产异甘露聚糖酶菌株的复合诱变

利用紫外线照射法、硫酸二乙酯(DES)法、60Co-γ射线辐照法对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)SKS4进行复合诱变处理,筛选到了1株产异甘露聚糖酶的蜡样芽孢杆菌SKS4360,使其发酵液酶活从1004U/mL提高到2026.6U/ML,而且其酶活力表现稳定.     

芽孢杆菌WY45产β-甘露聚糖酶发酵条件的优化

为获得最佳产酶配方，同时获得高活力的β-甘露聚糖酶，经碳源、氮源、碳氮质量比、初始pH和培养温度5个单因素发酵条件的优化，得到芽孢杆菌WY45发酵产β-甘露聚糖酶的最适发酵培养条件：以4g／L魔芋精粉为碳源，1．33g／L大豆蛋白胨为氮源，碳氮质量比为4／1，初始pH5．5，50℃培养时间96h。此条件下，β-甘露聚糖酶活性最高可达2800U／mL。     

产β一甘露聚糖酶细菌的筛选及产酶条件的优化

为了筛选高产卢一甘露聚糖酶的细菌菌株,利用刚果红染色法从土壤中筛选分离到l株产β一甘露聚糖酶菌株MM5。通过形态观察、生理生化试验及16SrDNA序列分析进行鉴定,确定其为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。菌株MM5产甘露聚糖酶的活力达到1594U／mL,以MM5为出发菌株,通过紫外诱变得到诱变菌株L...     

产β-甘露聚糖酶菌株育种及培养基优化

利用实验室筛选保藏最高酶活为10.7 U/mL的白腐真菌作为出发菌株,进行紫外诱变育种及培养基优化,以期提高菌株产β-甘露聚糖酶能力.结果表明,紫外诱变条件为孢子悬液浓度106～107个/mL,诱变时间10 min,此条件下的孢子致死率达78％,获得了13株正向突变株,经6代遗传稳定性试验证明UV-2突变株酶活最高,遗传稳定性最强,比出发菌株酶活提高了2.075倍.通过单因素试验确定了该突变株的最佳碳源、氮源分别为魔芋粉和硝酸铵,对酶活影响较大的无机盐为磷酸二氢钾.通过正交试验,确定了最佳产酶培养基为魔芋粉4.0 g/L、NH4NO3 5.0 g/L、KH2PO4 5.0 g/L、NaCl 1.0 g/L、MgSO4·7H2O1.0 g/L,在此条件下测得甘露聚糖酶最大酶活为46.17 U/mL,比优化前提高了40.3％.     

产甘露聚糖酶解淀粉芽孢杆菌的筛选鉴定及产酶条件优化

从海底淤泥中筛选出一株产高活性β-甘露聚糖酶的菌株,经16S rDNA序列分析表明,该序列与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的16S rDNA序列同源性为100％,将该菌株命名为Bacillus amyloliquefaciens T27.对该菌株产酶条件进行了优化,以魔芋粉为碳源,酵母粉为氮源,装液量为50 mL,250 r/min、37℃培养24h,发酵液中粗酶活力能达到98.0 U/mL.     

β-甘露聚糖酶高产基因工程菌株发酵条件优化

采用正交试验对1株基因工程菌株的种子培养基与发酵培养基进行优化。通过在3因素（碳源、生长素、无机盐）3水平上进行正交试验,确定种子培养基成分为：0.5%牛肉膏,0.5%葡萄糖,0.5%蛋白胨,0.35%NaCl,0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4;发酵培养基的成分为：0.5%牛肉膏,0.3%魔芋精粉,0.5%蛋白胨,0.35%NaCl,0.1%KH2PO4,0.05%MgSO4;产酶高峰时段为10～12 h之间,最适的发酵温度为35℃,最高酶活可达775 U/ml。     

3株产β-甘露聚糖酶菌株的分离和鉴定

从新疆极端干燥环境土壤样品中,以葡甘露聚糖(魔芋精粉)为唯一碳源,利用水解圈筛选法筛选到3株具有β-甘露聚糖酶活性的菌株.分别提取3株细菌基因组并经16S rRNA序列比对分析,确定3株菌分别属于芽孢杆菌(Bacillus sp.)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa).     

