禽源布利丹沙门菌的鉴定及耐药性分析

本试验从临床送检的病料中分离得到3株革兰阴性杆菌,对分离菌进行分离培养,观察生长特性,进行生化特性和药物敏感性鉴定,对其进行了invA鉴定后确定为沙门菌,后对其进行沙门菌血清型鉴定,鉴定结果表明,该菌为布利丹沙门菌,血清型模式为O9,12:H:g,m,q。药敏试验显示,分离株对庆大霉素、头孢噻肟、舒巴坦、左氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考有较高的敏感性,对多粘菌素B、链霉素有较高的耐药性。     

海兰褐蛋鸡感染鸡伤寒沙门菌的诊断

某蛋鸡养殖场90日龄海兰褐蛋鸡疑似沙门菌感染,为确定病原,对该鸡群随机采血,通过平板凝集试验进行鸡白痢-鸡伤寒沙门菌的血清学诊断,同时,无菌采取病鸡肝脏进行了细菌分离培养、生化鉴定及药敏试验。结果,血清阳性率达54.5%,分离菌在麦康凯琼脂上形成无色、透明、有光泽的圆形菌落,能发酵甘露醇、甘露糖、蕈糖、果糖、麦芽糖,不能发酵乳糖、棉子糖、蔗糖,鸟氨酸脱羧试验阴性,符合鸡伤寒沙门菌的生化特性。分离菌对头孢吡肟、头孢噻肟、氟苯尼考及丁胺卡那敏感,而对环丙沙星、氧氟沙星及强力霉素等耐药。表明该鸡群受到了鸡伤寒沙门菌的感染,采取了综合防治措施,病情得到有效控制。     

禽沙门菌分离鉴定方法的建立与优化

本研究旨在建立和优化禽沙门菌分离鉴定的方法。选择山东省某地方品种鸡疑似发生沙门菌病的未出壳死胚样品24份,通过4组不同的培养基组合比较沙门菌的分离情况,选择沙门菌通用引物两对和鸡白痢特异性引物一对进行分离株的PCR检测,比较其特异性,然后进行血清分型和MLST分型,确定沙门菌类型并研究其相关性。结果表明,该批样品中TTB比SC增菌效果好,XLD和XLT4选择培养基对沙门菌分离效果相同,最终通过PCR方法鉴定出沙门菌阳性率为58.3%;发现两对通用引物特异性一致,表明可任选一对引物进行PCR鉴定;用鸡白痢沙门菌特异性引物完成的PCR鉴定结果显示,14株沙门菌中有7株为鸡白痢沙门菌;血清型鉴定结果表明,14株沙门菌中有7株鸡白痢沙门菌、7株肠炎沙门菌,共两种血清型;MLST分子分型结果表明,14株沙门菌分为3个ST型,分别是7株ST11、3株ST92和4株ST2151,其中ST11为肠炎沙门菌,ST92和ST2151为鸡白痢沙门菌;本研究表明,疑似沙门菌感染样品经BPW和TTB增菌、XLD或XLT4选择培养基分离培养,最后通过PCR方法可准确完成沙门菌的分离鉴定;同时,应用该方法可完成对鸡白痢沙门菌的鉴定,并与血清分型和MLST分子分型结果一致。     

猪源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为确定江西2个规模养猪场患病死亡仔猪的病因,通过病理剖检、常规细菌学检查,从采集的病料中进行病原菌的分离鉴定,并利用动物试验和药敏试验,确定分离菌的致病性和敏感药物。结果表明,6株分离菌均符合鼠伤寒沙门菌的生物学特性,分离菌可在48h内致死小鼠,分离菌的耐药性较强,对阿米卡星、卡那霉素、头孢噻肟较敏感,对另外9种抗生素低敏或耐药。确定2个猪场仔猪发病的主要致病菌是鼠伤寒沙门菌。     

肠炎沙门菌icdA基因缺失株的构建及重要特性分析

为研究肠炎沙门菌异柠檬酸脱氢酶(IDH)的功能,本研究利用λ-Red重组技术构建了肠炎沙门菌IDH编码基因icdA缺失突变株c50336ΔicdA,对其进行生长和生化特性检测,并通过体外模拟应激试验、药敏试验、生物被膜检测、抗蛋清杀伤、胞内存活和动物感染实验,分析icdA基因在肠炎沙门菌致病机制中的重要作用。研究结果显示,icdA基因缺失不影响肠炎沙门菌的生长特性和生化特性,在热应激(42℃)、酸应激(pH3.5)和高渗应激(NaCl2.4mol/L)条件下其存活率也未出现显著变化,但icdA基因缺失能够显著降低肠炎沙门菌对碱、低渗透压和过氧化氢应激的抵御能力,降低肠炎沙门菌对多粘菌素B的耐药性和生物被膜的形成能力;同时,该基因缺失能够降低肠炎沙门菌对蛋清杀伤的防御能力、在巨噬细胞内的存活能力和其对小鼠的毒力。研究结果表明icdA基因参与肠炎沙门菌的抗应激能力、耐药性、生物被膜形成和抗蛋清杀伤能力,从而影响细菌的毒力。本研究为肠炎沙门菌疫苗的研究奠定了重要基础。     

