一株犬种布鲁氏菌的鉴定及毒力测定

对分离到的一株疑似犬种布鲁氏菌进行生物特性和基因型鉴定,并用宿主实验动物(比格犬)测定了最小感染量和脾含菌量。通过形态与染色特性、培养特性、血清学特性、生化特性鉴定,及Multi-PCR、16S rRNA测序,表明该分离株为犬种布鲁氏菌,其对比格犬的最小感染剂量为10₅?CFU/ mL,对应的脾含菌量为4×10₅-3×10₆?CFU/g。     

猪种布氏菌C73强毒株与S2菌苗株感染种猪的血清学鉴别诊断研究

广西是猪种布氏菌病流行的疫区.我们坚持以"检疫、免疫、淘汰病猪、推广人工授精"为主的综合措施防制猪布氏病,有效控制该病疫情.但在疫区应用猪型布氏菌二号弱毒菌苗免疫种猪,影响了猪布病的血清学诊断和对布病疫情的监测.为此,我们对猪种布氏菌强毒菌株C73攻毒和弱毒苗S2免疫种猪血清学反应进行了研究,通过对抗体消长的分析,提出了鉴别布氏菌免疫反应与强毒感染的合理检疫时间.     

布氏菌病活疫苗（Rev.1株）冻干保护剂工艺的研究

布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺借鉴、采纳布氏菌病活疫苗(S2株)成熟的冻干工艺及菌液的配比,对冻干保护剂的选择进行了优化。我们选择蔗糖明胶保护剂和蔗糖脱脂乳保护剂,保护剂与布鲁氏菌Rev.1株菌液以16的比例混合,冻干后测定其活菌含量。结果显示,3批使用蔗糖脱脂乳保护剂的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12×10^9CFUmL、12.44×10^9CFUmL、12.65×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶再加入终浓度约1%硫脲的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.34×10^9CFUmL、12.62×10^9CFUmL、12.91×10^9CFUmL;使用蔗糖明胶的不同配比比例的冻干疫苗活菌数分别为12.22×10^9CFUmL、12.64×10^9CFUmL、12.8×10^9CFUmL。3种冻干保护剂对冻干疫苗的活菌含量影响无明显差异,但使用蔗糖明胶保护剂制备冻干疫苗时加入适量硫脲可适当增加冻干疫苗的耐热性,因此我们选择10%明胶、20%蔗糖冻干保护剂与菌液以1∶6配比比例混合,再加入终浓度约为1%的硫脲作为布氏菌病活疫苗(Rev.1株)的冻干工艺。     

不同种型布鲁菌标准株的比较基因组学研究

探究不同种型布鲁菌标准株的基因组构成差异。通过布鲁菌全基因组DNA芯片技术对19株不同种型布鲁菌标准株进行比较基因组学研究。结果显示：19株不同种型布鲁菌标准株之间存在大量缺失基因,同时发现一些基因以多拷贝形式存在。缺失基因的功能大致分为4类：信息储存和传递;胞内活动处理;营养代谢、功能未知或仅了解部分功能,共鉴定到这类基因211个。深入认识了19株不同种型布鲁茵标准株基因组组成上的差异,为我们进一步认识不同种以及亚型在毒力以及宿主特殊性提供了依据。大量缺失基因在19株布鲁菌标准株出现,构成了布鲁菌标准株不同种以及亚型之间的遗传学基础。     

布氏艾美耳球虫保定株早熟系的免疫原性研究

经过20代的选育,选育出了布氏艾美耳球虫保定株早熟系虫株,该早熟系虫株与亲本株均对常见的抗球虫药物-克球素、地克珠利、磺胺喹噁啉和尼卡巴嗪高度敏感,敏感性与保定亲本株一致;分别接种200个该早熟系虫株和亲本株孢子化卵囊,21d 后鸡群均能抵抗1.0×10^5个布氏艾美耳球虫强毒株孢子化卵囊的攻击,说明早熟株仍然保持良好的免疫原性。     

一株犬种布鲁氏菌的分离与鉴定

对从一只流产贵宾犬全血中分离到的一株布鲁氏菌进行了形态结构、培养特性、生化特性研究以及凝集试验鉴定和多种属聚合酶链式反应(AMOS-PCR)鉴定.结果表明,分离菌为革兰氏阴性菌,在胰际琼脂培养基生长并呈典型的粗糙型布鲁氏菌菌落,菌落能被结晶紫溶液染成紫色.分离菌在琉瑾和复红培养基上生长,不产生H2S,与粗糙型布鲁氏菌阳性血清凝集,与光滑型布鲁氏菌阳性血清无凝集.用AMOS-PCR方法对分离菌进行鉴定,该分离菌具有犬种布鲁氏菌特有条带.鉴定结果表明分离菌符合犬种布鲁氏菌特性,将其命名为B.canis GB1.     

犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因的原核表达

克隆了犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31基因并构建原核表达系统,并对表达产物进行了初步的血清学鉴定。利用PCR技术扩增犬布氏杆菌RM6/66参考株Omp31基因,然后将其克隆到pGEMT-easy载体上进行测序。测序正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达融合蛋白,Western blot分析融合蛋白的免疫反应性。结果构建了犬布氏杆菌Omp31基因的原核表达载体pET-Omp31,并且在大肠杆菌中成功表达融合蛋白,经Western Blot鉴定该蛋白能被犬布氏杆菌阳性血清所识别。犬布氏杆菌外膜蛋白Omp31的表达成功,为犬布氏杆菌病血清学诊断方法的建立提供了基础资料。     

制品生产用及地方疑难布氏菌DNA基因同源性的研究

本文以布氏菌19株国际标准菌种为对照,对国内外实验室参考菌种14株及地方疑难菌种11株结合常规方法进行了DNA G+Cmol％测定,同时以羊种菌M16 DNA为标准,与布氏菌所有种和型的24个代表株及8株地方疑难菌种进行了DNA-DNA杂交测定,布氏菌及地方疑难菌种的G+Cmol％值范围为54.1～59.3,M16株与布氏菌参考菌种的杂交率81.7～109％,与地方疑难菌种的杂交率除一株为72.1外,其余为84.2～109％,属高度同源,鉴定为布氏菌。本试验首次使用进口新仪器“PEKIN LAMBDA 17UV/Vis SPECTROPHOTOMETER”采用热变性法测DNA G+Cmol％,复性速率法进行DNA-DNA杂交,使杂交的DNA样品变性和复性在同一比色杯中进行,省去半导体点温计操作带来的麻烦,减小了实验误差,缩短测时,结果精确、操作简便、重复性好。     

不同种布鲁氏菌弱毒株对BALB／C及昆明小鼠抗体形成细胞作用的比较研究

弱毒羊种布氏菌M_5,弱毒猪种布氏菌S_2及弱毒牛种布氏菌S_(19)感染两种品系小鼠10天及21天对抗体形成细胞(PFC)的作用表明:三种布氏菌对BALB/C小鼠均有不同程度抑制PFC的作用。而用昆明鼠试验时,布氏菌M_5及S_2对PFC也有抑制作用,但牛种S_(19)则无此作用。资料证明虽用同一菌种同一菌量,但由于动物品系不同,其对PFC的作用也是不同的。     

中、西蜂纯种及其不同品系蜂的基因组DNA多态性分析

使用P8(5‘-CCCACCCTTG-3‘)和W2（5‘-CGGCCCCGGT-3‘)随机引物，通过PRAPD（Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR(polymerase chain reaction)遗传学分析，分别对中、西纯种蜂的不同品系的基因组DNA进行多态性分析。结果：中、西纯种蜂的不同品系的DNA多态4性图谱均具有明显的差异，从而为中、西纯种蜂的品系之间的鉴别提供了科学依据。     

显微注射外源DNA等因素对小鼠原核胚体外发育影响的研究

本文探讨了显微注射不同浓度的ＤＮＡ以及温度,培养皿,石腊油和观察次数等培养条件对小鼠原核胚体培养发育能力的影响。显微注射１．５ｎｇ／μｌ,１５ｎｇ／μｌ和５０ｎｇ／μｌ的外源小鼠乳清酸蛋白和人蛋白Ｃ的融合基因,使原核胚发育到囊胚的比率依次降低,分别为６０％,３７％和１３％。     

