白牦牛肠道嗜酸乳杆菌的分离纯化及安全性试验研究

为了解天祝白牦牛肠道内益生菌的种类及安全性,从外表健康的待宰白牦牛直肠中无菌采集粪便,在实验室条件下选用不同的培养基对白牦牛肠道内的细菌进行分离纯化,并经生化反应试验初步鉴定存在有益菌——嗜酸乳杆菌,之后将筛选出的嗜酸乳杆菌按不同剂量分别给小鼠腹腔注射,通过对小鼠的临床症状及各器官解剖病理变化的观察,确定从白牦牛肠道内分离得到的嗜酸乳杆菌是安全的。     

牦牛源枯草芽孢杆菌分离培养与鉴定

为得到稳定性高、抗逆性强的枯草芽孢杆菌，试验从健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌，分离出4株枯草芽孢杆菌。之后进行形态学鉴定、多项生化鉴定、琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明，革兰氏染色为蓝色棒状或杆状菌，生化鉴定符合枯草芽孢杆菌生化反应，确定为枯草芽孢杆菌，编号为BS-1,BS-2,BS-3,BS-4。通过耐胆盐、耐高温等耐受性试验，结果显示，BS-3整体耐受特性最好，在4株菌株中稳定性最高、抗逆性最强。结合试验目的，推断BS-3作为枯草芽孢杆菌益生菌制剂潜力较高。     

牦牛肠源乳杆菌的分离与鉴定

为了探讨牦牛肠道乳杆菌的菌群组成,试验用MRS培养基对牦牛肠道黏膜样品进行乳杆菌分离、纯化,并采用菌落形态观察、革兰染色、菌体形态观察和生化反应进行菌株鉴定。结果表明:牦牛肠道乳杆菌的菌群主要由嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、短乳杆菌、弯曲乳杆菌和干酪乳杆菌组成。     

一株鸡源芽孢杆菌的分离鉴定和益生性研究

芽孢杆菌是家禽微生态制剂中应用最多的益生菌,对家禽消化道保健具有很好的临床功效。为了筛选出鸡源芽孢杆菌用于临床肉鸡养殖保健,试验从肉鸡的盲肠中分离获得一株芽孢杆菌,并对其理化特性和益生性进行了研究。结果显示:芽孢杆菌的染色、菌落和生化性质符合枯草芽孢杆菌的特征。益生试验显示枯草芽孢杆菌具有耐酸、耐高温、产酶的特性。药敏试验显示枯草芽孢杆菌对抗生素敏感。说明分离到的枯草芽孢杆菌具有临床应用的价值。     

肉鸽肠道和嗉囊内容物中乳酸菌的分离鉴定研究

为了从肉鸽肠道和嗉囊内容物中分离得到乳酸菌,试验采用无菌操作技术,对肉鸽肠道和嗉囊内容物进行了分离培养、革兰氏染色及生理生化试验。结果表明:从肉鸽的肠道和嗉囊内容物中分离得到4株菌株,分别为嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌及枯草芽孢杆菌。     

西藏牦牛源枯草芽孢杆菌的分离培养及鉴定

从西藏健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,并筛选出耐受性最好的菌株,并进行形态学观察、生化试验、PCR扩增、电泳检测、16s rRNA序列测定、构建进化树并进行同源性分析,对通过鉴定的枯草芽孢杆菌进行耐肠液、耐胆盐、耐高温等耐受性试验.结果显示:分离出疑似枯草芽孢杆菌4株,革兰氏染色为阳性;芽孢染色液染色菌体为...     

