信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响

以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P <0 0 1)。而加入蛋白激酶A抑制剂 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein和丝裂原活化的蛋白激酶抑制剂PD 980 5 9后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ,这 3种抑制剂对杂交瘤细胞抗体分泌速度的抑制率分别为 74 5 5 % ,91 13%和80 6 9%。加入 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、genistein和PD 980 5 9后 ,囊素处理组与对照组γ1mRNA的表达水平差异不显著 (P >0 0 5 ) ,说明这 3种抑制剂阻断了囊素刺激的杂交瘤细胞抗体mRNA的表达。以上结果表明 ,蛋白激酶A、酪氨酸蛋白激酶和丝裂原活化的蛋白激酶参与了囊素在杂交瘤细胞中的信号转导。     

血必净注射液治疗大鼠脓毒症的实验研究

目的 观察血必净注射液(XBJ)对脓毒症大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响,探讨XBJ治疗脓毒症的作用机制.方法 120只雄性SD大鼠随机等分为假手术组(A组)、盲肠结扎穿孔组(B组)、XBJ早期治疗组(C组)、XBJ晚期治疗组(D组).采用盲肠结扎穿孔术制作大鼠脓毒症模型,C组术后立即腹腔注射XBJ,D组术后24h注射XBJ.术后0h、6h、12h、24h、48h、72h随机处死大鼠,采用ELISA和RT-PCR分别检测血浆、肝组织中HMGB1表达.另取30只大鼠以B、C、D3组同样的模型及处理方式观察生存时间.结果 B组大鼠的脓毒症表现最为明显,其生存时间比C组和D组明显缩短(P＜0.01).A组各时间点均较低;B组大鼠血浆HMGB1水平在术后6h开始升高,24h达到峰值;C组24h浓度显著低于B、D组(P＜0.05或0.01);D组仅在72h时显著低于B组(P＜0.01).B组大鼠肝组织HMGB1表达水平在术后12h开始升高,24h达到高峰;C组24、48、72h水平显著低于B组(P＜0.01);D组48h显著低于B组,而24、72h高于C组(P＜0.01或0.05).结论 血必净是治疗脓毒症的可靠药物,其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关.     

丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活化与脓毒症大鼠肺组织和血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及组织炎症反应的关系。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)模型制造大鼠腹腔感染。随机将56只大鼠分为正常对照组、CLP组和CLP+MAPK抑制剂(SB203580)处理组,各组又分不同时间点亚组。采用反转录多聚酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测试剂盒分别测定血浆和肺TNF-αmRNA和蛋白水平;同时测定肺髓过氧化酶(MPO)活性、HE染色病理切片检测肺组织炎症反应程度。结果与正常大鼠相比,CLP后各时间点肺血浆和肺组织TNF-αmRNA、蛋白含量均升高明显;同时肺MPO和组织病理学评分升高明显。MAPK抑制剂处理后,与CLP组相应时间点相比,MPO和病理学评分均显著下降;TNF-αmRNA表达和蛋白含量同时显著降低。结论抑制MAPK活化可缓和脓毒症所致大鼠肺组织炎症反应,减轻肺组织损伤。     

阿托伐他汀钙对实验性脑缺血再灌注后炎症反应的影响

目的研究阿托伐他汀钙对大鼠大脑中动脉缺血再灌注后脑组织中核因子κBp56、细胞间粘附分子1蛋白表达及炎症细胞渗出的影响。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,应用免疫组织化学检测核因子κBp56和细胞间粘附分子1蛋白表达,运用HE染色观察多形核白细胞浸润的情况。结果他汀组与缺血组比较,大鼠缺血侧脑组织中核因子κBp56蛋白和细胞间粘附分子1蛋白表达减少(P<0.05),多形核白细胞渗出减少(P<0.05),神经病学评分也减少(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙能抑制缺血再灌注后脑组织中核因子κBp56和细胞间粘附分子1蛋白表达,从而减少炎症细胞渗出,抑制大鼠实验性脑缺血再灌注后炎症反应,最终减轻其缺血再灌注损伤。     

