酶促反应循环烟酰胺型辅酶研究进展

正烟酰胺型辅酶作为最为常见的一种辅酶,参与到多种生物体的氧化还原反应中。在体外酶反应的过程中,辅酶的需求量很高,为了节省成本,辅酶循环路径成为了众多研究的焦点,本文选取近年来在这方面的研究进展进行总结。1介绍辅酶是一种可以与酶蛋白松散结合的有机小分子,对于促进特定酶反应的过程有十分重要的意义。辅酶Ⅰ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)与辅酶Ⅱ     

基于气调保鲜鲜切藕片工艺优化方法研究

[目的]优化鲜切莲藕气调包装气体比例。[方法]以菌落总数和褐变度为指标,基于单纯形-重心设计考察O_2、CO_2和N_2的不同配比对藕片的保鲜效果。[结果]经与覆膜包装对照组比较发现,气调包装能有效抑制鲜切藕片冷藏期间的微生物生长和褐变,而其保鲜效果取决于气体配比。以鲜切莲藕贮藏至第6天的菌落总数和褐变度为响应值,分别建立以气体组成比例为因素的回归模型,通过求解极小响应值获得最佳气体配比分别为67%O_2+33%CO_2和100%CO_2。进一步比较验证发现,采用100%CO_2气调包装鲜切藕片可获得较好的贮藏品质,4℃冷藏至第6天的菌落总数和褐变度分别为6.25 lg(CFU/g)和0.24。[结论]该研究结果可为莲藕及其鲜切产品的贮运品质控制提供参考。     

壳聚糖对鲜切莲藕酶促褐变相关因子的影响

为探讨壳聚糖对鲜切莲藕的酶促褐变抑制机理,在4℃下对鲜切莲藕进行壳聚糖涂膜保鲜试验,研究了不同质量分数（1％、2％）壳聚糖对鲜切莲藕品质的影响和酶促褐变相关因子的影响。结果表明：壳聚糖处理显著抑制了鲜切莲藕贮藏过程中的褐变和水分损失,保持较高的维生素C和总酚含量,显著抑制了超氧阴离子（O2·-）和过氧化氢（H2O2）的积累,保持较高的过氧化氢酶（CAT）活性,并显著抑制了多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）活性。且2％的壳聚糖处理效果更好。     

高体积分数CO_2处理对柿果实褐变的影响

涩柿果实采收后须经人工脱涩才能用于鲜食,其中高体积分数CO_2脱涩处理应用最广泛。经高体积分数CO_2处理后,柿果实在贮藏过程中也会发生褐变。多酚氧化酶PPO作为酶促褐变最关键的基因,在各种果蔬中的研究较多,而关于PPO基因是否参与涩柿果实脱涩后褐变的研究尚未见报道。以"恭城水柿"为材料,经95%CO_2处理2 d后切片,通过可溶性单宁含量测定、褐变程度观察、PPO基因克隆与表达分析研究CO_2处理对"恭城水柿"褐变的影响。结果表明,经95%CO_2处理后,柿果实的可溶性单宁含量明显下降,柿果实完成脱涩。脱涩后的柿鲜切片于20℃下放置12 h后发生明显褐变。本研究克隆获得PPO基因部分片段序列,聚类分析表明,该PPO基因与苹果PPO基因较同源;基因表达分析显示,该PPO基因在CO_2处理后的鲜切柿片中的表达量比对照低,表明该PPO基因可能与柿子脱涩后的褐变无相关性。     

贮藏温度对莲藕品质和保鲜效果的影响

针对莲藕贮藏中的褐变现象,研究不同贮藏温度对整节莲藕品质和保鲜效果的影响。将莲藕用聚乙烯袋(厚度0.03mm)包装,分别贮藏于25、12、8、4℃恒温箱中,统计20 d贮藏期内莲藕表皮褐变指数、失重率以及品质指标Vc、可溶性蛋白和可溶性糖含量。结果表明,与常温(25℃)相比,4、8、12℃在贮藏20 d内均能显著抑制莲藕表皮褐变,以4℃处理的抑制效果最显著,其次为8℃。与常温(25℃)相比,低温处理可显著抑制莲藕Vc和可溶性蛋白质含量降低,但4、8、12℃处理间无显著差异。贮藏20 d后,常温(25℃)下贮藏的莲藕可溶性糖含量显著降低,而低温处理增加了莲藕中可溶性糖含量,且随温度升高增加幅度增大。     

