响应面优化超声波微波辅助提取葵花籽绿原酸工艺

【目的】以葵花籽仁为原料,优化提取绿原酸的工艺条件。【方法】以乙醇为提取溶剂,绿原酸提取率为指标,采用超声波微波辅助法提取葵花籽绿原酸,在单因素试验的基础上,选取液料比、超声波功率、微波功率为影响绿原酸提取率的主要因素,采用响应面试验方法对绿原酸提取工艺进行优化,并对绿原酸提取率的二次回归模型进行分析。【结果】单因素试验结果表明,绿原酸的提取率随着液料比的增加呈现先增大后保持不变的趋势,而随着乙醇体积分数、超声波功率、微波功率、微波辐射时间的增加呈现先增大后减小的变化趋势。响应面法优化的绿原酸最佳提取工艺条件为:液(mL)料(g)比25.47∶1,超声波功率307.1W,微波功率539.36W。经过修正得到的最佳工艺条件为:液料比25∶1,超声波功率300 W,微波功率540 W,乙醇体积分数65%,微波辐射时间90s,此时绿原酸的提取率最高,可以达到3.27%。【结论】超声波微波辅助法提取葵花籽绿原酸具有操作简单、时间短、提取率高等特点。     

微波辅助提取香菇多糖工艺的响应面优化

【目的】优化香菇多糖的微波提取工艺,为香菇多糖的工业化生产和综合利用提供理论依据。【方法】以香菇多糖提取率为响应值,以液(mL)料(g)比(15∶1,20∶1,25∶1,30∶1,35∶1)、微波功率(500,600,700,800,900 W)及微波时间(2,4,6,8,10min)为因素进行单因素试验。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面设计法,建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件。【结果】通过二次回归模型响应面分析,获得香菇多糖的最佳提取工艺条件为,液料比35∶1、微波功率900 W、微波时间8.5 min;在此条件下,多糖提取率达6.49%,与最大理论预测值(6.63%)相对误差小于5%。【结论】利用Box-Behnken响应面设计法得到了香菇多糖微波提取优化工艺,该工艺方便可行。     

甘薯叶黄酮微波提取工艺的响应面法优化

用响应面法优化甘薯(Ipomoea batatas)叶黄酮的微波提取工艺,研究了微波功率、微波时间、乙醇体积分数、液固比4个因素对黄酮提取率的影响.并采用Box-Behnken设计对最佳提取工艺进行了优化.结果表明,最佳工艺条件为微波功率200 W、微波时间4 min、乙醇体积分数50％、液固比43∶1(V/m,mL∶g),在此条件下甘薯叶黄酮的提取率为8.082 7％,与预测值8.314 2％基本吻合.     

响应面法对金银花中绿原酸提取工艺的优化

为优化金银花中绿原酸提取率的最佳工艺条件,在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合设计研究了乙醇质量分数、水浴时间、微波温度3个独立因子对金银花中绿原酸提取率的影响,再利用响应面分析法优化提取工艺条件。结果表明:绿原酸微波辅助提取最佳工艺条件为微波功率400W,微波温度58℃处理70 s,料液比1∶25,乙醇质量分数72%,60℃水浴加热51 min。经实际提取验证,绿原酸提取率为4.643 mg/g。     

