牛超数排卵方法

超数排卵(superovulation)简称超排,指在母畜发情周期中的适当时间为其注射促性腺激素．使其卵巢上有比自然状态下更多的卵泡发育并排卵的技术。用激素处理动物进行超数排卵是进行胚胎移植、转基因、克隆等研究的基础之一,通过超数排卵可以获得大量整齐、优质的卵子或受精卵。尽管目前超排的方法已被广泛应用．但超排产生的胚胎有15％～20％(或更高的比率)不能用于移植。     

体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛受精卵体外发育的影响

本研究探讨了体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛卵母细胞体外受精后体外发育的影响。试验结果表明，体外受精温度为39℃、体外受精时间12h时，卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率最佳；卵子的质量对受精卵体外发育的影响很大。     

羔山羊超数排卵及体外胚胎生产技术研究进展

幼畜超数排卵的研究起始于20世纪50年代。1990年旭日干等用FSH和HCG对2．5～7月龄的羔山羊进行超排处理获得体内成熟卵母细胞，经体外受精后移植给母山羊，得到了世界上第一胎试管山羊，从而证明羔羊卵母细胞经体外受精后可以发育为正常的个体。利用羔山羊超数排卵得到的卵子进行体外受精，可以扩大体外受精所需卵子的来源．同时将此技术应用于山羊育种，还可以缩短育种过程的世代间隔。     

羔羊超数排卵技术在绵羊快速繁殖技术中的应用研究

羔羊超数排卵技术是根据幼龄羔羊卵泡发育的独特生理特点而提出的一项获取绵羊卵母细胞的新技术。作者采用FSH+PMSG和FSH+LH两种不同的处理方法对8只6周龄的高山细毛羊进行超数排卵,以另外4只作为对照组,并对采集的卵子进行体外成熟,探索羔羊超数排卵技术在绵羊快速繁殖技术中的应用。处理后两组共获得发育卵泡数583个,回收卵母细胞数为255枚,成熟卵母细胞数为128枚,平常成熟率为50%。     

初情期前小母猪的超数排卵及胚胎发育研究

对25头3～4月龄小母猪超数排卵(简称超排),平均每头供体获得24.12枚卵子,这种小母猪的超排卵能正常受精,受精率达93.1%.受精卵在体内能经历正常的发育,约有89.5%的受精卵能发育至桑椹期以上胚胎.     

几种冷冻条件对牛体外受精卵发育率的影响

试验比较了乙二醇 (EG)、丙二醇 (PG)、二甲基亚砜 (DMSO)、甘油 (G)和不同的投液氮温度 (- 33℃或 - 4 0℃ )对牛体外受精卵冷冻后发育率的影响。结果 :投液氮温度无论是 - 33℃或 - 4 0℃ ,均以 1.5 mol/ L EG的冷冻效果为最好 ,与 1.5 mol/ L PG相比 ,受精卵的发育率差异显著 (39.7% vs19.2 % ;4 7.8% vs2 4 .7% ,P <0 .0 5 ) ;同 1.5mol/ L DMSO和 1.5 mol/ L G相比 ,受精卵的发育率差异极显著 (39.7% vs 16 .1% or 13.3% ;4 7.8% vs 19.2 % or17.3% ,P <0 .0 1)。 - 4 0℃投液氮 ,受精卵冷冻后的发育率略高于 - 33℃ ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。以 2 5 % EG 2 5 % PG作为细胞外玻璃化溶液对牛体外受精卵进行冷冻 ,冷冻后受精卵的发育率达 5 8.9% ,高于用 1.5 mol/ L EG冷冻在 - 4 0℃投液氮这一处理 (47.8% ) ,但无统计学上差异 (P >0 .0 5 )。然而 ,试验组冷冻后受精卵的发育率均极显著低于对照组 (80 .6 8% ,P <0 .0 1)。结果表明 ,投液氮温度以 - 4 0℃为较好 ,防冻剂以 EG的冷冻效果为最佳。玻璃化冷冻法完全可以应用于冷冻牛体外受精卵     