运用OD值对常见畜禽腹泻病原菌计数的研究

本研究就畜禽常见腹泻病原菌的生长特性、细菌悬液浊度和细菌计数之间的关系进行探讨，通过对常见畜禽腹泻病原菌大肠杆菌(O8型和O139型)、鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和鸡伤寒沙门菌不同培养时间段吸光度(optical density,OD)值的测定，结合平板活菌计数法来确定这5种细菌的生长曲线，并对细菌浊度和细菌计数相关性进行统计分析，发现极显著相关(P <0.01)，建立了5种细菌在生长期和稳定期的OD值-细菌数对数的曲线回归方程，O8型大肠杆菌：y=2.55x+6.72(r²=0.96);O139型大肠杆菌：y=1.45x+8.77(r²=0.95)；鸡伤寒沙门菌：y=4.50x+7.02(r²=0.95)；鼠伤寒沙门菌：y=5.59x+7.67(r²=0.97)；鸡白痢沙门菌：y=9.72x+6.60(r²=0.98)。利用该回归方程可快速准确地确定菌液浓度，为探讨细菌的培养特性、致病机制及动物实验中攻毒剂量的确定等相关实验提供参考依据。     

我国鸡源沙门菌血清型和耐药性及其耐药机制的研究进展

沙门菌作为我国重要的食源性病原菌,不仅威胁家禽养殖业的持续发展,也严重威胁着人类健康。沙门菌血清型种类众多,不同血清型对鸡的致病性不同,确定沙门菌血清型对沙门菌病的针对性治疗具有重要意义。抗菌药物的大量使用和滥用,导致沙门菌对特定抗生素的耐药性增高,并出现多重耐药菌株,通过对沙门菌耐药机制的分析有助于寻找新的临床耐药沙门菌株治疗的方法。文章通过对鸡沙门菌的血清型、耐药性以及常用于治疗沙门菌病的β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类抗菌药物耐药机制的研究进展进行阐述,以期为我国鸡沙门菌病的防治提供参考。     

藏鸡源食窦魏斯氏菌的抑菌特性研究

为了解藏鸡源益生菌的抑菌特性,选用10只体质健康的1月龄藏鸡作为益生菌的分离来源。以肠炎沙门菌(Salmonella enterica)为指示病原菌,通过琼脂扩散试验对分离菌株进行抑菌特性判定,共筛选到6株具有抑制肠炎沙门菌生长繁殖的菌株,抑菌圈直径均在8~28 mm之间,其中从小肠黏膜中分离到的食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)的抑菌圈直径高达276 mm,明显高于其他菌株和常用抗生素。将该菌株命名为WT1,并对WT1的抑菌特性和生物学活性进行深入研究。结果显示:WT1所产细菌素作用肠炎沙门菌8 h后,肠炎沙门菌大量死亡;基因序列分析显示,WT1益生基因entA;WT1具有良好的热稳定性和耐酸性。研究表明,藏鸡源食窦魏斯氏菌具有良好的抑菌特性和生物学活性,可以用于家禽肠炎沙门菌感染的治疗,在一定程度上缓解抗生素的负面影响。     

同时感染雏鹅的两种血清型沙门菌分离鉴定及遗传进化分析

为了解鹅源沙门菌的病原学特性,本研究从一发病雏鹅体内分离到2株细菌,根据培养特性、染色镜检、生化试验、PCR检测及血清学分型结果鉴定,分离菌分别为鼠伤寒沙门菌与印第安纳沙门菌。药敏试验表明,2个沙门菌分离株均为多重耐药菌株,其中鼠伤寒沙门菌耐3种药物(耐药率16.7%),而印第安纳沙门菌耐12种药物(耐药率66.7%);2个分离株均对头孢曲松钠、呋喃唑酮、多粘菌素B及链霉素表现高度敏感。对分离菌株16S r DNA基因进行扩增测序后,与Gen Bank登录的22株不同血清型沙门菌序列进行比较,构建系统进化树,结果显示:2个分离菌株具有较高同源性,与大多数泛嗜性血清型亲缘性较近,而与鸡沙门菌感染密切相关的血清型亲缘性相距较远。本研究为鹅沙门菌病的流行病学调查积累了数据,也为临床防控提供了试验依据。     