真空耦合超声提取茶多酚的工艺研究

【目的】对比分析了真空耦合超声提取茶多酚效果的影响因素及机理,优化了茶多酚的提取工艺。【方法】以茶叶为提取原料,利用真空技术和超声波辅助浸提相结合提取茶叶中多酚类物质,研究乙醇体积分数、超声功率、料液比、提取时间、提取温度以及真空度等工艺条件对茶多酚提取效果的影响,并在单因素试验的基础上,通过响应面法优化真空耦合超声提取茶多酚的最佳工艺条件。【结果】单因素试验结果表明,乙醇体积分数为70%,提取时间为15min,提取温度为70℃时茶多酚提取率最高,超声波功率、料液比、真空度对茶多酚的提取率影响较小,综合考虑确定适宜的超声波功率、料液比、真空度分别为420W,1∶15,0.7MPa;响应面法优化得到真空耦合超声提取茶多酚的最佳工艺条件为,乙醇体积分数65%,提取时间13min,提取温度65℃,在此条件下茶多酚的提取率为22.44%。同时在各自最佳提取条件下对比了常规回流法、抽真空-回流法、超声法、真空耦合超声法4种提取方式的提取效果,结果表明抽真空-回流法、超声法、真空耦合超声法3种提取方式的提取率均达到了22%以上,其中真空耦合超声法的提取时间缩短1/2。【结论】真空耦合技术可以有效缩短茶多酚提取时间,提高了单位时间内的提取效率。     

黑豆异黄酮超声波微波辅助提取工艺的响应面优化

【目的】优化黑豆异黄酮的最佳提取工艺,为黑豆的加工利用提供参考。【方法】以东北青仁黑豆为原材料,运用超声波微波辅助提取黑豆异黄酮,通过单因素试验分析料(g)液(mL)比、乙醇体积分数、超声波功率、微波功率、微波辐射时间5个因素对黑豆异黄酮得率的影响。以单因素试验结果为基础,选择乙醇体积分数、超声波功率、微波辐射时间3个影响黑豆异黄酮得率的主要因素,以异黄酮得率为指标对提取工艺进行响应面优化分析,获取提取工艺最佳条件并进行验证。【结果】单因素试验结果表明,所选择的5个因素对黑豆异黄酮得率均有不同程度影响。其中当料液比达到1∶20时,黑豆异黄酮得率达到最大,为0.421%;超声波功率为300 W时黑豆异黄酮得率最大,为0.430%;当微波功率达到400W时黑豆异黄酮得率最大,为0.419%;微波辐射时间为120s时黑豆异黄酮得率最大,为,0.439%;乙醇体积分数为60%时黑豆异黄酮得率最大,为0.431%。响应面优化的黑豆异黄酮超声波微波辅助提取的最佳工艺条件为:料(g)液(mL)比1∶20、乙醇体积分数62%,超声波功率310W,微波功率420W,微波辐射时间120s,在此条件下黑豆异黄酮的得率为(0.473±0.005)%,较单因素最高提取得率提高了6.9%。【结论】用超声波微波辅助法提取黑豆异黄酮具有用时短、操作简单、得率较高等特点,可用于工业化生产黑豆异黄酮。     

超声波辅助提取茶多酚工艺条件的优化

【目的】探索超声波辅助提取茶多酚的最佳工艺条件,为茶多酚的提取和综合利用奠定基础。【方法】以紫阳群体种绿茶为材料,采用二次回归正交旋转组合设计对茶多酚超声波辅助提取工艺进行优化。【结果】建立了料(g)液(mL)比、乙醇体积分数、超声时间、超声温度、超声波功率5因素与茶多酚提取率之间的回归优化模型,模型拟合检验P<0.000 1,决定系数R2=0.926 0,失拟性检验P=0.223 4>0.05不显著,模型达到极显著水平,无失拟因素存在,回归模型与实测值能够较好拟合。5因素对茶多酚提取率的影响大小依次为:料液比>乙醇体积分数>超声温度>超声时间>超声波功率。从模型得出的最佳提取工艺为:料(g)液(mL)比1∶35.8,乙醇体积分数77.6%,超声时间37.6 min,超声温度72.1℃,超声波功率248.4 W。【结论】优化了茶多酚超声波辅助提取的最佳工艺,在优化后的最佳工艺参数下,茶多酚提取率最高可达21.78%,较传统乙醇浸提方法提取时间缩短,且提取率提高了8.56%。     