牦牛源肠道芽孢杆菌的分离、鉴定及生物学特性研究

为分离鉴定牦牛肠道有益菌的菌种资源,采集了西藏牦牛的肠道内容物,从中分离、纯化优势菌种,经16S rDNA序列比对和生化试验鉴定种属,通过革兰染色观察其形态,并进行抗逆性能、黏附能力、溶血活性、体外抑菌能力和药敏特性等生理生化试验鉴定了其菌种特性。结果从牦牛肠道内容物中成功分离纯化获得4株菌株,分别鉴定为枯草芽孢杆菌（XZMN-1）、短小芽孢杆菌（XZMN-2）、贝莱斯芽孢杆菌（XZMN-3）和蜡样芽孢杆菌（XZMN-4）。4株分离菌株均为γ-溶血、不具有生物膜,耐胆盐性、耐酸性强,能在pH值为3.0的培养基中存活;XZMN-3和XZMN-4具有耐高温性,其菌液在80℃下孵育30 min仍能检测到活性。4株菌对大多数抗生素敏感,在不同溶剂中的疏水性相差较大（1.91%～93.15%）,自凝集性在13.29%～60.63%之间;4株菌均对沙门氏菌有抑制作用,XZMN-1和XZMN-2对金黄色葡萄球菌有抑制作用。综上说明,分离纯化的4株芽孢杆菌抗逆性高,黏附性能强,其中XZMN-1对大多数抗生素敏感,可作为开发高活性益生菌饲料添加剂的候选株。     

复方中药-益生菌制剂对雏鸡大肠杆菌、沙门氏菌抑制作用的研究

将200羽雏鸡,随机分入4个试验组(红白各半):复方中药制剂组(Ⅰ组)、复方益生菌制剂组(Ⅱ组)、复方中药-益生菌制剂组(Ⅲ组)、对照组(Ⅳ组),进行为期42 d的试验,比较各处理方法对雏鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌的影响。结果表明:试验初期复方益生菌制剂单独应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌抑制作用优于复方中药制剂组及复方中药-益生菌制剂组;试验后期复方中药与从健康白牦牛肠道内分离纯化得到的枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌复方益生菌制剂联合应用对鸡肠道大肠杆菌及沙门氏菌有极明显的抑制作用。     

四株饲用芽孢杆菌的分离鉴定及其16S-rRNA的序列分析

芽孢杆菌是一类抗性强耐高温的细菌,部分芽孢杆菌有益生作用,在动物肠道内能有效抑制病原菌,促进肠道有益菌的繁殖,维持动物肠道内的微生态平衡。本试验从引进的饲料样品中分离出4株杆菌,分别命名为YB-1、YB-2、YB-3和YB-4,通过表型鉴定及16S-rRNA测序鉴定,YB-1为苏云金芽孢杆菌、YB-2、YB-4为枯草芽孢杆菌、YB-3为蜡样芽胞杆菌。16S-rRNA序列同源分析结果表明:YB-2、YB-4与枯草芽孢杆菌亚种的同源性分别为99.91%和100%;YB-1与苏云金芽孢杆菌亚种的同源性为99.17%,YB-3与蜡样芽胞杆菌亚种的同源性为100%,从样品中分离出两株枯草芽孢杆菌,一株苏云金芽孢杆菌和一株蜡样芽胞杆菌。     

水貂肠道枯草芽孢杆菌的分离及16S rRNA鉴定

为了获得水貂的有益菌种,及研制毛皮动物益生菌制剂提供基础,并为进一步深入研究枯草芽孢杆菌提供参考,从健康水貂的肠道中分离纯化出1株枯草芽孢杆菌,编号为 P2,通过形态学观察、生理生化试验以及16S rRNA 序列分析及同源性比较进行综合鉴定,结果显示菌株 P2与菌株 Bacillus subtilis CICC 10023（GU980947.1）亲缘关系最近,同源性达到了99.9%,因此鉴定 P2菌株为枯草芽孢杆菌。     

高寒牧区冷季补饲青贮玉米秸秆对天祝白牦牛体重变化的影响

[目的]为掌握高寒牧区冷季补饲青贮玉米秸秆对天祝白牦牛体重变化的影响。[方法]通过对天祝白牦牛采用燕麦青干草加不同比例青贮玉米秸秆分组补饲研究。[结果]表明,与传统补饲方式相对比,在同样放牧加补饲的条件下,试验组效果显著。[结论]试验组天祝牦牛体重前四月体重呈上升趋势,后两月才开始缓慢下降,具有显著的保镖效果,对照组体重冷季六个月一直呈下降趋势,保膘效果较差。     

