鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体江国托，徐宝春，王永坤（扬州大学农学院２２５００１）目前，鸡传染性支气管炎（ＩＢ）已成为国内养鸡业的主要疾病之一，虽然已建立的检测ＩＢＶ及其抗体的方法很多，如琼脂扩散试验、细胞中和试验、ＥＬＩＳＡ、血凝和血凝抑...     

利用间接ELISA方法检测抗鸡传染性支气管炎病毒抗体

利用间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗鸡传染性支气管炎病毒抗体徐日福（胜利油田胜大集团种鸡场东营２５７０５５）传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）除可引起鸡的支气管炎外，尚可引起雏鸡肾炎、肠炎和母鸡产蛋下降等。该病毒属冠状病毒科，经鸡胚尿囊腔繁殖的病毒，须经卵磷脂酶处...     

用间接ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体消长规律

自 1 930年在美国北达科他州首先发现鸡传染性支气管炎以来 ,该病给养鸡业生产造成严重的经济损失[1] ,因此对于该病的诊断以及防制引起了国内外科研工作者广泛的关注并展开了大量的研究工作。由于 IB病毒型别多 ,临床表型多样化 ,以及容易发生变异等 [2 ] ,所以如何找到有效的免疫检测方法和制定正确的免疫程序 ,成为 IB研究中的重要难题。针对这一问题 ,本试验利用具有群特异性的 IBV抗体检测试剂盒对鸡的 IBV抗体消长规律进行了探索。1　材料与方法1 .1　材料　 ( 1 )试验鸡 ,购自北京某鸡场的 1日龄雏鸡。( 2 )自制 IBV抗体检测试…     

单抗夹心ELISA法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的单抗细胞株，选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗２（１）和２（４），用于建立单抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＢＶ，该方法仅与ＩＢＶ，呈阳性反应，而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。１４日龄ＳＰＦ鸡接种ＩＢＶ后，用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测，结果检出率为８０％。将     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

应用间接ELISA检测鸡传染性鼻气管炎病毒抗体

采用增殖的鸡传染性鼻气管炎病毒（ARTV）NL7784株，经PEG－20000浓缩液提纯抗原和纯化羊抗鸡IgG抗体，建立了检测ARTV抗体的间接酶联免疫吸附试验。该试验的最佳反应条件为：包被液为pH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液，抗原最佳稀释度为1：160，以含6％犊牛血清（CS）的磷酸盐缓冲液作为封闭液，稀释液用含10％CS、0.5% Tween-20的磷酸盐缓冲液，抗原与血清结合的最佳反应时间为30min；酶标抗体的最佳稀释倍数为1：1000，酶联反应的最佳时间为30min，底物的最佳反应时间为15min。本方法具有良好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒

鸡传染性支气管炎病毒具有高度的传染性，能给雏鸡和防护较差的鸡群造成很高的死亡率。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法,以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原,以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照,优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试,确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品,通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值,建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程,相关系数(R²)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本,比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I...     

传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为了快速检测针对传染性支气管炎病毒(IBV)抗体,本研究建立相应的间接ELISA(iELISA)检测方法。以本实验室分离的临床毒株DS10为检测抗原,经过差速离心纯化获得DS10病毒作为包被抗原,利用方阵试验,优化一系列条件,最终确定了最佳的ELISA反应条件。抗原最佳包被浓度为0.11mg/mL,血清最适稀释度为1:100,封闭液为含1%BSA的PBST,封闭时间为60min,一抗作用时间90min,HRP标记的兔抗鸡IgG稀释倍数为1:3500,作用时间为60min,显色时间为10min。用iELISA方法和血凝抑制试验(HI)同时检测145份血清样品的结果表明,建立的iELISA方法与常规的HI检测的符合率为92.41%,iELISA和HI的阳性检出率分别为92.41%和90.34%,iELISA的敏感性略优于HI。     

ELISA检测鸡传染性贫血病病毒抗体中的非特异性反应问题

为了监测ＣＳＩＲＯＳＰＦ鸡群，经常用商业ＥＬＩＳＡ试剂盒检测鸡群的抗鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）抗体。近来发现个别鸡群的阳性率达１８．２％，占总数的２．７％。但后来采血发现大部分可疑鸡都为阴性，可见前面的结果存在假阳性。     

应用PPA—ELISA检测鸡传染性法氏囊病卵黄抗体

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种高度接触性传染病,已成为影响养鸡业的重要疫病之一。目前,防治本病的主要手段是运用疫苗接种,对于疫苗免疫后抗体水平的监测,国内外普遍采用血清进行琼脂扩散试验。为避免采血应激对鸡生产性能的影响,我们试图运用卵黄替代血清,应用PPA—ELISA检测鸡     

应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究

用鸡传染性贫血病病毒（ＣＩＡＶ）ＭＳＢＩ－ＴＫ５８０３毒株感染的ＭＤＣＣ－ＭＳＢ；细胞涂片为抗原，建立了检测ＣＩＡＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＩＦＡ）。应用该ＩＩＦＡ方法对人工感染的ＳＰＦ鸡进行了检测１５只１日龄ＳＰＦ鸡在接种后第７、１４天时均呈阴性反应；２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，２１天时２只鸡呈弱阳性反应，２８天时均呈弱阳性反应，３５天时呈明显阳性反应；１４只４０日龄ＳＰ     

肾型鸡传染性支气管炎病毒疫苗免疫机制初探：鸡抗肾型鸡传染性支…

采用肾型ＩＢＶ毒株抗原研制成渍佐剂灭活苗接种鸡群，结果表明，血清中抗体形成快，抗体水平较高，维持时间较长且较高的免疫保护力。为此我们进行本试验，经高度纯化的鸡抗肾型ＩＢＶＩｇＧ，采用免疫荧光试验，间接阻断Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和细胞中和试验对其特异和中和作用加以研究，结果表明，鸡抗肾型ＩＢＶ抗体成人主要是免疫球蛋白ＩｇＧ。本文阐明了肾型ＩＢＶ与支气管炎型ＩＢＶ疫苗免疫机制的不同，为肾型ＩＢＶ油佐灭活苗     

用单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA检测传染性法氏囊病毒

利用抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性单克隆抗体建立单抗克隆抗体夹心ELISA,本方法对16株IBDV均呈阳性反应.对人工感染和自然发病的鸡法氏囊病的检出率为100％;同时对其它脏器进行了检测,以脾和肾的检出率最高,肝次之,心和肺较低.本法对IBDV蛋白的最小检出量为7.5ng/ml,因而是一种高度灵敏、特异、简便、快速的检测IBDV的方法。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研究

利用鸡传染性支气管炎M41株病毒研制了检测鸡传染性支气管炎抗体的ELISA试剂盒。抗原最佳包被浓度为0．973ug／ml，被检血清最佳稀释度为1：200，酶标结合物最适工作浓度1：1200，血清样品阴阳性临界值为0．184。本试剂盒和Aflfinitech的IB试剂盒同时检测56份血清样品，比较结果表明本试剂盒的特异性和敏感性分别为100％和88％。试剂盒保存期试验结果表明，试剂盒可保存6个月。