响应面法优化地参三萜酸提取工艺及抗氧化活性分析

【目的】优化提取地参三萜酸工艺,分析其抗氧化活性,为地参生物活性成分的进一步研究及功能性产品开发提供参考依据。【方法】采用醇提法提取地参三萜酸,以乙醇体积分数、料液比、提取温度和提取时间为影响因素,三萜酸提取量为评价指标,通过单因素试验和响应面优化试验,对地参三萜酸提取工艺进行优化,并测定其对2,2-联苯基-1-苦基肼基自由基（DPPH·）、2,2-联氮-双3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二铵盐自由基（ABTS+）和羟自由基（·OH）的清除率,以抗坏血酸（Vc）作阳性对照。【结果】4个因素对地参三萜酸提取效果的影响排序为：乙醇体积分数>料液比>提取温度>提取时间,其中乙醇体积分数有极显著影响（P<0.01）,料液比和提取温度有显著影响（P<0.05）,两因素之间的交互作用对地参三萜酸提取影响不显著（P>0.05）;地参三萜酸最佳提取条件为：提取时间2.0 h、乙醇体积分数为95%、料液比1∶40、提取温度50℃,在此条件下,地参三萜酸提取量为1.9431 mg/g,与理论值（1.9440 mg/g）差异小。抗氧化活性结果表明,地参三萜酸对DPPH·、AB...     

红缘拟层孔菌多糖提取工艺的响应面优化

【目的】优化红缘拟层孔菌多糖的超声提取工艺,为其工业化生产和综合利用提供依据。【方法】以红缘拟层孔菌为材料,考察超声功率、提取温度、液(mL)料(g)比和提取时间对红缘拟层孔菌多糖得率的影响;在此基础上,通过Box-Behnken响应面法,设计4因素3水平试验,建立多糖提取回归方程,确定其最佳提取工艺。【结果】超声功率、提取温度、液(mL)料(g)比和提取时间4个因素对红缘拟层孔菌多糖提取的影响大小依次为:提取温度超声功率提取时间液料比,在单因素试验及响应面优化基础上,确定红缘拟层孔菌多糖的最佳提取工艺为:超声功率60W,提取温度63℃,液料比21∶1,提取时间32min;在此条件下,多糖得率为12.87%,纯度为69.42%。【结论】得到了红缘拟层孔菌多糖超声提取的优化工艺,该工艺方便可行。     

超声微波双辅助提取西番莲种籽油粕中黄酮的工艺研究

以紫果西番莲种籽油粕为研究对象,利用超声微波双辅助法提取油粕中的黄酮,研究乙醇体积分数、料液比、超声功率、超声时间、微波功率、微波时间6个因素对黄酮提取率的影响,结果表明,超声时间、乙醇体积分数、料液比、微波功率对黄酮提取率影响极显著,超声功率、微波时间对黄酮提取率影响显著。采用响应面分析法优化提取工艺参数为:乙醇体积分数73.78%、料液比1∶56.02(g/m L)、超声功率300 W、超声时间50 min、微波功率160 W、微波时间90 s,该条件下黄酮提取率为117.53 mg/g,比常用的乙醇浸提法提高14.81%。     

青稞转录因子HvnANT1基因的克隆与表达分析

为探究HvnANT1基因在青稞粒色形成过程中的基因表达模式,以紫粒青稞‘涅如姆扎’和白粒青稞‘昆仑10号’为试材,利用简化基因组GBS(Genotyping-by-Sequencing)对青稞紫粒进行基因定位,克隆到HvnANT1基因,对其进行生物信息学分析。结果表明：1）在7H染色体的84.30—86.00cM获得1个MYB类转录因子,命名为HvnANT1。2）该基因长1 033bp,其完整开放阅读框为762bp,编码253个氨基酸。HvnANT1蛋白分子量为27.14kU,是亲水性的不稳定碱性蛋白且不存在跨膜结构,无信号肽。该蛋白的二级结构主要是由无规卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角组成,具有2个SANT结构域（分别位于第13—第63个;第66—第114个氨基酸）。3）同源比对与系统进化分析表明：青稞HvnANT1蛋白与大麦、乌拉尔图小麦、高梁、玉米、二型花、小米、水稻、土瓶草、车轴草和杨梅10种植物的ANT1蛋白序列相似性分别为100.00%、88.85%、54.64%、60.95%、60.82%、58.46%、57.61%、37.76%、36.05%和36.33%;这些序列都具...     

