鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

鸡减蛋综合征油乳剂灭活苗的研制

采用鸡减蛋综合征(EDS76)K-11株细胞毒为种毒，通过鸭胚连续盲传5代，使其扩增，收获尿囊液作为基础种子毒。基础种子毒在非免疫健康鸭胚上增殖动态的试验结果表明，EDS76病毒在羊水、尿囊膜(包含羊膜)、尿囊液中含量较高，增殖动态趋于一致；接种病毒后120h为最佳收毒时间，突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法，使收获的病毒材料由原来的每胚5．2ml增加到每胚49．4ml，显著降低了研究费用和制苗成本。确定了0．1％甲醛在20℃条件下48h灭活病毒为最佳灭活方法。成功地研制出尿囊膜、羊膜、羊水、尿囊液四元材料混合的EDS76油乳剂灭活疫苗。此疫苗在甘肃省推广试用80万羽份，安全可靠，免疫持续期长，能有效地预防和控制EDS76的发生和流行。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

郑州地区家鸭EDS－76血清学调查

郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＯＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％．不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异．被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义．试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗．但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以上，每增加１个滴度，所培养的病毒ＨＡ价下降５×２１．７．不宜作为制苗鸭胚．鸭群ＥＤＳ－７６血清抗体和卵黄抗体检测比较结果表明，被检的血清和卵黄抗体平均效价基本相同，可用卵黄代替血清作为血清学检查的被检材料．     

ND-IBD-EDS_(76)三联油佐剂灭活疫苗的研制

１病毒来源ＮＤＬ系种毒、ＥＤＳ７６种毒,兄弟单位实验室赠送。ＺＢＤ种毒系由法氏囊病鸡中分离、培养而得。２病毒液培养２．１ＮＤ病毒液培养在无菌条件,给无ＮＤ抗体的１６只鸡胚尿囊腔接种,增殖复壮,提取尿囊液,测出ＨＡ效价≥１３ｌｏｇ２的鸡胚,取其囊液混合...     

鸡新城疫、产蛋下降综合征二联油佐剂灭活疫苗的研制

１　材料和方法　１１　抗原制备　分别将ＮＤＬａｓｏｔａ株和ＥＤＳ７６种毒接种９～１１日龄鸡胚、鸭胚增殖病毒,收获感染胚液,经检测血凝价（ＨＡ）ＮＤ为≥１∶６４０,ＥＤＳ７６≥１∶２０４８０,病毒含量以尿囊腔内注射的感染量≥１０６０ＥＩＤ５０／０１ｍｌ时,可用于制苗用毒,经甲醛溶液３７°Ｃ灭活备用。１２　油相制备　取１０号白油,司本８０按一定比例混合后加硬脂酸铝少量,随加随搅拌,煮沸至透明为止,高压灭菌后备用。１３　水相制备　将灭活的Ｌａｓｏｔａ．ＥＤＳ７６尿囊液按一定比例混匀后,加入吐…     

鸡减蛋综合征的研究──Ⅱ．鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０～１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素．凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集兔红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡．成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化．产蛋率为８５～９４％，但产各种异常蛋占总产蛋数的２９％。电镜下发现原囊液中病毒颗粒呈球形、大小为７０～８０ｎｍ、无囊膜。     

鸡减蛋综合征的研究Ⅱ.鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０－１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素，凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集免红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡，成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化，产蛋率为８５～９４％，     

鸡新城疫减蛋综合征异源二联灭活油苗的研究

鸡新城疫（ＮＤ）病毒和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒混合种接种在１２—１４日龄鹅胚上，在接种后１２０小时收获尿囊液，用０．４％甲醛溶液３７℃２４小时灭活，加入１０号白油，制成鸡新城疫减蛋综合征异源二联苗，经２０余万只鸡试用表明，该苗能有效地控制ＮＤ和ＥＤＳ－７６的发生     

鸡减蛋综合征病毒GC2毒株稳定性测定

将ＥＤＳ７６ＧＣ２毒株接种于１０～１１日龄鸭胚尿囊腔内,连续传至第３０代,分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及其免疫原性。结果,该病毒不同代次胚液ＨＡ和ＥＩＤ５０分别在１∶２１５和１０５．０／０．１ｍＬ以上,免疫原性良好,对鸭胚致死性随传代次数增加而减弱,说明该病毒稳定性良好。于－２０℃和－５０℃可分别保存６和１２个月以上。     

改革鸡产蛋下降综合症灭活苗制备工艺的研究

选用鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ７６）的两个地方毒株为种毒感染９日龄的鸭胚，感染后１２０小时采取鸭胚的尿囊膜制成浸出液，经甲醛灭活后，用以１０号白油为主的油佐剂乳化制成ＥＤＳ７６灭活苗，简称改革法，下同。     