真空包装通过调节酶活性抑制鲜切莲藕酶促褐变

鲜切莲藕因失去外层组织保护而易发生褐变,而酶促褐变是主要原因。真空包装对鲜切莲藕的褐变有较好的延缓作用,其中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,简称PPO)和过氧化物酶(peroxidase,简称POD)的编码基因是参与果蔬褐变的主要基因。但目前关于真空包装对鲜切莲藕片相关酶活性及其编码基因表达的影响研究甚少。分析在4℃下真空包装对鲜切莲藕贮藏过程中褐变度和PPO、POD活性及其编码基因表达的影响。结果表明,真空包装对延缓鲜切莲藕褐变有较好效果,且在贮藏期内真空包装鲜切莲藕PPO、POD活性变化与其褐变度大体一致。与此同时,基因NnPPOC和NnPOD4的表达量变化对PPO、POD活性的影响与最终蓬藕的褐变度变化一致,且真空包装对基因NnPPOA、NnPOD1/2/3的表达呈现出不同程度的抑制效果,说明真空包装对鲜切莲藕的NnPPOA/C和NnPOD1/2/3/4基因表达量有降低作用,进而起到延缓褐变的目的。     

果蔬采后酶促褐变的机制及控制技术研究进展

果蔬因其富含维生素、有机酸,无机盐以及植物纤维等营养物质,越来越受消费者青睐。然而果蔬在采后运输,贮藏和加工过程中极易发生褐变,不仅影响产品的外观、风味、营养,而且还大大降低贮藏加工性能,因此褐变一直是果蔬采后研究的热点。本文从果蔬褐变的原因、酶促褐变的机制、果蔬褐变控制技术3个方面综述了果蔬采后酶促褐变研究进展。     

鲜切荸荠组织中与褐变相关酶活性研究

对鲜切荸荠和莲藕组织中与酶促褐变相关的3种关键性酶——PAL、PPO和POD进行对比。研究表明:在贮藏过程中,鲜切荸荠组织中PAL活性随着贮藏时间的延长一直呈上升趋势,说明黄色物质形成与PAL活性有密切关系;而与鲜切莲藕组织相比,鲜切荸荠组织中的PPO活性除贮藏中期略有上升外,一直呈小幅下降趋势。同时鲜切荸荠组织中POD的活性在整个贮藏过程中虽然有所上升,但变化幅度非常小,且活性都相当低。表明鲜切荸荠黄化可能并非酶促褐变的结果。     

采前喷钙和精胺对双孢蘑菇贮藏品质和采后生理的影响

以双孢蘑菇为试材,研究了离体情况下和采前喷施钙和精胺对双孢蘑菇褐变抑制率和贮藏品质的影响。结果表明,离体情况下,CaCl2和精胺对双孢蘑菇酶促褐变基本上无抑制作用,而采前喷钙和精胺处理组蘑菇的白度值较对照组下降缓慢,特别是在贮藏后期其白度值高于对照组;采前喷钙和精胺处理的双孢蘑菇在开伞率、多酚氧化酶活性、总多酚于贮藏后期体现出优势;采前喷钙和精胺更有效地抑制了双孢蘑菇的呼吸强度,用来衡量膜脂过氧化程度的丙二醛积累量始终维持在较低水平。采前喷钙较精胺对双孢蘑菇采后贮藏品质起着积极作用。     

气调包装及CO_2吸收剂对翠冠梨贮存品质的影响

研究不同比例气体组分(5%O_2、10%O_2、10%O_2+3%CO_2和5%O_2+3%CO_2)和不同量CO_2吸收剂(1、3、5 g)对翠冠梨常温贮藏品质的影响。结果发现,在12 d贮藏期内,10%O_2+3%CO_2配比能有效延缓果实硬度的下降,降低MDA含量,抑制总酚、可溶性固形物、可滴定酸含量的下降;CO_2吸收剂处理能有效降低MDA含量,减少可滴定酸和总酚的消耗,抑制果实硬度和可溶性固形物含量的下降,其中,5 g CO_2吸收剂处理效果最好。结果表明,0%O_2+3%CO_2和5 g CO_2吸收剂最合适翠冠梨的贮藏。     