1株青霉固体发酵产酸性β-甘露聚糖酶条件优化

[目的]为产酸性β-甘露聚糖酶菌株的开发与应用提供技术依据。[方法]以1株青霉QM-1为出发菌株,通过单因素试验和正交试验对其固体发酵产β-甘露聚糖酶的条件进行优化。[结果]该株青霉产β-甘露聚糖酶的最适培养基配方为:0.5 g魔芋粉,20.0 g麸皮,1.5 g蛋白胨,0.3 gKH2PO4,0.03 gMgSO4.7H2O,初始pH值为5.5,反应pH值为5.8,含水量为60%。该株青霉产-β甘露聚糖酶的最适培养条件为:将在30 g基础培养基放在250 ml三角瓶中,接入菌种在35℃下培养3 d后,最高酶活力可达1 455.63 IU。[结论]当反应pH值为5.2～6.0时,-β甘露聚糖酶能维持较高的活性,这表明该菌所产β-甘露聚糖酶为酸性。     

芽孢杆菌N-6的鉴定及其产β-甘露聚糖酶最适条件的研究

为获得产酶量高、产酶快的菌株,采用碘液染色法从土样分离到1株产β-甘露聚糖酶量高的菌株Bacillussp.N-6,通过16 S rDNA序列相似性比较及生理生化性状鉴定为枯草芽孢杆菌;为得到最佳产酶配方进行了发酵条件优化。结果表明:100 mL培养基加入2 g魔芋粉、1 g酵母粉、1 g豆饼粉、起始pH 8.0、32℃150 r/min振荡培养18 h,产酶量最高,达316.53 U/mL。该酶在pH 5.0~9.0和40~55℃下稳定,作用最适条件pH 6.0和50℃。Co2 对酶有激活作用,Fe3 ,Ag 和EDTA对酶有较强抑制作用。     

多黏芽孢杆菌HD-1产β-甘露聚糖酶的条件优化

采用DNS比色法,通过单因素试验和正交试验对多黏芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)HD-1产β-甘露聚糖酶的培养基主要成分和培养条件进行优化。结果表明,该菌种产β-甘露聚糖酶的最适培养基为魔芋粉0.75%、酵母膏1.00%、磷酸二氢钾0.04%、硫酸镁0.05%,培养基初始p H 9.0;最适培养条件为接种量6%,培养温度31℃,培养时间27 h。在此优化条件下,多黏芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶活性可达72.6U/m L。     

硝基苯降解菌Bacillus cereus yc11-1的鉴定及降解条件优化

鉴定了从处理硝基苯废水的人工湿地中分离出的一株降解硝基苯的优势菌yc11-1,并采用中心复合设计法优化影响菌株降解硝基苯的因素来提高菌株对硝基苯的降解率.经形态学和菌株的16SrDNA序列分析,菌株yc1 1-1为蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus).该菌株降解硝基苯的最佳条件为初始硝基苯浓度84.84 mg/L、菌种投加量12.97％、培养温度29.4℃和pH 7.1,在此条件下理论降解率可达91.14％,实际降解率为90.58％.     

微囊化蜡样芽孢杆菌的喷雾干燥工艺优化

[目的]提高蜡样芽孢杆菌在压力喷雾干燥过程中的存活率,优化喷雾干燥工艺。[方法]以微囊化的蜡样芽孢杆菌为材料,考察进风温度、进料流量、料液比、喷枪孔径等对喷雾细胞存活数的影响。[结果]当进风温度为140℃,进料流量为1.5 t/h,料液比为1∶5,喷枪孔径为2.5 mm时,蜡样芽孢杆菌的存活率最高,达81%。[结论]该研究确定了蜡样芽孢杆菌的最佳喷雾干燥工艺条件。     

1株益生蜡样芽孢杆菌发酵培养基优化研究

[目的]通过优化蜡样芽孢杆菌的发酵培养基,提高蜡样芽孢杆菌的生物量。[方法]在初始发酵培养基的基础上,通过单因素试验和正交试验确定蜡样芽孢杆菌发酵培养基的最适碳氮源和碳氮比。[结果]优化后的发酵培养基为:葡萄糖15.00 g/L,可溶性淀粉40.00 g/L,蛋白胨10.00 g/L,玉米浆干粉30.00 g/L,硫酸铵3.00 g/L,磷酸氢二钾5.00 g/L,磷酸二氢钠5.00 g/L,硫酸镁1.25 g/L,硫酸锰0.60 g/L,氯化钙2.00 g/L。优化后蜡样芽孢杆菌在50 L不锈钢发酵罐中的发酵液活菌数达1.6×1010cfu/m L,较优化前提高了1个数量级。[结论]优化后的蜡样芽孢杆菌发酵培养基大大提高了该菌的生物量,为工业化放大生产提供了参考。     

木薯同步糖化发酵生产燃料乙醇的工艺优化

[目的]优化木薯同步糖化发酵生产燃料乙醇的工艺.[方法]在实验室进行发酵试验,通过前期单因素试验的结果选取了3个对发酵结果影响较大的因素：发酵时间、发酵温度、料水比按正交试验设计方案进行发酵条件的优化.[结果]试验表明,3个因素对木薯同步糖化生产燃料乙醇的影响作用的主次顺序为发酵时间、发酵温度、料水比;优化方案为：料水比1∶2.5 g/ml,发酵温度32℃,发酵时间54 h,优化后的发酵结果酒度达到了14.3％ （V/V）,原料转化率达到了30.7％.[结论]研究可为木薯发酵生产燃料乙醇提供理论依据.     