体外培养条件对延边黄牛受精卵体外发育的影响

从延边黄牛卵巢中采集未成熟的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精及受精卵体外培养。结果表明 :1将卵子用 2种不同的培养液进行体外成熟培养和受精卵体外培养 ,TCM199组的卵裂率 (5 6 .3% )极显著高于 D- PBS组(33.6 % ) (P<0 .0 1) ;TCM199组的囊胚发育率和孵化率 (15 .1%、13.7% )虽高于 D- PBS组 (10 .5 %、8.7% ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。2以 TCM199作为基础培养液 ,分别用含激素培养液和不含激素培养液进行成熟培养和受精卵体外培养 ,添加激素组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (81.2 %、17.5 %、15 .3% )高于没有添加激素的对照组 (75 .8%、12 .1%、10 .5 % ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。 3体外受精卵与单层颗粒细胞共培养组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (78.0 %、11.5 %、9.9% )显著高于非共培养组 (6 8.1%、5 .4 %、3.6 % ) (P<0 .0 5 )。     

培养皿种类与牛磺酸和谷酰胺对牛胚胎体外发育的影响

本研究的目的在于探讨牛磺酸（ｔａｕｒｉｎｅ）和谷酰胺（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ） 的综合效果以及对比４ 孔培养板（４ － ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ） 和培替氏培养皿（ｐｅｔｒｉ ｄｉｓｈ）对牛卵子体外受精后的分裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响。结果表明,牛磺酸和谷酰胺对牛受精卵体外发育的作用与胚胎的培养系统和所用培养器皿有关。利用４ 孔培养板和培替氏培养皿培养牛受精卵对牛胚胎体外发育影响的对比效果不明显。     

影响犊牛早期胚胎体外发育的因素

犊牛超数排卵不但可为科研和生产提供大量可用卵母细胞,而且对于加快育种进程、缩短育种间隔、基因优良个体扩繁等存在巨大的潜力和意义。但是,多数研究表明犊牛卵母细胞在体外发育方面还不及成年牛卵母细胞,文章就诱导犊牛卵泡发育取得的主要研究成果和犊牛卵母细胞及其胚胎在发育等方面存在的问题及其影响因素进行了综述。     

奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果比较

先利用屠宰场卵巢获得的卵母细胞进行体外培养试验.在建立了培养体系获得较稳定的囊胚率的基础上,再利用具有优良乳用遗传性状的老龄奶牛进行活体采卵(OPU),获得的卵子进行体外胚胎生产,对奶牛活体采卵与屠宰场卵巢卵子体外生产胚胎的效果进行了比较.同时对奶牛重复OPU的效果及OPU卵子的培养天数对妊娠率的影响因素等进行探讨,试图为研究和生产建立一个高效的活体采卵体外胚胎生产方法.结果表明:(1)活体采卵获得的卵母细胞从形态以及后期的发育情况均明显差于屠宰场卵巢获得的卵子;OPU法的卵裂率、囊胚率(70.5%、18.3%)明显低于从屠宰场卵巢获得的卵子的卵裂率、囊胚率(75.1%、34.8%)(P＜0.01).(2)不同个体采集卵子数量差异明显(5.92枚/头与1.4枚/头)(P＜0.05).(3)同一头奶牛每次采卵数之间无显著差异,但有波动性变化.(4)奶牛OPU卵子经培养在第6 d或第7 d发育至囊胚的胚胎移植妊娠率高于第8 d发育至囊胚的胚胎.     