乌梅等20种中药对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性研究

【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性.【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取,采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性.【结果和结论】乌梅、黄连Rhizoma coptidis、诃子Terminalia chebula、秦皮Cortex fraxini、地榆Sanguisorbae officinalis、虎杖Polygonum cuspidatum 6种中药提取物对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)范围是6.25~50.00 mg/mL;大青叶Isatis indigotica、茵陈Artemisia capillaris、甘草Glycyrrhiza uralensis和白鲜皮Dictamnus dasycarpus 4种中药提取物的MIC范围是50.00~100.00 mg/mL;黄柏Phellodendron amurense、杜仲Eucommia ulmoides、金银花Lonicera japonica、柴胡Bupleurum chinense、蒲公英Taraxacum mongolicum、板蓝根Baphicacanthus cusia、栀子Gardenia jasminoides和黄芪Astragalus membranaceus等10种中药提取物的MIC100.00 mg/mL.联合抑菌试验结果表明,乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合抑菌指数(FICI)≤1,乌梅、虎杖分别与秦皮的FICI2.乌梅、黄连、诃子、虎杖、秦皮、地榆对胸膜肺炎放线杆菌均具有较好的体外抗菌活性;乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合为相加、协同作用;秦皮分别与乌梅、虎杖为拮抗作用.     

4种蝴蝶雄性生殖系统形态学研究

【目的】明确4种蝴蝶雄性生殖系统的形态学结构。【方法】将新鲜标本剪下腹部,在Motic SMZ168-BL型显微镜下观察解剖,用Q Imaging Retiga 2000R(CCD)显微成像系统照相,采用Montage图像叠加软件进行图像处理。【结果】描述了4种蝴蝶的雄性生殖系统,其中外生殖器的差异主要表现在囊形突、钩突、背兜、阳基轭片等上,而内生殖器的主要差异表现在精巢、复射精管、单射精管及附腺上。【结论】4种蝴蝶雄性生殖系统的各部分结构特征存在较大差异。     

岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性研究

【目的】研究岚皋魔芋软腐病病原细菌生物多样性。【方法】采用组织分离法分离纯化魔芋软腐病球茎及叶柄中的致病菌,通过魔芋球茎、胡萝卜及马铃薯块的侵染试验初步确定其致病性,再利用魔芋球茎侵染致病及盆栽致病性试验确认其致病性;经菌落与细胞形态、生理生化特性及16SrRNA序列测定确定病原菌的类型。【结果】从魔芋软腐病球茎及叶柄中共分离获得16株细菌,侵染试验表明,其中CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1、CDS2-B2、CZS-B4和CZS-B6共6株细菌可使魔芋球茎表现软腐症状,并导致盆栽魔芋发病;6株细菌的菌落与细胞形态均存在差异;在魔芋、胡萝卜及马铃薯块上的侵染能力不同;16SrRNA序列分析表明,菌株CDS1-B1、CDS1-B2、CDS2-B1及CDS2-B2均与菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)亲缘关系最近,菌株CZS-B4与菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)亲缘关系最近,相似度为98.8%,菌株CZS-B6与菊果胶杆菌(Pectobacterium chrysanthemi)的相似度达99.9%。【结论】导致岚皋县魔芋软腐病的致病细菌存在生物多样性,其致病性也存在差异,其中新发现的魔芋软腐病原菌菊果胶杆菌(Pecto-bacterium chrysanthemi)致病性最强,菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)和菊欧文氏菌(Dickeya dadantii)致病性较弱。     

