蛋白激酶C抑制剂对CNE—2Z细胞周期的影响

目的：蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡时细胞周期的观察。方法：ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），终浓度分别为１×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞２４ｈ，用流式细胞仪（ＲＣＭ）分析。结果：诱导组细胞周期与对照组比较，ＳＴ使细胞Ｇ１和Ｓ期明显减少及Ｇ２期明显增加，（Ｐ〈０．０１），ＳＳ使     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对血小板聚集,蛋白磷酸化和？…

目的：进一步研究蛋白激酶Ｃ抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ在血小板聚集，肌动蛋白聚合中的作用，方法：以＾３２Ｐ－Ｎ２ＨＰＯ４标记血小板；以血小板集仪测定血小板聚集，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离蛋白质，进行放射自显影，以Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００抽提法沉淀骨架蛋白，结果：（１）１μｍｏｌ／ＬＳｔａｕｏｐｓｏｒｉｎｅ完全抑制０．５Ｕ／ｍｌ凝血酶成１０μｍｏｌ／ＬＰＭＡ诱导的血小板聚集，大部分抑制２０μｍｏｌ／     

血清可溶性细胞间粘附分子在大肠癌患者组织中的检测及其意义

目的:探讨血清可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)的检测在大肠癌患者中的临床意义。方法:采用双抗体夹心ELISA法检测50例大肠癌、30例大肠良性病变及30例健康体检者血清sICAM-1水平,并比较大肠癌患者术前、术后,转移、无转移sICAM-1水平变化。结果:大肠癌患者血清sICAM-1水平明显高于良性病变患者及正常人(P<0.01);大肠癌患者术后血清sICAM-1水平较术前明显下降(P<0.01);有转移的大肠癌患者血清sICAM-1水平高于无转移的患者(P<0.01)。结论:血清sICAM-1水平与大肠癌的发生、发展密切相关,可作为大肠癌新的检测指标之一。     

蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对血小板聚集、蛋白磷酸化和肌动蛋白聚合的影响

目的：进一步研究蛋白激酶C抑制剂Staurosporine在血小板聚集、蛋白磷酸化、肌动蛋白聚合中的作用。方法：以32P－Na2HPO4标记血小板；以血小板聚集仪测定血小板聚集；以SDS－PAGE分离蛋白质，进行放射自显影；以TritonX－100抽提法沉淀骨架蛋白。结果：（1）1μmol／LStaurosporine完全抑制0．5U／ml凝血酶或10μmol／LPMA诱导的血小板聚集，大部分抑制20μmol／LA23187诱导的血小板聚集。（2）1μmol／LStaurosporine几乎完全抑制0．5U／ml凝血酶、或10μmol／LPMA、或20μmol／LA23187诱导的血小板40kD和20kD蛋白磷酸化。（3）1μmol／LStaurosporine完全抑制0．5U／ml凝血酶或10μmol／LPMA诱导的血小板肌动蛋白聚合。结论：Staurosporine抑制蛋白激酶C的活性．从而抑制血小板的聚集和肌动蛋白聚合；蛋白激酶C在血小板聚集和肌动蛋白聚合中起着重要调控作用。     

复方丹参注射液对急性水肿型胰腺炎患者可溶性粘附分子水平的影响

目的:研究复方丹参注射液对急性水肿型胰腺炎患者外周血粘附分子水平的影响,探讨复方丹参注射液治疗急性胰腺炎的机制。方法:采用复方丹参注射液结合西药治疗32例急性水肿型胰腺炎患者(治疗组),取常规西药治疗的35例急性水肿型胰腺炎患者(治疗对照组)作为对比观察,并于治疗前后检测患者血液中粘附分子P-选择素(P-sel)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)水平。结果:治疗组的腹痛缓解时间、尿淀粉酶恢复时间和平均住院时间均短于治疗对照组(P<0.05或0.01),临床疗效也优于治疗对照组(H c=5.7902,P<0.05)。治疗前治疗组和治疗对照组的P-sel、ICAM-1比较差异无显著性(P>0.05),治疗后治疗组的P-sel下降较明显,与治疗对照组比较差异有非常显著性(P<0.01),两组治疗后ICAM-1水平差异未见显著性(P>0.05)。结论:复方丹参注射液结合西药治疗对急性胰腺炎有显著疗效,可能与复方丹参注射液能调节免疫细胞粘附分子表达,抑制炎症细胞聚集,进而抑制炎症反应有关。     

早孕小鼠子宫内膜ICAM-1的表达及意义

探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义方法：收集妊娠1-5d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化．结果：1．ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2．子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3．ICAM-1D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4．单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产．结论：ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用．     