惠州高尔夫球场天堂草叶疫病菌鉴定及防治药剂的初步筛选

对广东惠州高尔夫球天堂草４１９号的叶疫病进行了病原鉴定及防治药剂的筛选研究,根据病草症状,分离菌培养性状及形态和致病性测定结果,诊断该病出夏威夷双极霉（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓｈａｗａｉｉｅｎｓｉｓ）所致,扑海因,特克多,甲基托布津,多菌灵,代森猛锌,好生灵,百菌清等７种药剂的室内毒力测定结果表明,扑海因对病菌菌丝生长的抑制作用最强,代森猛锌次之,对病菌孢子萌发的抑制作用则以百菌清最好,代森猛锌次之。     

水牛巴贝斯虫病病原—牛巴贝斯虫体外培养的研究

本研究采用微气静相培养技术,对一株采自人工感染的去脾脏水牛犊的牛巴贝斯虫(Babesia bovis)进行了80天的连续体外培养·继代26次,累积增殖6.51×10~((?))倍;累积稀释2.19×10~(35)倍。培养24小时红细胞的染虫率为2.63±0.50％;48小时为7.18±1.39％;72小时为20.78±4 52％。最高红细胞染虫率达33.50％。体外培养的牛巴贝斯虫与采自病牛血液内的牛巴贝斯虫形态一致,说明已建立了水牛巴贝斯虫病病原——牛巴贝斯虫的体外培养。 对影响牛巴贝斯虫体外培养的几种因素进行的实验结果表明:培养液pH值显著地影响虫体的繁殖,最适的体外连续培养的pH为7.2;合适的血清浓度为40％;血清灭活后,支持牛巴贝斯虫生长繁殖的能力明显降低;脱纤血分离的血清和自然凝固血析出的血清用于培养的效果相同;RPMI-1640和TCM-199培养液支持牛巴贝斯虫生长繁殖的能力没有差异。     

山西白羊草灌丛草地牧草产量动态研究

对山西白羊草灌丛草地牧草产量动态进行了研究，经３年的定位研究其结果表明，白羊草灌丛草地牧草产量的季节动态规律较稳定，各年度动态曲线均呈单峰型，高峰值出现在８月份，峰期后牧草产量下降较缓慢。牧草营养物质的变化，生长前期粗蛋白质含量高随生育期进展而逐渐减少，粗纤维含量则相反，粗蛋白质产量高峰期在８月，这与干草产量的峰值正好吻合，此时正是该类草地利用的最佳时期。     

三江源地区人工增雨量对牧草产量贡献率的评估方法探讨

运用区域历史回归分析的方法,选用1989~2005年6~9月期间三江源地区4个监测站点的牧草产量资料和降水资料,分析了牧草产量和降水量之间的相关关系。结果表明:降水量与牧草产量的相关系数显著性水平<0.05,并在此基础上建立了评估人工增雨量对牧草产量贡献的回归方程。计算表明:在三江源地区夏季(6~9月)通过人工影响,区域内每增加平均降水量10mm,即可在三江源地区增加区域平均牧草产量315kg/hm2。     

肉仔鸡饲喂枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)效果的研究

研究了两种不同枯草芽孢杆菌对660只艾维茵肉仔鸡的生产性能和对仔鸡肠道微生物菌群的影响。试验将仔鸡随机分为4组:不饲喂药物添加剂的对照组、添加乳酸—粪链球菌的正对照组及添加不同枯草芽孢杆菌的两个试验组Ⅰ、Ⅱ。 结果表明,添加枯草芽孢杆菌可使三周龄仔鸡体重略高于对照组,但差异不显著。添加枯草芽孢杆菌A16的试验组Ⅱ的饲料转化效率比对照组显著提高(P<0.05);试验组Ⅰ与对照组相比,可显著地增加肠道中有益菌(乳酸杆菌)的数量(P<0.05),减少有害菌(沙门氏菌)的数量(P<0.01),但对大肠杆菌数量的影响不显著。     

ECHOCARDIOGRAPHIC DIAGNOSIS OF TRANSPOSITION OF THE GREAT ARTERIES IN A NEONATAL FOAL

The clinical and echocardiographic findings in a 19-h-old female foal with a ventricular septal defect, patent foramen ovale, patent ductus arteriosus, and complete transpositon of the great vessels are described. Clinical signs were suggestive of complex congenital heart disease and echocardiography of the foal allowed definitive diagnosis prior to postmortem.