基于最小二乘支持向量机和特征波长的水果表面农药残留无损检测方法

传统的水果表面农药残留无损检测方法在精准分析农药残留数据量时，难以满足目前农药残留检测精度要求，设计一种基于最小二乘支持向量机和特征波长的水果表面农药残留无损检测方法。设计图像采集设备结构，获取低信噪比图像，利用黑白校正手段处理获得的高光谱图像，利用连续投影算法选择最优的特征波长，将特征波长与样本浓度和农药残留种类建立了非线性关系，设计最小二乘支持向量机预测模型检测流程，进行农药残留的浓度分类。在实际的测试中对设计方法的性能进行验证，并综合不同方法的检测结果进行分析。与传统检测方法相比，在不同的特征波长下，设计的农药残留无损检测方法得到的检测结果与实际情况更加相符，验证了方法的有效性。     

用ELISA法快速检测沙门氏菌

我们试验一种新的快速检测沙门氏菌的方法，这种方法是使用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ），直接从增菌培养液中检测沙门氏菌。在检测的９４个鱼粉（肉骨粉）样品中，我们同时使用快速检测法和常规细菌学检测法，结果是阳性符合率为９２％，阴性符合率为１００％，总符合率９８％以上。使用快速检测法，最快可以在２７ｈ有结果，而常规的细菌学检测方法最快要７２ｈ才有结果，大大缩短了检测的时间。     

小麦白粉菌环介导等温扩增检测技术体系的建立与应用

为建立简便、快速和灵敏的小麦白粉菌Blumeria graminis f.sp.tritici(Bgt)分子检测技术体系，基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术，以BGT96224V316＿LOCUS1725基因(GenBank:VCU40465.1)为靶标序列，设计并筛选特异性引物，建立小麦白粉菌的LAMP检测方法，并对其特异性、灵敏度和应用效果进行测定。结果表明，基于筛选出的1套特异性引物建立的LAMP方法能够从8种白粉菌属菌株和1种腐生菌中特异性地检测到小麦白粉菌；对小麦白粉菌DNA样品的检测灵敏度可达到300 fg/μL;对发病叶片的检测显示该LAMP方法能从人工接种的小麦叶片中准确检测出小麦白粉菌，检出时间为接种4 h及以上。综上，本研究建立了一种小麦白粉菌的LAMP检测方法，具有简便快捷、灵敏度高等特点，丰富了小麦白粉菌的检测体系。     

甲基异柳磷高效液相色谱分析方法

本文研究了用高效液相色谱法测定甲基异柳磷的定量方法。在ＯＤＳ柱上，以甲醇、水作流动相，紫外检测器检测，邻苯二甲酸二丁酯作内标物。方法准确、灵敏线性范围宽，最小检测限０．９ｎｇ，相对标准偏差０．５７％，回收率９９．３３～１０１，２％，一次色谱分析仅需７ｍｉｎ．     

苏云金杆菌HBF-1菌株在土壤中毒蛋白含量的ELISA检测

以苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株中分离纯化的高特异性杀虫蛋白作为抗原，免疫新西兰白兔制备出多克隆抗体，其效价可达到16000。应用制备的特异性抗体建立了间接酶联免疫吸附测定法（ELISA），检测不同土壤样品中Bt毒蛋白含量。初步结果表明，该方法能够检测土壤中Bt毒蛋白的含量，因土壤理化特性及组成成分的不同，检测到的毒蛋白含量也略有不同，河沙中的蛋白检测量最低，只有12．53％；另一种沙壤混合物中检测量达到76.16％。     

应用RFLP特异基因片段检测绿豆成分

通过对绿豆RFLP分子标记图中特异片段序列的扩增，建立了一种利用PCR方法来检测、鉴定绿豆成分的方法。该方法成功地扩增出了470bp大小的绿豆特异基因片段，通过对大豆、豇豆等其他豆类作物的验证，表明该引物具有较强的特异性，可以用来作为食品中绿豆成分的鉴定基因或绿豆转基因检测中的参照基因。     

苹果中吡虫啉残留的检测方法探索

本文建立了一种苹果中吡虫啉残留量的检测方法，苹果样品分别采用QuEChERS法与传统固相萃取法进行前处理，以乙腈进行农药残留提取，在经过多重净化后，以超高效液相色谱仪结合紫外检测器进行检测。结果表明，当吡虫啉农药浓度范围在0.05～1.00μg/mL时，在苹果机制中呈现较好的线性关系，其R²≥0.999,此方法下吡虫啉的加标回收率范围为80.2%～91.3%,相对标准偏差值范围为3.8%～7.5%。该方法能够有效检测苹果中的吡虫啉残留，且结果精准、效率较高，适合推广使用。     