郑州地区家鸭EDS—76血清学调查

郑州地区９个鸭场鸭群中有７个鸭场为ＥＤＳ－７６ＨＩ抗体阳性，阳性率为６６～１００％，不同日龄和不同品种鸭群对感染无明显差异。被感染ＥＤＳ－７６病毒鸭群虽无可见临床症候，对产蛋率也无明显影响，但有一定流行病学意义，试验证明，使用ＥＤＳ－７６ＨＩ母原抗体４．８Ｌｏｇ２以下的鸭胚，用ＨＡ５×２＾１２的种毒接种，对其病毒增殖没有明显的影响，可用于制造ＥＤＳ－７６灭活疫苗，但鸭胚母原抗体超过４．８Ｌｏｇ２以     

鸡新城疫D10株和减蛋综合征GC2株鸭胚源二联灭活疫苗田间免疫 …

用同一鸭胚增殖鸡新疫Ｄ１０（ＮＤ－Ｄ１０）的减蛋综合征ＧＣ２（ＥＤＳ７６－ＧＣ２）两株病毒制成的异源二联灭活苗,与常规生产的新减二联灭活苗,分别免疫４月龄蛋鸡,均在免疫后第４周,产生的ＮＤ和ＥＤＳ７６ＨＩ抗体水平达到峰值,前者产生的ＨＩ抗体价分别为１０．６ｌｏｇ２和９．４ｌｏｇ２,后者为１０．１ｌｏｇ２和８．７ｌｏｇ２。免疫后第５２周,二者产生的ＮＤ和ＥＤＳ７６和ＥＤＳ７６ＨＩ抗体价均维持在７ｌｏ     

蛋鸡非典型新城疫一例及其病原鉴定

１９９７年３月下旬，上海市郊区某蛋鸡场发生以产蛋下降为第一指征的非典型新城疫，通过临诊调查、抗体测定、病毒分离与鉴定进行了确诊。结果：感染鸡群产蛋下降的幅度可高达５０％；新城疫ＨＩ抗体滴度高达１２ｌｏｇ２或以上；用泄殖腔棉拭接种鸡胚的分离物用标准血清鉴定为新城疫病毒（ＮＤＶ），初代尿囊液的ＥＬＤ５０为１０－７．５（０．２ｍＬ），１日龄ＳＰＦ鸡胚脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）分别为１．７２５和２．３２，其毒力接近标准毒株—ＮＤＶ北京株Ｆ４８Ｅ９。     

鸡新城疫,减蛋综合征,传染性支气管炎三联油佐剂灭活苗的研究…

用新城疫病毒克隆７９株，减蛋综合征病毒ＮＥ４株和传染支气管炎病毒Ｍ１株分别接种于鸡胚和鸭胚，并收取其鸡，鸭胚尿囊液毒，经甲醛灭活，按一定经例配比，以矿物油为佐剂制成三联油佐剂灭活苗。本苗接种于产蛋后备鸡，免疫后７天产生免疫应答，免疫后３０天保护率达９０％－１００％，免疫后六个月攻毒，ＮＤ和ＩＢ保护率１００％，ＥＤＳ７６为９５％。１９９２－１９９４上半年，本苗在江苏，安徽，山东等省的一些鸡场免疫十万     

鸡新城疫和减蛋综合征异源二联灭活疫苗研究

将鸭源新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ＿（１０）株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ＿２株于同一鸭胚同时增殖，用甲醛灭活后加入１０号白油制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６异源二联灭活疫苗，简化了生产工艺，降低了成本，克服了鸡胚苗潜伏带毒的危险。经２０余万只鸡试用，表明该疫苗可有效预防ＮＤ和ＤＥＳ－７６。     

鸡新城疫——减蛋综合征二联油佐剂疫苗的研制

应用鸡新城疫（ＮＤ）ＬａＳｏｔａ株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）ＬＡ３株,分别接种鸡胚和鸭胚增殖病毒,血凝价分别达≥１：１２８０和≥１：１００００时,收取病毒,经福尔马林灭活,按一定比例加入吐温－８０、油佐剂制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６二联疫苗,经无菌检验、安全性试验、剂量选择、保护性试验、免疫效果和免疫期测定及保存期观察,结果表明：该二联苗安全性好,于蛋鸡开产前１月皮下注射１ｍＬ／只,２５ｄ后ＮＤ和ＥＤＳ－７６抗体可先后达到高峰,免疫期１年。保存期４℃为１年,２０℃为３个月。     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

地高辛标记的核酸探针检测EDS病毒的研究

地高辛标记的核酸探针检测ＥＤＳ病毒的研究王雪敏（邯郸农业高等专科学校牧医系河北永年０５７１５０）郑明球蔡宝祥陈溥言（南京农业大学动物医学院１材料与方法１．１地高辛标记的ＥＤＳ病毒核酸探针制备将ＥＤＳ病毒ＮＥ４株（南京农大传染病教研室提供）鸭胚尿囊液（...