表达黄瓜花叶病毒外壳蛋白的转基因番茄及其对CMV的抗性

利用根瘤土壤杆菌Ｔｉ粒转化系统，采用叶盘法将ＣＭＶ－ｃｐ基因转入番茄细胞中，获得４２株转基因植株，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测，证明ＣＭＶ－ｃｐ基因已进入番茄核染色体中，并能正常表达。通过对转基因植株Ｒ１和Ｒ２代苗期人工接种ＣＭＶ鉴定，发现ＣＭＶ－ｃｐ基因产物对ＣＭＶ有一定抗性，其抗性遗传符合孟德尔－对基因控制性状的遗传规律并能稳定遗传。     

山西省马铃薯Y病毒cp基因的克隆

[目的]对山西省马铃薯Y病毒cp基因进行克隆与序列特征分析。[方法]依据马铃薯Y病毒基因组序列,设计合成了一对引物PVYP1和PVYP2,以从山西省获得的带毒马铃薯叶片总RNA为模板,对RT-PCR扩增得到的基因片段进行序列测定。[结果]该DNA片段1～798bp为马铃薯Y病毒印基因,799～1064bp为3’非编码区序列,可编码265个氨基酸。将RT—PCR产物与载体连接后转入大肠杆菌提取阳性克隆的质粒DNA,酶切后琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,重组质粒已转入大肠杆菌。BLAST软件分析表明,山西省马铃薯Y病毒分离物CP氨基酸序列与已公布的PVY CP氨基酸序列相似性最高可达100％,说明所得DNA片段确为PVY cp基因片段。[结论]该研究为对山西省马铃薯Y病毒的防治提供理论依据。     

番茄对青枯病的抗性遗传研究

以感病材料98TL－1（P1）、L－402母本自交系（P3）、高抗青枯病自交系LS89（P2）及抗、感材料配制杂交组合和回交世代为试材，进行番茄抗青枯病遗传机制研究。结果表明：抗病基因对感病基因表现为部分显性。控制LS89番茄抗青枯病自交系的遗传是一个基因，或者一个基因起主导作用。番茄青枯病抗性遗传受核基因控制，细胞质基因对其影响不大。     

不同番茄材料黄化曲叶病毒病抗性评价及抗性基因检测

以15份自育的无限生长型番茄材料为试材,抗番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)品种‘齐达利’和感病品种‘Money Maker’(MM)为对照,采用苗期农杆菌接种法,研究接种黄化曲叶病毒后的病情指数,幼苗叶片防御酶活性的变化,不同基因型番茄材料的抗性水平。结果表明:853、857、867表现为免疫;817、842表现为高抗;805、818、819、820、841表现为中抗;801、802、803、822为感病。853、857、867的防御酶(PAL、PPO、POD)活性在发病初期均达到峰值,且整体高于其他接种材料,其他接种材料酶活性峰值则出现较晚。含抗性基因的接种材料均表现出不同程度的抗性,含有纯合 Ty-1和 Ty-3基因的853、857、867对TYLCV抗性更高。经综合评价,853、857、867可作为抗番茄黄化曲叶病毒病的优良番茄材料,817、842可作为备选材料。     

番茄种质材料对南方根结线虫抗性鉴定

采用盆栽接种2龄幼虫法,对4份番茄种质材料进行抗南方根结线虫鉴定,并对其有关生理生化指标进行观测。结果显示,番茄种质材料无限生长（红色）和Bss368对南方根结线虫表现为抗性,红吉星和大明星表现为感病,具体表现为抗性材料根际线虫量及根结数比感病材料少,根际线虫高峰期比感病材料晚;感病材料地上部分生长受抑制明显,根冠比高于抗病材料;抗病材料过氧化物酶（POD）活性高,积累量大,能及时阻止线虫的侵染。     

番茄种质材料对南方根结线虫的抗性鉴定及Mi-1基因检测

采用盆栽接种2龄幼虫法,对6份番茄Solanum lycopersicum种质材料进行了对南方根结线虫Meloidogyne incognita的抗性鉴定。结果表明:供试的番茄材料对南方根结线虫的抗性存在差异,其中,高抗材料4份,抗病材料1份,感病材料1份;采用酶切扩增多态性序列(Cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS)方法对番茄抗性材料进行Mi-1基因检测,发现TY52、T27和Bss368 3份材料不含Mi-1基因,无限生长(红色)和T24含有Mi-1基因。     

番茄种质资源黄化曲叶病毒病抗性的鉴定与评价

鉴于目前商业番茄品种黄化曲叶病毒病抗性难以甄别,对86份番茄种质的番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)抗性基因进行PCR检测并进行田间抗病性鉴定。结果表明,目前抗TYLCV番茄种质抗性基因主要是Ty-1/ty-1和Ty-1/ty-1+Ty-3a/ty-3,2种类型抗病种质(19份、23份)分别占总抗病种质(61份)的31.15%和37.70%。在仅含有Ty-1基因的25个番茄种质中,有80.00%田间表现抗病,而同时含有Ty-1和Ty-3a 2个基因的26个番茄种质中,田间抗病率达100%,说明抗性基因具有累加效应。通过抗性基因PCR方式进行抗病检测,准确率达到81.40%。同时推荐了M-17号、达丽等25份抗TYLCV番茄优良品种。     

印迹法用于鉴定番茄青枯病抗性的初步研究

对7个番茄品种和2个对照材料接种青枯病菌后用印迹法检验，并与常规田间抗病性鉴定法进行比较，结果表明植株在距离根茎部向上25cm处青枯病菌的检出率高、低与田间植株的感、抗性基本对应，据此认为在不利于青枯病发生的低温季节，印迹法可用于抗病性鉴定。     