牦牛肌红蛋白的基因克隆测序、分离纯化、含量及其与乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活力的关系

为探索牦牛适应高原缺氧环境的分子机制,测定了麦洼牦牛心肌和骨骼肌中肌红蛋白（Mb）含量及乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）活力,并对牦牛Mb进行了分离纯化和基因克隆测序。牦牛心肌和骨骼肌中Mb含量显著高于水牛和黄牛（P〈0.01）;牦牛、黄牛和水牛心肌MDH/LDH活力比均显著高于骨骼肌;牦牛心肌MDH/LDH活力比显著高于水牛和黄牛,但在不同牛种骨骼肌之间无显著差异。各组织Mb含量与MDH/LDH活力比呈显著正相关。试验用RT-PCR方法从牦牛心肌中克隆了Mb基因,与普通牛相比,核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸序列完全相同;用盐析、CM-Sephadex阳离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了牦牛Mb,SDS-PAGE显示其分子量约为17 ku。     

天祝白牦牛和甘南牦牛DRB3基因外显子2多态性研究

试验通过对天祝白牦牛和甘南牦牛DRB3基因外显子2部分CDS序列进行分析,获得其准确单倍型,通过直接测序与聚合酶链式扩增阻碍突变系统(ARMS)扩增法获得干净的单链,对高度杂合的双链进行分型。结果发现65个SNPs,1个密码子的插入缺失,获得30个单倍型,其中有7个单倍型是首次发现,应该是天祝白牦牛和甘南牦牛特有的单倍型。通过对已知牛属所有DRB3基因外显子2单倍型与本研究发现的单倍型进行分析发现天祝白牦牛和甘南牦牛分享普通牛和瘤牛单倍型,可能有普通黄牛和瘤牛的遗传背景,且DRB3基因外显子2的4、25、30、53、59、62、63、66、78氨基酸位点受到了正选择的影响,主要发生在天祝白牦牛群体里,这与天祝白牦牛长期选育白毛有一定的关系。     

Polymorphism Study on DRB3 Gene Exon 2 in Tianzhu White Yak and Gannan Yak Arlud

In this study,CDS sequence of DRB3 gene exon 2 in Tianzhu White yak and Gannan yak were analyzed,a clean single chain was obtained to get the accurate haplotype by direct sequencing and amplification refractory mutation system (ARMS) method,the double chain of high heterozygosity was typed.The results showed that 65 SNPs and a codon insertion and deletion were discovered,all together separated to 30 haplotypes,in which seven haplotypes were found firstly,it should be peculiar to Tianzhu White yak and Gannan yak.Compared with published bovine DRB3 gene exon 2 haplotypes,the analysis results showed Tianzhu White yak and Gannan yak shared haplotypes of cattle (Bos taurus) and zebu (Bos indicus),which meaned they might crossed with cattle (Bos taurus) and zebu (Bos indicus).PAML analysis showed that 4,25,30,53,59,62,63,66,78 amino acid sites were affected by positive selection,and mainly occurred in Tianzhu yak,it had a certain relation with breeding history of Tianzhu White yak.     

氯前列烯醇诱导牦牛同期发情效果的研究

本研究用氯前列烯醇分别对青海大通牦牛(n=12)两次注射;对天祝白牦牛(n=17)和天祝黑牦牛(n=21)一次注射进行同期发情处理。三批处理结果为,一次注射后的发情率分别为:青海大通牦牛(9/12),75.0%;天祝白牦牛(10/17),58.8%;天祝黑牦牛(12/21),57.1%;平均一次性注射发情率为(31/50)62.0%。青海大通牦牛在第二次注射后的发情率为(12/12)100%,注射后发情的时间分别为:24h内发情的占8.0%、24～36h的占20.0%、36～48h的占30.0%、48～60h的占4.0%、60～72h的占0%。结果表明:氯前列烯醇对繁殖季节牦牛进行同期发情处理效果明显,二次注射处理后的发情率高于一次注射,处理后牦牛发情时间集中24～48h之间。     