辛伐他丁对2型糖尿病大鼠血管内皮VCAM-1和MCP-1mRNA和蛋白表达的影响

目的了解辛伐他丁对2型糖尿病大鼠血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的影响。方法30只SD大鼠随机分为正常组(NC)、糖尿病组(DMC)、辛伐他丁治疗组(DMT),每组各10只大鼠。喂养12周后抽血测定血脂全套,取主动脉标本以免疫组化和半定量RT-PCR法分别检测VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达。结果DMT组大鼠血管内皮VCAM-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达明显降低,与DMC组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论辛伐他丁可减少糖尿病大鼠血管内皮VCAM-1和MCP-1的表达,减轻血管内皮局部的炎症反应。     

蛋鸡热应激与细胞凋亡相关基因表达

为阐明温度对蛋鸡热休克蛋白与细胞凋亡相关基因表达的影响,将90只蛋鸡平均分为3组,分别在25 ℃、30 ℃、35 ℃条件下饲养1周,采用qRT-PCR方法检测心脏和肝脏组织热休克蛋白与细胞凋亡相关基因表达情况。结果显示,35 ℃热应激组蛋鸡心脏和肝脏组织热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达水平最高;35 ℃热应激组肝脏组织中细胞色素C氧化酶(CCO)、肿瘤坏死因子凋亡诱导因子配体(TRAIL)和应激活化蛋白激酶(SAPK)mRNA表达量最低,蛋白激酶(PKB)mRNA表达量最高。研究结果表明,温度升高会增加蛋鸡心脏和肝脏中热休克蛋白表达,通过调控细胞凋亡信号转导通路关键基因表达来抑制细胞凋亡,保护细胞免受损伤。     

三七总皂苷对大鼠大脑缺血再灌注VEGF表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对预处理大鼠大脑缺血再灌注后血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将48只SD大鼠随机平均分为假手术组、模型组、PNS组和尼莫地平对照组。预给大鼠PNS 7d后,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。观察各组大鼠神经功能评分及大脑TTC染色,从VEGF的角度检测免疫组化和mRNA水平表达情况。结果:PNS可以显著改善大鼠神经功能评分和降低脑梗死体积,并可增加VEGF蛋白表达和上调VEGF mRNA表达水平。结论:PNS能有效上调脑缺血再灌注损伤后VEGF mRNA浓度的表达,促进缺血区血管新生。     

莲心碱对大鼠脑缺血／再灌注后NOS和C-Fos蛋白表达的影响

目的：观察莲心碱对大鼠脑缺血／再灌注后一氧化氮合酶（NOS）和C—Fos蛋白表达的影响并探讨其作用机制。方法：将24只SD雄性大鼠随机平均分为假手术组、缺血／再灌组和莲心碱组。采用大鼠大脑中动脉线桂（MCAO）法制备局灶性脑缺血／再灌注模型，应用免疫组化法分别检测各组大鼠脑组织NOS和C—Fos蛋白表达。结果：与假手术组比较，大鼠脑缺血／4g灌注24h后NOS和C—Fos蛋白的表达明显增多（P〈0．01）．莲心碱能明显减少大鼠梗死灶范围，减少脑缺血／4g灌注后NOS和C—Fos蛋白表达（P〈0．05）。结论：莲心碱对大鼠脑缺血／再灌注具有保护作用，其机制可能与抑制NOS和C—Fos蛋白的表达有关。     

