSR产物条带清晰,证实所提DNA适用于后续的SSR分析。     

SDS-蛋白酶法分离棉花cpDNA及psbA基因启动子、终止子克隆

采用SDS-蛋白酶法提取了棉花的叶绿体DNA.琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的叶绿体DNA质量高.用所提取的叶绿体DNA作为模板进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.同时以所提取的叶绿体DNA作为模板,以psbA基因启动子、终止子序列设计引物,成功地扩增出预期为312 bp和382 bp的目标片段.将目标片段克隆测序,经Blantn分析,结果表明上述片段正是psbA基因启动子、终止子序列.该方法与传统的提取方法相比省时、高效、无污染,为进一步开展棉花叶绿体基因工程奠定了良好基础.     

高效提取越橘成熟组织基因组DNA的方法

为从越橘成熟组织中提取高质量DNA,对CTAB法进行改良,并与常规CTAB法及快速CTAB法的提取效果进行比较。结果表明:改良方法提取获得的DNA产量大、纯度高,DNA产量平均为192μg/g,OD260/OD280在1.75~1.85之间,所得DNA能被限制性内切酶完全消化,以其为模板进行SRAP-PCR扩增,能得到清晰、稳定的条带,证明改良方法适于越橘成熟组织DNA的提取。     

甘蓝型油菜成熟籽粒DNA快速提取方法探讨

以室温保存不同年份的甘蓝型油菜种子为材料,采用改良的CTAB法和DNA抽提试剂盒分别提取甘蓝型油菜籽粒DNA,探讨适合甘蓝型油菜籽粒DNA提取的方法。结果表明,不同保存年份种子提取的DNA含量无显著差异;受种皮色泽的影响也较小;用改良的CTAB法比试剂盒所提DNA产量高,结构完整性好,成本较低。PCR扩增检测结果表明两种方法获得的DNA均能满足一般的分子实验。因此,从油菜干籽粒中直接提取DNA可以节约时间,显著提高工作效率,为快速高效地进行甘蓝型油菜种质资源和遗传多样性分析奠定了基础,同时,也利于快速鉴定推广品种是否带有外源基因。     

五味子的DNA提取及RAPD鉴定研究

采用CTAB、SDS、改良CTAB法对五味子总DNA提取进行研究,并对总DNA进行电泳分析和含量测定,结果表明以改良CTAB法提取五味子叶片DNA纯度最好,以此DNA为模板可获得条带清晰、重复性好的RAPD扩增结果。从14条重复性好的引物中共扩增出67条带,平均每个引物4.8个片段,多态性位点数为58,比例为86.6%。UPGMA聚类分析的结果与五味子形态学分类结果相似,10份五味子优系在遗传相似系数0.69处可划分为3个类群,该RAPD技术体系可以很好地用于10份五味子种质资源的鉴定。     

RAPD标记在油菜核不育两系及其杂种纯度检验上的研究Ⅰ.DNA快速制备及纯度检测

DNA分子标记技术是检测遗传差异的一项新技术,特别是RAPD标记技术应用更加广泛,DNA质量是保证RAPD分析成功的关键.本文采用改良SDS法对油菜叶片总DNA进行了提取,经琼脂糖凝胶电泳和紫外光光度计分析,结果表明:1、所提取的DNA浓度和纯度都高,可以作为分子生物学研究所用,并为本实验后续的PCR扩增奠定了良好的材料基础;2、不同时期叶片DNA的含量不一样,苗期幼叶DNA含量比青荚期无柄叶DNA含量高.     

RAPD标记在油菜核不育两系及其杂种纯度检验上的研究：I.DNA快速制备及纯度检测

DNA分子标记技术是检测遗传差异的一项新技术，特别是RAPD标记技术应用更加广泛，DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。本文采用改良SDS法对油菜叶片总DNA进行了提取，经琼脂糖凝胶电泳和紫外光光度计分析，结果表明：1、所提取的DNA浓度和纯度都高，可以作为分子生物学研究所用，并为本实验后续的PCR扩增奠定了良好的材料基础；2、不同时期叶片DNA的含量不一样，苗期幼叶DNA含量比青荚期无柄叶DNA含量高。