牦牛乳铁蛋白基因多态性及其与乳品质性状的关联分析

试验旨在检测牦牛乳铁蛋白（lactoferrin,LF）基因多态性,评估基因突变对牦牛乳品质性状的影响,以期丰富牦牛重要经济性状的分子遗传研究。应用PCR-SSCP方法,检测甘南牦牛、西藏牦牛和天祝白牦牛LF基因5'UTR和内含子4突变,结合甘南牦牛乳品质测定,评估基因突变对其乳品质性状的影响。结果表明,牦牛LF基因5'UTR检测到c.-568 G>A的突变,等位基因A₁和基因型A₁B₁频率最高,为优势等位基因和基因型;内含子4检测到c.499+56 C>A突变,基因型A₂B₂频率最高,为优势基因型,等位基因A₂为甘南牦牛和天祝白牦牛优势等位基因,而B₂为西藏牦牛优势等位基因;各类群牦牛检测区域多态信息含量（PIC）介于0.25~0.50,属中度多态。关联分析表明,甘南牦牛LF基因突变影响部分胎次甘南牦牛乳品质性状,其中5'UTR第2胎基因型A₁A₁和A₁B₁个体无脂固体物质百分含量显著高于B₁B₁个体（P<0.05）;内含子4第3胎基因型A₂B₂和B₂B₂个体乳脂率显著高于A₂A₂型个体（P<0.05）,第4胎基因型B₂B₂个体的乳脂率显著低于A₂A₂和A₂B₂型个体（P<0.05）。以上结果表明,甘南牦牛、西藏牦牛和天祝白牦牛LF基因存在多态性,甘南牦牛LF基因5'UTR、内含子4突变分别影响无脂固体物质含量和乳脂率,可以作为潜在的分子遗传标记。     

Separation and Preliminary Identification of Intestinal Probiotics of Laying Hens

[Objective] The paper was to isolate and identify probiotics in the intestine of laying hens. [Method] The intestinal probiotics in laying hens at peak period were isolated using conventional separation methods; the physical and chemical properties of target strains and in vitro antibacterial effects were measured. Moreover, the safety test of chicks was conducted. [Result] Four strains of lactobacillus were isolated from the jejunum of laying hens, including Lactobacillus plantarum, Bacillus acidophilus, L. delbrueckii subsp. Delbrueckii and L. delbrueckii subsp. Lactis, and their inhibition zone diameters were 18.30, 16.07, 11.45, 17.26 mm, respectively. One strain of Lactobacillus, L. brevis, was isolated from the cecum, with the inhibition zone diameter of 10.26 mm. Three strains of bacillus were isolated from the cecum, including Bacillus subtilis, B. cereus and B. licheniformis, and their inhibition zone diameters were 9.25, 8.46 and 8.37 mm, respectively. Daily drinking 2 billion units of viable bacteria was the safe dosage for chicks. [Conclusion] Eight strains of probiotics had certain inhibitory effect on Escherichia coli O_2, and had no toxic side effects to chicks. Lactobacillus had strong antibacterial effect on E. coli O_2, while the antibacterial effect of bacillus was relatively weak.     