咳喘穴位敷贴对哮喘大鼠肺组织JAK1、STAT6表达的影响

目的 观察咳喘穴位敷贴对慢性支气管哮喘大鼠肺组织JAK1、STAT6表达的影响。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、咳喘穴位敷贴组、地塞米松组,每组10只。除对照组外,其余各组采用卵清蛋白致敏并激发的方法制备慢性支气管哮喘大鼠模型。造模成功后,咳喘穴位敷贴组大鼠相应穴位贴敷咳喘穴位敷贴进行干预治疗,地塞米松组大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.5 mg/（kg·d）。治疗14 d后取大鼠肺组织,HE染色观察肺组织形态学变化,免疫组织化学、Real time PCR检测肺组织JAK1和STAT6蛋白及mRNA的表达水平。结果 与对照组相比,哮喘模型组大鼠肺组织可见大量炎性细胞浸润,气道内有大量分泌物,肺泡结构紊乱;与哮喘模型组相比,咳喘穴位敷贴组和地塞米松组大鼠肺组织炎性细胞浸润减少、气道分泌物减少、肺泡排列规则。与对照组相比,哮喘模型组大鼠气道上皮 JAK1、STAT6蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.01）;与哮喘模型组相比,咳喘穴位敷贴组和地塞米松组大鼠气道上皮JAK1、STAT6蛋白表达下调（P<0.05或P<0.01）,JAK1、STAT6 mRNA表达下调（P<0.01）。结论 咳喘穴位敷贴能够改善支气管哮喘大鼠支气管及肺组织炎症,其机制可能与降低JAK1、STAT6 mRNA和蛋白表达有关。     

依达拉奉对大鼠脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用

目的研究自由基清除剂依达拉奉对大鼠脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用,方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型,将SD大鼠分为再灌注组和依达拉奉组,再灌注组和依达拉奉组按再灌注2，6，12，24，48h分为5个组,依达拉奉组在缺血2h后解除栓塞，给依达拉奉3mg·kg^-1静脉注射，首次给药24h后相同剂量再次给药,再灌注组给予0.9％氯化钠溶液，给药剂量、实践和方法同依达拉奉组,检测各组血清丙二醛（MDA）浓度，免疫组化染色及原住细胞凋亡检测法（TUNEL法）测定脑系组织bcl-2蛋白表达扣凋亡细胞数，并测量各组脑梗死体积,结果依达拉奉组再灌注后6，12，24，48h的梗死体积血清MDA浓度TUNEL阳性细胞数均明显小于再灌注组（P〈0.05），各时间点bcl-2蛋白均高于再灌注组（P〈0.01）,结论依达拉奉可以降低羟自由基水平，对抗细胞凋亡，对脑缺血-灌注损伤大鼠神经有明显保护作用.     

健脾益肠散对溃疡性结肠炎大鼠CD86和ICAM-1表达的影响

目的 观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）大鼠CD86分子（CD86）和细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达的影响,探讨其对UC肠黏膜的免疫保护机制。方法 将60只SD大鼠先随机分为空白组和造模组,造模组采用2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS）溶液灌肠法制备UC大鼠模型,待模型复制成功后再将造模组随机分为模型组、西药组和中药高、中、低剂量组;干预21 d后,免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中CD86的阳性表达,Western Blot、RT-PCR法分别检测结肠中ICAM-1的蛋白和mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠结肠组织中CD86的阳性表达以及ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著增高（P<0.01）;与模型组比较,中药高、中、低剂量组和西药组CD86、ICAM-1的表达均不同程度地降低（P<0.05或P<0.01）,且以中药高剂量组最为明显（P<0.05或P<0.01）。结论 健脾益肠散可能通过降低结肠组织中CD86、ICAM-1的表达水平起到对UC结肠黏膜的免疫保护作用。     

复方丹参注射液对急性水肿型胰腺炎患者可溶性粘附分子水平的影响

目的:研究复方丹参注射液对急性水肿型胰腺炎患者外周血粘附分子水平的影响,探讨复方丹参注射液治疗急性胰腺炎的机制。方法:采用复方丹参注射液结合西药治疗32例急性水肿型胰腺炎患者(治疗组),取常规西药治疗的35例急性水肿型胰腺炎患者(治疗对照组)作为对比观察,并于治疗前后检测患者血液中粘附分子P-选择素(P-sel)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)水平。结果:治疗组的腹痛缓解时间、尿淀粉酶恢复时间和平均住院时间均短于治疗对照组(P<0.05或0.01),临床疗效也优于治疗对照组(H c=5.7902,P<0.05)。治疗前治疗组和治疗对照组的P-sel、ICAM-1比较差异无显著性(P>0.05),治疗后治疗组的P-sel下降较明显,与治疗对照组比较差异有非常显著性(P<0.01),两组治疗后ICAM-1水平差异未见显著性(P>0.05)。结论:复方丹参注射液结合西药治疗对急性胰腺炎有显著疗效,可能与复方丹参注射液能调节免疫细胞粘附分子表达,抑制炎症细胞聚集,进而抑制炎症反应有关。     