水稻类受体蛋白激酶OsESG1的原核表达

水稻类受体蛋白激酶Os ESG1在种胚中特异表达,属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。Os ESG1基因全长c DNA经XhoⅠ、Bam HⅠ双酶切,与同样经双酶切的原核表达载体p ET-28a(+)经T4 DNA连接酶连接,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21。原核表达结果显示,Os ESG1可受1 mmol/L IPTG诱导表达,且蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加,诱导7 h后,蛋白表达至较高水平。对不同浓度IPTG诱导下的蛋白表达情况进行研究,结果显示,0.1 mmol/L IPTG对Os ESG1的诱导表达效果最好。     

羽衣甘蓝BoRACK1基因克隆、亚细胞定位及表达分析

[目的]克隆羽衣甘蓝蛋白激酶C1受体(RACK1)基因(BoRACK1)序列,并对其进行亚细胞定位及表达分析,为研究RACK1基因在植物生长发育过程中的调控机制提供理论参考.[方法]PCR扩增BoRACK1基因,构建其亚细胞定位表达载体,通过基因枪法转化洋葱表皮细胞后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白(GEP)的分布情况.利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BoRACK1基因在不同组织中及在非生物胁迫(200 mmol/L NaCl、100 μmol/L ABA和1 mmol/L H2O2溶液)下幼苗中的表达情况.[结果]PCR扩增获得BoRACK1基因的开放阅读框(ORF)序列,其cDNA全长980 bp,编码326个氨基酸,氨基酸序列与其他植物的RACK1具有较高同源性,在65%以上,尤其与拟南芥的同源性高达93%.BoRACK1基因在羽衣甘蓝的根、茎、叶、花和种子中均有表达,其中在根、叶和种子中的表达量较高,而在花、幼芽和茎的表达量较少.BoRACK1基因在ABA、H2O2和NaCl胁迫下的表达量整体上呈下调趋势,其中NaCl胁迫下其表达量在6 h时降至最低,而其他胁迫下其表达量均在4 h时降至最低.BoRACK1定位于细胞质、细胞核和细胞质膜.[结论]BoRACK1基因表达无组织特异性,除了与羽衣甘蓝花、果实及营养器官的发育存在关联外,还可能参与了植物的抗逆性调控过程.     

溃疡性结肠炎患者C反应蛋白、炎性细胞因子和粘附分子水平的检测及其临床意义

目的：观察溃疡性结肠炎(UC)患者外周血C反应蛋白(CRP)、炎性细胞因子IL-6、TNF—α和牯附分子P-选择素(P-sel)、细胞间粘附分子-1(ICAM—1)水平的变化,了解C反应蛋白、炎性细胞因子和牯附分子在UC发病中的作用。方法：采用全自动蛋白分析仪和ELISA法分别检测28例活动期和13例缓解期UC患者和30例健康人(对照组)的外周血CRP、细胞因子和粘附分子水平。结果：活动期UC患者外周血的CRP、IL-6、TNF—α、P—sel、ICAM—1水平均高于对照组和缓解组。缓解组患者CRP、IL-6、TNF—α、P—sel和ICAM—1与对照组比较差异无统计学意义。活动期UC患者CRP含量与炎性细胞因子及粘附分子的水平呈正相关。结论：UC患者血中炎性细胞因子、粘附分子和CRP水平升高,在UC发病过程中有一定的作用;检测CRP可作为UC病情判断和疗效评估的指标。     

信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响

以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P <0 0 1)。而加入蛋白激酶A抑制剂 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein和丝裂原活化的蛋白激酶抑制剂PD 980 5 9后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ,这 3种抑制剂对杂交瘤细胞抗体分泌速度的抑制率分别为 74 5 5 % ,91 13%和80 6 9%。加入 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、genistein和PD 980 5 9后 ,囊素处理组与对照组γ1mRNA的表达水平差异不显著 (P >0 0 5 ) ,说明这 3种抑制剂阻断了囊素刺激的杂交瘤细胞抗体mRNA的表达。以上结果表明 ,蛋白激酶A、酪氨酸蛋白激酶和丝裂原活化的蛋白激酶参与了囊素在杂交瘤细胞中的信号转导。     

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠CD86和ICAM-1表达的影响

目的 观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）大鼠CD86分子（CD86）和细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达的影响,探讨其对UC肠黏膜的免疫保护机制。方法 将60只SD大鼠先随机分为空白组和造模组,造模组采用2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS）溶液灌肠法制备UC大鼠模型,待模型复制成功后再将造模组随机分为模型组、西药组和中药高、中、低剂量组;干预21 d后,免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中CD86的阳性表达,Western Blot、RT-PCR法分别检测结肠中ICAM-1的蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠结肠组织中CD86的阳性表达以及ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著增高（P<0.01）;与模型组比较,中药高、中、低剂量组和西药组CD86、ICAM-1的表达均不同程度地降低（P<0.05或P<0.01）,且以中药高剂量组最为明显（P<0.05或P<0.01）。结论 健脾益肠散可能通过降低结肠组织中CD86、ICAM-1的表达水平起到对UC结肠黏膜的免疫保护作用。     