共培养系统的体细胞类型和状态对猪胚胎早期发育的影响

经体外成熟、受精和培养获得猪胚胎 ,采用体细胞共培养研究了体细胞类型和状态对胚胎早期发育的影响。取体外成熟的不同直径卵泡 (>5 m m,2～ 5 mm)卵母细胞的卵丘团 (颗粒细胞团 ) ,培养铺层后与猪受精卵共培养 ,组间受精卵的卵裂率和发育能力无显著差异 ;根据卵巢的状况对猪输卵管上皮细胞 (POECs)的状态进行分组 ,受精卵和卵巢表面布满卵泡的 POECs共培养 ,卵裂率显著低于卵巢表面有黄体和 /或红体的 POECs共培养组 (P<0 .0 5 ) ,虽然各组间 3～ 4-细胞的发育率无显著差异 ,但卵巢表面有红体和卵泡的 POECs共培养组的 >4-细胞的发育率显著高于卵巢表面布满卵泡的 POECs共培养组 (P<0 .0 5 ) ;受精卵在共培养系统和非共培养系统中的卵裂率无显著差异 ,受精卵非共培养系统中 3～ 4-细胞的发育能力显著低于颗粒细胞共培养组 (P<0 .0 5 ) ,极显著低于 POECs共培养组 (P<0 .0 1) ,无能力突破 4-细胞继续发育 ,与颗粒细胞单层、POECs单层共培养的受精卵 >4-细胞的发育率分别为 2 4.0 %、5 3.8% ,差异显著 (P<0 .0 5 )。结果表明 ,共培养系统对胚胎体外发育的作用 ,一方面与体细胞类型有关 ,另一方面也受输卵管上皮细胞状态的影响     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟、体外受精及GSH水平的影响

体外受精技术也称胚胎生产技术（invitro production,IVP）,包括卵母细胞的体外成熟、精子的获能、卵子的体外受精和受精卵的体外培养等几个连续的过程。半胱氨酸是GSH的前体物质,在牛体外胚胎生产过程中疏基复合物能增加细胞内GSH的合成,在受精和胚胎的开始阶段保持高浓度GSH可以增加发育率。试验的目的是评价半胱氨酸对猪卵母细胞的成熟率、受精率及成熟培养时期卵母细胞内GSH水平的影响,现报道如下。     

高产奶牛连续活体采卵及卵母细胞体外受精研究

在超声波扫描仪的指导下,用双孔型采卵针以11.3～12.0kPa抽吸压经阴道对8头高产奶牛分别连续实施7次活体采卵,每4d1次,共采集卵子340个,占可见卵泡数的53.5%.每次头均采集卵子6.1个.卵子经过体外培养、体外受精、体外受精胚体外发育培养,于体外受精后48h、168h统计的卵裂率、囊胚发育率分别为75.0%和29.7%.研究结果表明,在超声波扫描仪指导下对奶牛连续进行活体采卵,将所得卵子进行体外成熟、体外受精、体外培养,在生产中是可行的.     

哺乳动物小腔卵泡的体外发育

随着胚胎工程技术和辅助生殖技术的发展,对胚胎数量、质量要求都在增加。超数排卵、卵母细胞体外成熟等增加了卵母细胞利用率,但卵巢内大腔卵泡非常有限。因此小腔卵泡作为一种巨大的卵母细胞来源越来越受到众多学者关注。研究小腔卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精发育机制,有利于提高小腔卵泡卵母细胞的发育力。     

日本牛体外受精卵冷冻后移植成功生产双子

日本农林水产省福岛种畜牧场(场长高桥洁)和农林水产省畜产试验场都开展了牛体外授精技术的开发。1986年4月3日,福岛种畜牧场生产了世界第一胎牛体外受精卵经冷冻后移植成功的双生牛犊。该体外受精卵是1985年5月17日从屠宰场的淘汰牛卵巢上采取未成熟卵子,在体外成熟后授精,然后移入兔输卵管内培养5天,最终使其发育到能以非手术法移植于受体牛的阶段,于1985年5月23日冷冻保存,7月23日将冷冻保存于液氮中的该体外受精卵解     