梨火疫细菌实时荧光PCR和诱捕PCR-ELISA检测方法的建立

根据梨火疫细菌中独特而保守存在的质粒pEA29，设计了1对引物和3条探针，建立了实时荧光PCR检测方法和诱捕PCR-ELISA检测方法。实时荧光PCR采用带荧光标记的核酸杂交探针，边扩增边检测，步骤简单，不需PCR后处理，可避免假阳性和交叉污染；诱捕PCR-ELISA检测方法只需简单处理的样品就能检测，减少了核酸不纯出现的漏检，由于增加了核酸杂交探针，可不需凝胶电泳EB染色检测，不会出现假阳性问题。     

进境木材变孔异担子菌的KASP检测方法的建立

变孔异担子菌（Heterobasidion irregulare）是一种侵染性强、危害大的针叶树病原菌。为建立变孔异担子菌的KASP检测方法，本研究根据变孔异担子菌GAPDH基因的SNP位点，筛选出变孔异担子菌KASP分子标记，并检测了该标记的特异性、灵敏度。结果表明，引物Hirr-FAM-F1、Hirr-HEX-F2、Hirr-R可以准确鉴定变孔异担子菌，检测灵敏度可达0.5 ng/μL。     

菠萝泛菌与水稻白叶枯病菌双重PCR检测方法的建立与应用

近年来水稻发生了一种由菠萝泛菌Pantoea ananatis引起的新型细菌病害，其发生时期与白叶枯病相近，病症与白叶枯病类似。为了实现该病害与白叶枯病的快速检测，本研究基于泛菌属看家基因acnA,通过序列比对，设计了22对特异性引物，分别与已知的白叶枯病菌检测引物XOO80进行配对并筛选，建立了一种双重PCR检测方法，可从菠萝泛菌和白叶枯病菌中分别扩增出910 bp和162 bp的特异性条带，而其他10种非目标细菌均未有扩增条带，25μL体系中可稳定地从至少1 pg/μL的基因组DNA模板中扩增出特异性条带。本研究建立的菠萝泛菌与水稻白叶枯病菌双重PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏度，为水稻细菌病害病原鉴定及防治提供了技术支撑。     

木尔坦棉花曲叶病毒RPA快速检测方法的建立

木尔坦棉花曲叶病毒Cotton leaf curl Multan virus(CLCuMuV)引起的病害是世界棉花生产上的毁灭性灾害,也是我国进境植物检疫性有害生物之一。因此,建立快速检测技术对CLCuMuV的检疫和防控具有重要意义。本研究根据CLCuMuV外壳蛋白(CP)基因序列设计引物,建立了该病毒的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)检测方法,并评价了该方法的灵敏度和特异性,进一步测定了对田间疑似病样的检测准确性。结果表明,建立的RPA检测方法仅能从感染CLCuMuV的样品中扩增出目的条带,而感染同属的其他5种病毒的样品中未扩增出目的条带。该方法检测灵敏度是常规PCR的10倍,且对田间疑似病样的检出结果与PCR试验结果一致。因此,本研究所建立的CLCuMuV RPA快速检测方法具有特异、灵敏、准确、操作简便、无需特殊设备等优点,这些为CLCuMuV的快速检测提供了一种新技术。     

柑橘黄龙病病原DNA微量提取方法比较

对比分析了3种黄龙病病原DNA微量提取方法,方法1和方法2分别采用Sandrine等人和Hung等人的黄龙病病原DNA提取方法,但取样量分别由100mg和250mg减少为20mg和10mg;方法3采用周常勇等人的微量核酸提取方法,取样量为10mg.实验结果表明:方法1提取的病原DNA浓度低、杂质多,PCR效果差;方法2提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,但提取周期较长,不适合大批量样品的PCR快速检测;方法3提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,且提取速度快,适宜大批量样品的PCR快速检测.     