海藻提取物防治番茄CMV病毒效果及其机理研究

探讨了海藻提取物对番茄CMV病毒的防治作用,结果表明:海藻提取物对CMV有很好的体外钝化效果和预防CMV侵染的作用,其中以3.0g.L-1的浓度较为合理;番茄接种CMV病毒后施用海藻提取物,病株的SOD、POD酶活性明显升高,并明显降低了病株的病毒含量,降低了病毒对叶绿体的破坏。     

三七Y病毒部分ci基因和cp基因的克隆及序列分析

对云南文山地区三七上获得的三七Y病毒(Panax virus Y,PnVY)不同分离物进行了部分ci基因和cp基因的克隆及序列分析,获得的部分ci基因长657 nt,编码219个氨基酸;获得的部分cp基因长834 nt,编码278个氨基酸。所获得的11个PnVY分离物的ci基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为80.8%~99.8%和91.3%~100%,与其他PnVY分离物的同源性分别为80.8%~98.8%和92.7%~99.5%。所获得的18个PnVY分离物的cp基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为91.8%~99.9%和93.9%~100%,与其他PnVY分离物的同源性分别为92.0%~100%和95.7%~100%。系统进化树分析表明,基于ci基因可以将PnVY分为2个大组,第Ⅱ组分离物之间的差异相比第Ⅰ组的复杂;基于cp基因可以将PnVY分为3个大组,第Ⅲ组分离物之间差异最大。基于ci基因和cp基因的分析结果均表明,PnVY不同种群间存在较为丰富的遗传多样性,但尚不清楚PnVY的分子变异是否与PnVY引起的多种症状类型有关。     

番茄叶霉病抗性鉴定与遗传分析

本研究以抗病亲本P2（1021217-3）和感病亲本P1（010712）为基本材料,通过有性杂交、自交和回交,获得P1、P2、F1、F2、BC1P1和BC1P2等6个世代的番茄材料,并以番茄叶霉病生理小种1.2.3为病原菌,进行室内若干接种鉴定,以探讨抗源对叶霉病的抗性遗传规律。结果表明,在接种后15 d左右,感病植株开始发病,接种后30 d时感病植株已充分发病;各世代抗感植株表现出规律性分布;卡方测验结果显示,抗源材料021217-3对番茄叶霉病生理小种1.2.3的抗性表现为单基因显性。     

应用RT-PCR检测番茄上的CMV和ToMV

建立了广东番茄花叶病主要病原CMV和ToMV的RT-PCR检测技术。应用该技术对采集于广东番茄主要产区的病样本进行检测,结果表明：10个采样地点中均检测到CMV,仅2个点检测到ToMV;在所采集的49个病样本中,CMV和ToMV所占的比例分别为79．6％和12．2％,说明广东番茄花叶病毒原主要是CMV,其次是ToMV。     

福建省番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定分析

为了对福建省发生的番茄黄化曲叶病毒病的病原进行分子鉴定,并对其病原分子的变异和进化情况进行分析。根据已知的番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)基因组序列设计特异引物进行PCR扩增,对获得的特异性片段回收、克隆并测序,结果表明,PCR分子标记反应扩增到541bp的特异性条带,将该特异性产物经回收和纯化并进行克隆与测序,测序结果经BLAST比对后,表明该分离物的序列与国内外的病毒序列相似度为97%~99%。试验结果表明福建省的5个地市的番茄均已被番茄黄化曲叶病毒病危害,应当加强防治。     

番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒复合侵染的分子鉴定

以番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)及番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)为对象,用分子检测方法对山东、安徽2省病原进行鉴定。选取山东、安徽2省7个地区,对2种病毒病进行田间调查,采集疑似样品扩增序列,对其进行同源性比对和遗传进化树等分析,进一步了解山东、安徽2个省蔬菜产区2种病毒病的发生情况。结果表明,YLCV在山东省大部及安徽省局部地区已经发生扩散且中国所有的分离物仍属于IL株系。明确了ToCV在安徽地区发生,且统计发现2个省6个地区ToCV、TYLCV存在单独侵染及复合侵染。ToCV分离物均可分为2个大组,其中该研究所得到的分离物均与中国其他地区的分离物聚类到一组。     

转CMV—CP基因番茄后代的田间抗病性

以土壤农杆菌为介导，用叶盘法转化获得的转ＣＭＶ－ＣＰ基因（黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因）番茄工程植株，通过连续选择和自交，得到Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４和Ｒ５代的转化番茄植株。１９９３－１９９４年采用人工接种和田间自然发病两种方式鉴定转化植株对ＣＭＶ病毒的田间抗性。结果表明，转基因番茄植株对ＣＭＶ侵染有高度抗性。人工接种Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４代转化植株的防病效果达５０－７３％。有５０％以上的转基因植株始终     

不同番茄品种对TY病毒的抗性评价

为评估不同番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病的抗性水平和商品价值,采用田间大棚自然传毒接种鉴定法,比较不同番茄品种的发病率、病情指数,并结合糖度、硬度、维生素C质量分数及产量等指标,综合分析34个番茄品种对番茄黄化曲叶病毒病的抗性和商品性。结果表明,不同品种对番茄黄化曲叶病毒病的抗性差异显著,其中,大番茄有3个免疫品种,分别为布鲁尼1288、DRW 7728、西农2011;高抗品种有1个,为惠裕;中抗品种有3个,其他均为感病品种;免疫及高抗品种占参试品种的18.18%。圣女果免疫品种有4个,分别为抗TY千禧、美红、圣桃3号、黄仙女;高抗品种有1个,为粉秀;免疫及高抗品种占参试品种的41.67%。对番茄品质的综合比较显示,抗病性强、品质优、丰产性好的番茄品种少,难以满足生产需要。