抑制p38MAPK活化对脓毒症大鼠肺部及血管组织中iNOS及NO合成的影响

目的通过抑制MAPK通路活化,观察其对脓毒症大鼠组织和血清诱导型一氧化氮合成酶(iN-OS)及一氧化氮(NO)合成的影响以及循环变化.方法大鼠脓毒症模型采用经典的盲肠结扎穿孔术(cecalligation puncture,CLP),将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、CLP脓毒症组和SB203580治疗组.采集组织和血清并测定组织iNOSmRNA表达水平,NO检测试剂盒(酶法)检测组织和血清NO含量;同时分别监测上述各时间点的脉搏和平均动脉压.结果与正常组大鼠相比,CLP后各时间点脓毒症大鼠肺、血管和血清iNOS mRNA、NO含量均升高明显;而MAP下降明显、脉搏明显升高(P<0.05,P<0.01).治疗组与CLP组相应时间点相比,iNOSmRNA表达在肺和血管多个时间点降低;而肺和血管及血清NO含量下降;血压和脉搏均显著好转(P<0.05,P<0.01).相关分析显示:血管和肺组织iNOSmRNA与NO的相关系数分别是0.75和0.74;肺、血管组织iNOS mRNA与血清NO的相关系数分别是0.69和0.65(P<0.05),MAP与血管、肺和血清NO的相关系数分别是-0.85、-0.86和-0.90(P<0.05).结论抑制MAPK通路活化可抑制脓毒症大鼠血浆和组织iNOSmRNA及NO合成,并改善循环功能.     

内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析

 【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因 cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长 1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊（NM_001161857.1）同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S_TKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。     

蛋白激酶C抑制剂对CNE—2Z细胞周期的影响

目的：蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡时细胞周期的观察。方法：ＰＫＣ催化区抑制剂Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｉｎｅ（ＳＴ）和调节区抑制剂Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），终浓度分别为１×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ，诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞２４ｈ，用流式细胞仪（ＲＣＭ）分析。结果：诱导组细胞周期与对照组比较，ＳＴ使细胞Ｇ１和Ｓ期明显减少及Ｇ２期明显增加，（Ｐ〈０．０１），ＳＳ使     

复方连翘对Th细胞分化信号蛋白钙调神经磷酸酶转录表达的影响

 【目的】观察中药复方连翘对T淋巴细胞活化信号蛋白CaN 转录表达变化，探讨其免疫调控机制。【方法】用含药血清培养鸡脾T淋巴细胞并以OVA和ConA体外干预诱导;利用半定量RT-PCR和Western-blotting技术检测CaN mRNA及其蛋白的表达。【结果】发现信号蛋白CaN转录、表达在0.1% OVA的情况下无血清组和正常血清组高于其它实验组，与10%OVA相比差异显著（P＜0.05）。0.1%OVA浓度下，抗病毒口服液与复方连翘血清组的CaN表达均有明显降低，但两者之间降低程度无显著差别;复方连翘血清组在10%OVA条件下的CaN转录表达，与无血清组比较，有显著升高（P＜0.05）。【结论】复方连翘可能通过调节信号转导通路第一个接头蛋白CaN的转录表达来影响Th的分化进而实现对机体的免疫调控，同时也表明复方连翘通过双向调节、多环节、多途径实现的对机体免疫调节作用。     

早孕小鼠子宫内膜ICAM-1的表达及意义

探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义方法：收集妊娠1-5d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化．结果：1．ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2．子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3．ICAM-1D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4．单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产．结论：ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用．