细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测

构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。     

四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1与ESBLs基因共转移分析

为了解四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1耐药基因流行情况,及其与超广谱β-内酰胺酶基因(ESBLs)共存和共转移的特征,采用微量肉汤稀释法检测菌株对不同抗菌药物的敏感性;采用PCR检测菌株mcr-1,以及mcr-1阳性菌株中ESBLs基因类型;采用质粒接合转移试验分析了mcr-1与ESBLs基因共转移的耐药机制。结果显示:190株大肠杆菌的mcr-1检出率为36.84%,75.71% mcr-1阳性菌株中同时检出ESBLs基因,主要以blaTEM-1、blaCTX-M-55和blaCTX-M-14为优势基因;mcr-1阳性菌对氨曲南(ATM)、头孢噻肟(CTX)和多黏菌素E(COL)耐药率极显著高于mcr-1阴性菌(P<0.01);质粒转移率为47.14%,其中获得mcr-1和ESBLs基因共转移的接合子表现出与供体菌相同的耐药表型及耐药基因。综上,在四川省食品动物源大肠杆菌中,mcr-1与ESBLs基因共存现象广泛存在,且耐药基因易发生水平传播,对菌株多重耐药性的产生具有重要意义。     

绣线菊内生真菌的分离及对植物病原菌的抑制作用

采用组织分离法,以PDA培养基为分离培养基,从绣线菊的根、茎和叶中分离获得39株内生真菌。平板对峙结果表明, 21株活性菌株对6种植物病原菌（辣椒疫霉病原菌、番茄枯萎病原菌、苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、葡萄灰霉病原菌、小麦赤霉病原菌）有不同程度的抑制作用,其中菌株XXT10对苹果腐烂病原菌、苹果炭疽病原菌、番茄枯萎病原菌、小麦赤霉病原菌的抑制率分别达到73.2%、72.5%、39.5%和42.7%。通过测得的ITS rDNA 序列与GenBank数据库中已知序列比对后该菌为链格孢属菌。生物学特性试验表明,该菌株在28～32℃时,选择PDA培养基,分别以乳糖和蛋白胨作为碳、氮源,酸碱度中性的条件下,菌落的生长状况最佳。     

摘除眼柄与注射眼柄粗提物对凡纳滨对虾性腺发育相关基因表达的影响

利用荧光定量PCR技术,检测了眼柄粗提物对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)性腺发育相关基因(DMC1、VASA和VTG)表达的影响,探讨性腺抑制激素(GIH)在性腺发育过程中的调控机制,结果表明:DMC1和VASA只在凡纳滨对虾精巢和卵巢中表达;摘除眼柄后,精巢和卵巢中DMC1表达量均显著性降低(P0.05),而注射眼柄粗提物后精巢和卵巢中DMC1表达显著增高(P0.05);相反,摘除眼柄后,精巢和卵巢中VASA以及卵巢中VTG基因表达量显著增高,但注射眼柄粗提物后性腺中的VASA和卵巢中的VTG表达量显著降低。结果表明眼柄粗提物通过影响生殖相关基因的表达影响凡纳滨对虾的性腺发育。     

扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin部分片段克隆及不同体节mRNA转录水平分析

旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异,最终克隆获得749bp的serpin基因片段。进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系。标准曲线分析显示,serpin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。同时试验结果显示,serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用。     

小立碗藓PpLBD20基因敲除载体的构建及功能研究

LBD(Lateral organ boundaries domain)是植物中特有的基因家族.前期研究发现灰霉菌处理小立碗藓导致配子体中的PpLBD20上调表达,但PpLBD20的功能尚不明确.因此提取小立碗藓DNA,PCR扩增PpLBD20基因的上下游片段,依次插入PTN182载体,利用同源重组原理构建敲除表达载体,酶切和测序验证插入序列的正确性.通过工作浓度为20％的PGE 6000介导小立碗藓原生质体转化,筛选鉴定得到敲除PpLBD20后的突变体植株,观察到敲除后小立碗藓不形成茎叶体结构且配子体成丝状.结果为深入探究PpLBD20在小立碗藓的形态建成调控病原菌侵染的抗性作用奠定基础.