杂交诱捕实时荧光PCR检测番茄环斑病毒

 番茄环斑病毒(Tomato ringspot nepovirus,ToRSV)广泛分布于欧美及大洋洲,能侵染葡萄、桃、苹果、樱桃、番茄及烟草等150多种植物,引起多种病害,严重时导致绝产^[1]。     

实时荧光RT-PCR检测辣椒轻斑驳病毒的初步研究

本研究选取辣椒轻斑驳病毒PMMoV、烟草花叶病毒TMV、黄瓜花叶病毒CMV和马铃薯Y病毒PVY作为试验材料,根据PMMoV衣壳蛋白(CP)RNA的序列特异性位点,设计出Taqman荧光探针及其引物,采用实时荧光RT-PCR技术对PMMoV进行快速检测,同时与ELISA方法进行了灵敏度比较,结果表明：该方法具有较高的灵敏度及较强的特异性,PMMoV检测结果为阳性,TMV、CMV和PVY均无荧光信号,为阴性,灵敏度是传统的ELISA方法的100倍,而且大大缩短了检测时间。该方法快速、准确、灵敏、简便、安全,具有实际应用价值,适用于植物病毒病害的快速检测。     

猕猴桃果实中Neofabraea actinidiae的快速分子检测

通过对已报道的猕猴桃果腐病菌(Neofabraea actinidiae)及明孢盘属其他种真菌负责编码RNA聚合酶II的第2大亚基(the second largest RNA polymerase subunit,RPB2)的基因序列进行同源性比对,设计合成了一对用于猕猴桃果实中N. actinidiae的检测引物NACF1/NACR1。利用该引物对包括N. actinidiae在内的8种9株Neofabraea属真菌的基因组DNA进行扩增,建立了猕猴桃果实中N. actinidiae的快速分子检测方法,并进行了灵敏度试验、病菌接种与病果中N. actinidiae的检测。结果表明:该引物特异性强,稳定扩增出片段大小为582 bp单一条带,检测灵敏度为0.2 ng/μL,可以特异性地检测到接种发病果实组织中N. actinidiae。该方法能够实现猕猴桃果实中N. actinidiae的快速检测,为口岸提供了特异、高效、可靠的检测方法。     

采用磁性纳米微球增强信号的表面等离子体共振免疫传感系统检测水中莠去津残留

将磁性纳米微球(MNP,表面修饰羧基的磁性四氧化三铁微球)与表面等离子体共振(SPR)免疫传感技术结合,以莠去津单克隆抗体(AT-m Ab)与磁性纳米微球的偶联物(AT-m AbM NP)作为传感识别元件,初步建立了一种用于饮用水中除草剂莠去津残留检测的SPR信号增强免疫传感方法。通过对检测条件的优化,该方法对自来水中莠去津的检出限为0.89 ng/m L(S/N=3),检测范围为8.62~7.18×10~3ng/m L,检测时间小于20 min;在10~1 000 ng/m L添加水平内,莠去津的平均回收率为94%~102%,相对标准偏差(RSD)为5.1%~7.3%。磁性纳米微球的加入有效增强了SPR传感器的响应信号强度,提高了检测方法的灵敏度。本研究建立了一种快速、灵敏、准确的水中莠去津残留的检测方法,可为相应的现场检测技术和设备的研发提供技术基础。     

Liquid and Gas Chromatographic Multi-residue Pesticide Determination in Animal Tissues

A liquid chromatography multi-residue method with photometric detection has been developed. The method is applicable to the quantitative determination of organochlorine (tetradifon, dicofol, chlorfenson, chlorobenzilate), organophosphorus (fenitrothion, azinphos-ethyl) and carbamate (pirimicarb) pesticides in animal tissues. The extracted residues are cleaned up by gel-permeation chromatography. A further fractionation on silica Sep-Pack cartridges is included in the procedure. A gas chromatographic method with electron-capture detection for the analysis of the same pesticides was carried out and the results in the two cases compared. Lower detection and quantitation limits and similar recoveries of pesticides from spiked pig liver and brain samples were obtained by the LC method. © 1997 SCI.     

葡萄卷叶伴随病毒2实时荧光定量RT-PCR技术的检测应用

通过引物筛选和体系优化建立了葡萄卷叶伴随病毒2 Grapevine leafroll-associated virus 2(GLRaV-2)的SYBR GreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术。该技术标准曲线扩增效率为102.2%,决定系数为0.999,最低检出限可达10-3稀释梯度,是常规RT-PCR的100倍。对不同季节和不同部位葡萄样品的检出率普遍高于常规RT-PCR。春夏秋季样品检出率分别为67%、89%和86%,比常规RT-PCR检出率分别高42%、28%和17%。冬季休眠枝条检出率最高(100%),与常规RT-PCR相同。夏季老叶柄和卷须、秋季和冬季枝条等样品检测效果最好,检出率均为100%。对来自我国17个省38个品种的116份田间葡萄样品检测结果表明,qRT-PCR共检测到10个样品为阳性,检出率略高于常规RT-PCR。