LAMP技术快速检测食源性沙门菌hisJ基因方法的建立

为建立一种快速检测食源性沙门菌的环介导等温扩增(LAMP)方法,依据Gen Bank公布的沙门菌属hisJ基因序列,利用Primer Explorer软件设计LAMP扩增所需引物,通过LAMP反应条件的优化,建立沙门菌LAMP快速检测方法。选取鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌、伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌及其他6种常见食源性细菌进行特异性试验,并对其灵敏性进行了评价。针对hisJ基因建立的LAMP方法,在63℃水浴1 h便可完成沙门菌的有效扩增,该方法的灵敏度达到102cfu/mL,高于PCR方法 100倍,特异性试验结果显示只有沙门菌LAMP扩增结果呈阳性。本研究建立的沙门菌hisJ基因LAMP检测方法具有较强的特异性及灵敏性,可用于食品中沙门菌的快速检测。     

鸭源沙门菌的分离鉴定及分型研究

为了解徐州地区鸭源沙门菌的感染情况,对徐州市场和超市300份样品(鸭肉及副产品)、6个养鸭场的380份样品(鸭泄殖腔肛拭子、粪便以及饲料和用具等)以及50例临床发病鸭的脏器组织样品(肝、脾、盲肠等)进行增菌培养,通过细菌分离培养特性、生化反应和血清型鉴定,成功分离到56株鸭源沙门菌。市场及超市产品共分离到6株沙门菌,分离率为2%,优势血清型为肠炎沙门菌;鸭场共分离到26株沙门菌,分离率为6.8%,优势血清型为肠炎沙门菌;临床发病鸭分离到24株,分离率为48%,其优势血清型为印第安纳沙门菌和肠炎沙门菌。对21株沙门菌进行ERIC-PCR分子分型,分成18类基因型,遗传相似性在59%~100%,结果显示出良好的多态性,获得了较好的指纹图谱数据。     

肠炎沙门菌iroB基因缺失株的构建及部分特性分析

为研究糖基转移酶IroB对沙门菌的重要作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了肠炎沙门菌iroB基因缺失突变株c50336ΔiroB,通过应激试验、胞内存活试验和药物耐受试验检测缺失iroB基因后肠炎沙门菌生物特性的变化。结果显示,iroB基因缺失并未影响细菌的生长速度和生化特性,也不影响其对酸、碱和过氧化氢的抵抗能力,以及其在细胞内的存活能力,但使得细菌对热应激的敏感性增加,对蛋清抵抗能力下降,推测IroB参与沙门菌对铁的利用和对多溶菌酶的耐受;利用多粘菌素B进行最低抑菌浓度试验,结果显示其耐该药能力降低。本研究结果揭示IroB能够促进肠炎沙门菌的抗应激能力和耐药性,阐释了糖基转移酶IroB在沙门菌致病过程中的作用。     

河北省保定地区雏鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性检测

为了有效防控雏鸡白痢沙门菌病,试验自保定某蛋种鸡场疑似为鸡沙门菌病雏鸡采取肝脏病料进行细菌的分离培养、生化鉴定、鸡白痢沙门菌多价血清学鉴定及沙门菌inv A基因PCR鉴定,并对分离菌进行致病性检测及对7种抗菌药物的耐药性检测。结果表明,10株分离菌的形态特征、生化特性、血清学鉴定结果符合鸡白痢沙门菌的特征,说明从病死雏鸡组织中分离出的细菌为鸡白痢沙门菌。沙门菌inv A基因PCR扩增出373 bp目的片段,进一步证实分离菌为鸡沙门菌。用分离菌株接种雏鸡,其死亡率高达90%,表明该菌株有很高的致病性。10株分离菌株对阿莫西林和青霉素耐药率达100%,对阿齐霉素的耐药率达90%,而对阿米卡星、头孢唑林和庆大霉素耐药性较弱、对氧氟沙星较为敏感。3耐菌株多重耐药比例为42.86%,4耐菌株多重耐药比例为57.14%,5耐菌株多重耐药比例为71.43%,说明雏鸡沙门菌分离株对所试抗菌药物均表现出不同程度的耐药性,且表现出多重耐药现象。本试验为鸡白痢沙门菌病的防治提供参考。     

种鸡饲养环境和死胚中沙门菌的分离及其对药物和噬菌体的敏感性测定

为了解某肉种鸡场沙门菌感染来源、类型及其对药物和噬菌体的敏感性,研究对种鸡场内外养殖环境和孵化场死胚进行了沙门菌采样检测.样品通过亚硒酸盐胱氨酸增菌液增菌培养后接种显色培养基进行沙门菌分离,并通过生化试验、PCR和血清型进一步鉴定;通过MIC测定了解沙门菌分离株对10种抗菌药物的药敏性;通过双层平板法检测了一株沙门菌噬...     