体外成熟培养20～22h牛卵母细胞激活及孤雌发育的研究

本研究将体外成熟培养 2 0～ 2 2h的牛卵母细胞 ,用Ca2 + 上升因子单一激活或组合Ca2 + 上升因子和蛋白质抑制因子激活 ,其结果单一激活的卵子激活率在 19.2 %～ 2 8.0 % ,复合激活的卵子激活率在 84 .2 %～ 86 .8%。单一激活组的卵子激活率显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,复合激活组的卵子激活率显著高于单一激活组 (P <0 .0 1) ,而单一激活组之间和复合激活组之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。复合激活组的卵裂率及孤雌发育都显著高于对照组。     

屠宰母牛卵巢卵母细胞体外受精与发育的研究

将从屠宰母牛卵巢采得的卵母细胞用含有LH或hCG的M199培养24～26小时,然后用经钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理。授精6～7小时后再用含有乳酸钠和EDTA的M199培养至48～60小时后观察受精及受精卵的发育情况。结果表明,卵子的受精率及受精卵的发育率与卵母细胞成熟用培养基、授精用精子(新鲜或冷冻)以及供卵牛的品种均有关系。将用含有hCG的M199培养成熟的卵子,以获能处理过的新鲜精子授精后,其受精率和受精卵子中单精子受精并发育为2～8细胞期胚的比率在蒙古牛为91.4％(265/200)和19.6％(52/265),在黑白花奶牛为69.7％(62/89)和4.8％(3/62)。     

延边黄牛卵母细胞激活及孤雌发育

探讨了提高延边黄牛卵母细胞激活率及孤雌发育率的适宜方法。从屠宰场回收的卵巢中采集未成熟的卵母细胞 ,置于体外成熟培养液中 ,体外成熟培养 2 0～ 2 2 h。将体外成熟的卵母细胞 ,分别用不同浓度的乙醇或 Ca- ionophore进行单一激活处理。试验结果表明 ,用 5 %、7%、9%、1 1 %及 1 3 %乙醇激活卵子 ,激活率分别为 4 1 .2 %、4 7.2 %、5 3 .1 %、3 9.7%及 2 3 .4 %,7%和 9%乙醇处理组的卵子激活率显著高于其他组 (P<0 .0 5 ) ,但二者之间差异不显著 (P>0 .0 5 )。用 2 .5、5 .0、7.5μm ol/L Ca- ionophore激活卵子 ,激活率分别为 2 9.3 %、5 1 .8%、4 5 .4 %,5 .0、7.5μmol/L Ca- ionophore处理组的卵子激活率显著高于 2 .5 μmol/L 组 (P<0 .0 5 )。用 9%乙醇或 5 .0 μm ol/L Ca- ionophore分别与 1 0 m g/Lcyclohexim ide(CH)组合激活卵子 ,卵子的激活率分别为 77.3 %和 76 .8%,比单独用 9%乙醇 (48.8%)或 5 .0μmol/LCa- ionophore(43 .2 %)的激活率显著提高 (P<0 .0 5 ) ,二者卵子的卵裂率和发育到 8细胞期的孤雌发育率均无显著差异     

牛体外胚胎培养技术研究进展

为提高优秀淘汰牛的利用价值,国内外对牛体外胚胎培养技术做了大量研究,本文针对牛体外卵子获得方式、卵子体外成熟培养、成熟卵母细胞与冻精或性控冻精体外受精及受精卵体外培养发育到囊胚等关键技术的研究进展做一综述。     

日本开辟母牛多产捷径

日本农林水产省畜产试验场从屠宰母牛卵巢中摘取未成熟的卵子,体外培养到成熟阶段后进行体外受精。将3粒受精卵置于母兔输卵管内培养至适于移植阶段,移植于霍斯坦种母牛子宫内,顺利产下了3头3胞胎小牛。首创母牛多产世界纪录。