山梨酸对C2C12细胞增殖、IGF-1分泌和相关基因表达的影响

为研究山梨酸对小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12)增殖、IGF-1分泌、GH/IGF系统和糖脂代谢相关基因表达的影响,试验通过培养基中添加不同浓度的山梨酸(0、0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L)处理C2C12细胞,采用MTT法检测细胞增殖,RIA法检测细胞IGF-1分泌量,qPCR法检测相关基因mRNA的表达水平.结果表明:1)10.0μmol/L山梨酸显著促进体积分数为10%胎牛血清(1和2 d)和无血清(4和5 d)培养的C2C12细胞增殖(P<0.05);2)0.1、1.0和100.0μmol/L山梨酸均显著抑制无血清培养的C2C12细胞IGF-1的分泌(P<0.05);3)1.0μmol/L山梨酸显著上调无血清培养的C2C12细胞IGF-1R、GHR和CPT1b的mRNA表达(P<0.05),对IGFBP3(P=0.09)、PDK4(P=0.10)和PGC1α(P=0.10)的mRNA表达量也有提高趋势.提示山梨酸可促进C2C12细胞的增殖和GH/IGF系统及糖脂代谢相关基因mRNA表达,但对IGF-1的分泌具有抑制作用.     

奥扎格雷钠对大鼠局灶性脑缺血C-Fos蛋白表达的影响

目的:观察奥扎格雷钠对大鼠局灶性脑缺血C-Fos蛋白表达的影响并探讨其作用机制。方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,通过免疫组化法检测脑缺血24 h C-Fos蛋白的表达以及经奥扎格雷钠(8 mg/kg)处理后对该蛋白表达的影响。结果:脑缺血24 h C-Fos蛋白的表达明显增加;奥扎格雷钠可显著抑制脑缺血后C-Fos蛋白表达。结论:奥扎格雷钠对脑血的保护作用可能与抑制C-Fos蛋白的表达有关。     

玉米大斑病菌蛋白激酶C基因的克隆及表达规律分析

 【目的】克隆蛋白激酶C基因(PKC)及其启动子,验证该基因拷贝数,同时对PKC的表达规律进行研究,了解该基因在信号转导途径中的激活条件,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】首先通过简并引物PCR法获得PKC的同源片段,再利用Genome walking技术克隆片段的3′端和5′端侧翼序列,采用RT-PCR法扩增基因全长,并对基因结构和上游调控元件进行生物信息学分析。利用Southern blotting验证基因拷贝数。最后,利用半定量RT-PCR技术研究玉米大斑病菌在不同碳源、氮源培养以及非生物胁迫条件下,PKC的表达量的变化规律。【结果】获得PKC全长序列及其上游部分启动子区,生物信息学分析表明,PKC全长DNA序列为3 837 bp、cDNA序列为3 516 bp。由7个外显子和6个内含子组成,编码产物包含1 171个氨基酸残基。在1 380 bp的上游侧翼序列中包含CAAT-box及TATA-box,并且存在热激转录因子(HSF)结合元件和SP1、AP1等结合元件。PKC在玉米大斑病菌基因组中以单拷贝形式存在。半定量RT-PCR结果表明：在以蔗糖为碳源时PKC表达量高于其它碳源,铵态氮为氮源时PKC的表达明显受到抑制。重金属离子Mn2+、Cu2+、Zn2+显著抑制PKC表达。在高渗胁迫环境中下,山梨醇抑制PKC表达,且抑制程度与浓度成正相关;而高浓度NaCl造成高渗胁迫时,PKC由低浓度NaCl时的低丰度表达状态中被激活,表达量迅速增加。【结论】玉米大斑病菌PKC及其启动子的成功克隆与该基因的表达规律丰富了植物病原真菌的生物信息学资源,为深入了解植物病原真菌信号转导途径奠定了基础。     

DHA对C2C12细胞成脂分化过程中相关基因表达的影响

采用胰岛素、地塞米松和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤联合诱导C2C12细胞分化为脂肪细胞,诱导分化后加入100 mmol/L二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA).DHA处理8d后,收集细胞,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测脂肪分化相关基因PPARγ、C/EBPα和ADD1转录表达水平.结果表明,C2C12细胞成脂分化时添加DHA能显著上调PPARγ、C/EBPα和ADD1基因的表达,并且联合添加维生素E后效果更显著.     