鹌鹑沙门菌的分离鉴定

对病死鹌鹑的肝脏和心血进行了细菌分离培养、生化鉴定及动物接种试验,确定为沙门菌。在水井、禽舍输水系统处采取的两处水样中,同样分离鉴定出了上述细菌。动物试验结果表明,从脏器中分离到的沙门菌比从水样中分离到的沙门菌致病力更强。药敏试验结果表明,从脏器中分离的沙门菌对强力霉素、多黏菌素B敏感,水样中分离的沙门菌对卡那霉素敏感。     

检测沙门菌活菌数的MTT方法建立

本研究旨在探讨MTT法用于沙门菌(Salmonella)活菌计数的可行性及操作的最佳试验条件。通过改变波长、反应时间、试剂剂量等,确定MTT法测沙门菌活菌数的最佳试验条件,同时采用Pearson相关模型进行双变量的相关性分析。结果显示MTT检测沙门菌活菌数与平板计数法的测量结果是一致的,并且不同生长阶段的沙门菌对检测结果没有影响。研究表明MTT法用于检测沙门菌活菌数是可行的。     

宠物犬源沙门菌的分离鉴定及药敏试验

为分析洛阳地区宠物犬源沙门菌耐药情况,对采集的120份宠物犬肛门拭子样品进行沙门菌的分离鉴定,通过培养特性、革兰染色、生化试验、血清型检测和分子鉴定最终获得21株沙门菌。通过纸片扩散法进行23种抗菌药物敏感性试验,采用PCR检测四环素类、β-内酰胺类和磺胺类药物耐药基因共12种。药敏试验结果表明,21株沙门菌对头孢吡肟、诺氟沙星等6种药物均未表现耐药,对阿莫西林、磺胺异恶唑等17种抗菌药物表现不同程度的耐药,并出现多重耐药现象。PCR检测结果证实,耐药基因tetE、blaPSE、blaTEM、sulⅠ和sulⅡ的检出率最高。研究结果显示,洛阳地区宠物犬沙门菌的耐药情况较为严重,为防治宠物犬源沙门菌病及宠物犬临床用药提供参考。     

鸡源查理沙门菌的分离及其生物学特性研究

研究通过培养特性、沙门菌生化鉴定系统、PCR检测以及血清学分型,对一株分离自肉鸡的细菌进行了形态学、培养特性、生化发酵等生物学特性研究,结果表明该分离株为查理沙门菌。毒力基因检测表明,分离株含有pagC、msgA、sipB、prgH、orgA、spaN、tolC、iroN、sitC、sopB和pefA基因。药物敏感性试验表明,分离株对氨苄西林、链霉素、诺氟沙星、甲氧氨嘧啶、复方新诺明、氯霉素、四环素等常见抗生素均有耐药性,为多重耐药菌株。生物被膜检测表明,该分离株具有中等生物被膜形成能力。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

基于鸡白痢沙门菌LPS的D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立

通过热酚水法提取并纯化鸡白痢沙门菌的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),以LPS作为包被抗原,建立D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法。结果显示,通过方阵滴定法等确定抗原包被质量浓度为2.233 mg/L;血清最佳稀释度为1∶200,最佳作用时间为60 min;最适封闭条件为5%脱脂乳封闭60 min;酶标二抗最适工作质量浓度为1∶8 000,作用60 min;底物显色时间为15 min;阴阳性判定标准为S/P值≥0.5。特异性、敏感性和重复性验证表明,该方法可特异性检测鸡白痢沙门菌等D群沙门菌的阳性血清,与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌等家禽病原菌的阳性血清无交叉反应,其检测灵敏度是鸡白痢平板凝集的400倍,批间重复和批内重复变异系数均小于10%。对临床血清的检测结果表明,该方法与Biochek公司的D群抗体检测试剂盒的阳性符合率为94.67%,阴性符合率为98.11%,总符合率为98.59%。结果表明,该检测方法可用于临床鸡白痢沙门菌等D群沙门菌感染的抗体检测。