肃南牦牛群体遗传结构、选择信号分析和ROH检测

【目的】试验旨在对肃南牦牛进行群体遗传结构、选择信号分析和连续纯合片段(ROH)检测,挖掘肃南牦牛的种质特性相关基因。【方法】选择肃南牦牛、巴州牦牛、斯布牦牛、九龙牦牛和天祝白牦牛5个牦牛品种共计48头牦牛进行全基因组重测序,采用基因组变异检测流程(GATK)获得高质量的单核苷酸多态性(SNP)标记进行下游分析;对5个牦牛品种的基因型数据进行主成分分析、祖先成分分析和系统进化树分析以确定其群体结构;对5个牦牛群体进行ROH检测以及近交系数计算;采用综合单倍型评分(iHS)方法筛选共有高频ROH区域内受选择位点。【结果】5个牦牛品种共鉴定出15 092 883个SNPs,主要分布于内含子区域。亲缘关系计算结果显示,所有个体均不存在三代以内亲缘关系,满足后续分析要求。主成分分析表明,5个牦牛品种可以显著地分为5个类群,其中肃南牦牛群体内遗传变异较小。群体结构分析显示,肃南牦牛包含其他4种牦牛祖先成分,其中天祝白牦牛祖先成分所占的比例最大。ROH分析显示,5个牦牛品种共检测到8 426个ROHs片段,其中高频ROH区域421个。相比于其他4个牦牛品种,肃南牦牛的ROH片段总长度和数目最多,具有较高的连锁程度,其近交系数远大于其他牦牛群体。在肃南牦牛高频ROH区域上注释得到465个候选基因,主要富集到与机体发育、大脑形态形成、脂肪氧化相关的通路,包括胚胎骨骼系统形态发生、前后模式规范、甲状腺发育通路和Hippo通路,其中与胚胎发育及组织分化过程相关的基因有同源框A3(HOXA3)、HOXA5、HOXD3,与肉品质相关的基因有花生四烯酸12B (ALOX12B)、ALOX15B、ALOXE3,与中脑发育相关的基因为成纤维细胞生长因子8(FGF8)。在7号染色体1个高频ROH区域中(Chr7:12 661 870-13 045 935)鉴定到3个共享基因(核内不均一性核糖核蛋白K (HNRNPK)、驱动蛋白27(KIF27)、G激酶锚定蛋白1(GKAP1))与牦牛共有的高原适应性有关。对共有高频ROH区域内的位点进行iHS分析,鉴定到的受选择基因主要与抗病性、内质网分泌蛋白加工及细胞周期调节相关,包括N-α乙酰转移酶25(NAA25)、内质网分子伴侣29(ERP29)、跨膜蛋白16(TMEM116)、TRAF型锌指结构域蛋白1(TRAFD1)、HECT结构域E3泛素连接酶4(HECTD4)基因。【结论】本研究从全基因组水平系统评估肃南牦牛的遗传多样性和遗传背景,鉴定了肃南牦牛ROH区域内与表型相关的基因,并重点挖掘了与其他牦牛品种共享高频ROH区域内的受选择基因,为肃南牦牛种质资源开发、利用提供了重要理论依据。     

移动式太阳能牦牛乳产地保鲜贮藏设备的研究与设计

[目的]针对当前高原散养牦牛因缺乏电源、处理技术和装备,无法实现生鲜牦牛乳产地保鲜贮藏而造成浪费的问题。[方法]对牦牛乳热处理工艺进行研究,通过成本效益分析后,采用加热到60 ℃以上、保持30 min的巴氏高温杀菌工艺,研究了供电系统、杀菌保鲜系统以及辅助系统等。[结果]最终集成设计出加工鲜牦牛乳量达40 L/d的移动式太阳能牦牛乳产地保鲜贮藏设备。[结论]该设备能够延长牦牛乳保鲜时间,减少因不能及时产地保鲜牦牛乳造成变质损失,同时可提高牦牛乳商品转化率,促进藏区畜牧业生产效益提升。     

牦牛FASN基因多态性及其与肉质性状的相关性研究

利用PCR-SSCP技术,对甘南牦牛、大通牦牛和天祝白牦牛的FASN基因第3内含子进行SNPs筛选,并将筛选到的突变位点与牦牛部分肉质性状进行相关性分析.结果发现,3个牦牛群体在第3内含子检测到g.5477 C→T的突变,由此产生3种基因型：HH、HG、GG.相关性分析表明,HH基因型和HG基因型个体的脂肪含量显著高于GG基因型个体（P＜0.05）.HH、HG、GG 3种基因型对失水率、熟肉率、pH24值和剪切力的影响差异不显著（P＞0.05）.