不同能量蛋白水平对绵羊睾丸生精细胞凋亡及相关基因表达的影响

为研究不同能量蛋白对绵羊睾丸生精细胞凋亡及相关基因的影响,选择健康状况良好体重相似的绵羊公羔,将其随机分配到不同能量蛋白水平的3组日粮:100%自由采食组、65%采食组和35%采食组,进行饲喂,当100%自由采食组体重达到35kg后各组取样检测。结果表明,35%采食组中的Bcl-2,Bax mRNA表达量和生精细胞凋亡数量均显著高于其它两组(P<0.05)。65%采食组Bax mRNA表达量和生精细胞凋亡数目均高于100%自由采食组,但是差异均不显著(P>0.05)。100%自由采食组中Bcl-2mRNA表达量高于65%采食组,但是差异不显著(P>0.05)。说明不同能量蛋白水平日粮对绵羊生精细胞凋亡是有影响的,而Bcl-2,Bax参与了此凋亡调控过程。     

半边莲生物碱抑制肾性高血压大鼠内皮素1mRNA和蛋白表达

目的观察半边莲生物碱对肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA表达、蛋白合成和释放的影响。方法采用两肾一夹高血压大鼠模型,随机分为高血压组、半边莲组、卡托普利组和假手术组。用原位杂交技术观察大鼠外周血白细胞内皮素1 mRNA的表达,应用免疫组织化学染色计数大鼠主动脉内皮细胞铺片内皮素阳性细胞率(反映内皮素1蛋白的合成),用放射免疫技术测定大鼠血浆内皮素的含量。结果与假手术组比较,高血压组外周血白细胞内皮素1mRNA表达增强(34.64%±8.39%比9.34%±4.47%,P<0.05),动脉内皮细胞合成内皮素增多(7.42%±0.24%比1.58%±0.24%,P<0.05),血浆内皮素水平显著升高(221±24ng/L比138±19ng/L,P<0.05)。应用半边莲生物碱8周后,与高血压组比较,内皮素1 mRNA表达(20.38%±11.31%比34.64%±8.39%,P<0.05)、内皮素合成(3.53%±0.21%比7.42%±0.24%,P<0.05)和血浆内皮素水平(191±21ng/L比221±24ng/L,P<0.05)均受到显著抑制。结论肾性高血压大鼠伴有内皮素表达增强,半边莲生物碱能抑制内皮素基因的转录、蛋白合成及翻译,对防治肾性高血压所致的血管病变具有一定作用。     

马铃薯块茎贮藏期间蛋白质和维生素C含量的变化

对10个马铃薯品种贮藏期间的蛋白质和维生素C含量进行定期测定,结果表明,贮藏期间不同品种间的蛋白质和维生素C含量的差异均呈极显著水平,贮藏期与马铃薯维生素C含量呈极显著负相关,与蛋白质含量无相关性.     

扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白(PICK1)基因的克隆及序列分析

[目的]分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Monieziaexpansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础.[方法]构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等分析技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较及蛋白质二级结构的初步预测.[结果]获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因蛋白激酶C相互作用蛋白,全长1 527 bp,编码447个氨基酸,CDS预测存在明显的BAR,PDZ结构域.编码蛋白的理论分子质量为50.173 3 ku,等电点为5.22.[结论]获得了扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白的全长cDNA序列,为该基因功能的试验性鉴定工作奠定基础.     

加味丹参饮抑制p38MAPK表达保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞损伤的实验研究

目的 观察加味丹参饮含药血清对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）乳鼠心肌细胞p38 MAPK蛋白表达的影响,以探讨其保护心肌的作用机制。方法 将20只SD乳鼠的心肌细胞进行原代培养,建立H/R模型并随机分为H/R组、SB203580（p38MAPK阻断剂组）、加味丹参饮含药血清组,正常心肌细胞组作为对照组。采用T淋巴细胞化学染色法鉴定心肌细胞,罗丹明B（Rhodamine B）染色法观察细胞形态,MTT比色法检测含药血清对乳鼠心肌细胞的毒性,Western-blot法检测MKK3（促分裂原活化蛋白激酶-激酶3）、MKK6（促分裂原活化蛋白激酶-激酶6）、p38MAPK、phospho-p38MAPK蛋白表达。结果 与正常血清对照组比较,H/R组MKK3、MKK6的蛋白表达增多,p38MAPK通路阻断剂SB203580和加味丹参饮均不能减少其表达;p38MAPK、phospho-p38MAPK在H/R时表达均增加（P<0.01）,而SB203580和加味丹参饮含药血清均能减少其表达（P<0.01）。结论 加味丹参饮含药血清预处理可通过抑制缺氧,复氧心肌细胞p38MAPK信号通路发挥保护作用,抑制p38MAPK表达及其磷酸化,减轻心肌细胞损伤,起到保护心肌细胞的作用。