蜜蜂患白垩病虫体内一株球囊菌拮抗细菌的分离与鉴定

【目的】寻找抑制蜜蜂球囊菌的拮抗菌,用于白垩病的生物防治。【方法】利用细菌纯化技术从患白垩病的蜜蜂幼虫体内分离纯化了一株对蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)有抑制作用的细菌,并结合形态学、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析技术进行鉴定,同时通过蜜蜂体内、体外接种试验研究其对蜜蜂球囊菌的抑制作用。【结果】该细菌被初步鉴定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),它在培养基中能够完全抑制蜜蜂球囊菌的生长,但其发酵液对蜜蜂球囊菌的生长没有影响。将含菌饲料喂蜜蜂幼虫,蜜蜂幼虫的死亡率和生长发育没有受到影响,说明该细菌对蜜蜂幼虫没有致病性。蜜蜂幼虫体内同时接种细菌和球囊菌孢子,发现细菌对球囊菌在蜜蜂体内的萌发和初期菌丝的生长没有影响,蜜蜂依然能够患病,但生长后期该细菌能够降解球囊菌菌丝,对球囊菌子代孢子的产生表现出一定的抑制作用。【结论】 该研究结果为蜜蜂白垩病的生物防治提供了理论依据。     

淀粉液化芽孢杆菌抗菌脂肽发酵培养基及发酵条件的优化

 【目的】提高淀粉液化芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）发酵产脂肽类抗菌物质的产量。【方法】采用Plackett-Burman Design对影响B. amyloliquefaciens ES-2-4产脂肽类抗菌物质产量的13个因子进行筛选,在筛选结果的基础上,再运用Uniform Design（均匀设计）对关键因子的最佳水平范围进行研究,通过回归方程求解得到最高产量时各关键因子的最优组合。【结果】影响抗菌物质产量的关键因子为葡萄糖、L-谷氨酸钠、转速和温度;获得最佳产量时关键因子的最优组合为：葡萄糖(42 g•L-1)、L-谷氨酸钠(14 g•L-1)、温度（27℃）、转速（200r/min）,在此条件下,产量从优化前的4.84 g•L-1 提高到了6.76 g•L-1,增长了39.7%。【结论】B. amyloliquefaciens ES-2-4抗菌脂肽发酵培养基筛选与优化的过程中,采用Plackett-Burman Design和Uniform Design相结合的方法,效果显著,经济有效。     

一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

[目的]筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌.[方法]筛选芽胞杆菌,显微镜观察其菌落形态,生理生化鉴定,测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力.[结果]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023.该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml.[结论]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023,为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础.     

兜兰属植物ISSR-PCR反应体系的优化

以兜兰为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,采用正交试验设计,分析Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和Taq DNA聚合酶用量对ISSR-PCR扩增的影响,并通过梯度PCR确定最佳退火温度,最终建立兜兰ISSR扩增反应体系。最佳反应体系为:25μL体系中,含10×PCR buffer 2.5μL、1.5mmol/L Mg2+、0.15mmol/L dNTP、0.6μmol/L引物、1.0 UTaq酶和40 ng模板DNA。反应程序为:94℃5 min,94℃30 s,56.2℃45 s,72℃1 min,共40个循环;72℃延伸7 min。     

地衣芽孢杆菌发酵培养基的优化

[目的]对地衣芽孢杆菌发酵培养基进行优化,并在此基础上确定最佳培养条件,为实现其工业化生产提供参考。[方法]借鉴谷春涛等关于地衣芽孢杆菌TS-1液体培养发酵条件的研究成果,对培养基进行澄清,并运用单因素试验和4因素3水平正交试验对其培养基进行改进,对地衣芽孢杆菌发酵条件进行优化以得到其最佳温度、pH值和接种龄。[结果]4种因素对地衣芽孢杆菌发酵影响的显著性次序为：玉米浆〉豆饼粉浸汁〉蛋白胨〉葡萄糖。培养基的最佳配比为：玉米浆0．45g,蛋白胨1．50g,豆饼粉浸汁为1：15,葡萄糖1．50g。最适宜种龄为18h,接种量8％,起始pH值7．5,最佳温度37．5℃,此条件下地衣芽孢杆菌对数生长期在14～20h,发酵周期为22～24h。活菌数每单位提高近1亿个,发酵周期比经验周期缩短10h。[结论]试验得出了地衣芽胞杆菌发酵培养基的最佳配比及最佳培养条件,在此条件下培养,收获菌体量大大提高,降低了生产成本,更有利于其大规模工业化生产。