茉莉酸甲酯处理对采后‘黄冠’梨低温贮藏下果皮褐变及抗氧化能力的影响

通过分析茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理对‘黄冠’梨果皮褐变及部分生理指标的影响,探讨MeJA抑制‘黄冠’梨果皮褐变的机制。分别用1、10、100 μmol/L的MeJA水溶液浸泡处理‘黄冠’梨,经商品化包装后低温贮藏,观测贮藏期间果皮褐变情况,总酚含量和多酚氧化酶(PPO)、L-苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)等抗氧化保护酶的活性以及自由基清除能力(DPPH)和过氧化氢(H₂O₂)含量等的变化。结果表明,100 μmol/L的MeJA处理,显著降低了‘黄冠’梨果皮褐变率及褐变指数,降低了PPO、PAL酶活以及总酚含量,提高了POD、CAT、APX等保护酶活性以及DPPH总抗氧化能力,降低了H₂O ₂含量。采后MeJA处理,通过降低果皮H₂O₂的积累、增强梨果皮抗氧化酶活性以及抑制PPO酶活和酚类物质的消耗,显著抑制了低温贮藏下‘黄冠’梨果皮褐变的发生。     

高浓度CO_2对采后杏鲍菇乙醛和乙醇含量及其相关酶活性的影响

为了探讨高浓度CO_2对采后杏鲍菇生理变化的调控机理,首先研究了不同薄膜包装气调处理对杏鲍菇采后品质的影响。结果表明,低O_2(2%~4%)结合高浓度CO_2(30%~40%)处理可减缓采后杏鲍菇的衰老。进一步采用人工气调处理分析了2%O_2+30%CO_2对杏鲍菇乙醛、乙醇和丙酮酸含量,以及丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶活性的影响。结果显示,与对照相比,2%O_2+30%CO_2处理提高了杏鲍菇中乙醛、乙醇和丙酮酸含量,并增强了丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶和乳酸脱氢酶的活性。可见,2%O_2+30%CO_2的高浓度CO_2处理是一种延长杏鲍菇贮藏期限的有效采后处理方法,高浓度CO_2的这种作用可能与其诱发的厌氧代谢有关。     

大白菜气调贮藏研究

研究了 Snow Spring 大白菜(Brassica pekinesis)(日本品种)在0℃和4℃下,不同 O_2%和 CO_2%配比对减少大白菜贮藏损失的影响和气调贮藏中所发生的生理失调。结果表明:气调贮藏的效果受气体成分、温度和贮藏时间长短的综合影响。在0℃和4℃下,本实验的各种气体成分中贮藏70d 的大白菜的总损失未出现显著差异,但贮藏112d 后,0℃下2%O_2-1%CO_2和4%O_2-1%CO_2的气体成分可以明显降低大白菜的贮藏损耗,前者较后者的效果更好。大白菜的叶脉褐变仅在0℃发生而且不受气体成分的影响。在0℃下贮藏112d 水浸斑出现,其严重程度主要与 CO_2浓度有关,5%CO_2水浸斑最严重。大白菜贮藏前在20℃的呼吸强度平均值为:12.80mL/kg/h,贮藏后各处理的呼吸强度稍有增加,2%O_2-5%CO_2中白菜因腐烂严重,呼吸强度高达24.75mL/kg/h。贮藏前后的乙烯释放量几乎没有差异,贮藏中未见脱帮现象。     

Bacillus sp.C3细胞色素P450CYP102A16酶活性研究

通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450 CYP102A16蛋白;以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响;用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消减法测定CYP102A16的酶活性.结果表明:CYP102A16的最适反应温度为35℃,最适反应pH为6.5～7.5,该酶在45℃以下、pH 5.0～10.0的范围内稳定;CYP102A16能完全耐受20％二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮,经10％乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45％以上,经10％正丁醇处理几乎失活;添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003～0.02 g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100) (0.1～0.2 g/L) 可使CYP102A16酶活性分别提高40％和60％左右,而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004～0.008 g/L)对该酶活性无显著影响;1～20 mmol/L K+、20～50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)均能不同程度地抑制CYP102A16的活性,在离子浓度为1～100mmol/L时抑制效应表现为Ca2+＞ Mg2+＞ NH4+＞ EDTA,抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关.     

伤处理抑制鲜切马铃薯褐变的技术及机理研究

为了解决鲜切马铃薯易褐变的问题,寻找行之有效的褐变抑制方法,本实验研究了伤处理对鲜切马铃薯褐变的抑制效果及机理。采用切伤和刮伤两种方式处理马铃薯块茎,然后分别置于5 ℃、20 ℃下放置12、18、36 h,来探究不同伤处理方式及条件对鲜切马铃薯褐变的抑制效果。结果表明,采用刮伤并于20 ℃放置18 h处理对鲜切马铃薯褐变的抑制效果最佳;处理组鲜切马铃薯货架期比对照延长了4 d。与对照相比,伤处理降低了贮藏期间鲜切马铃薯多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性及总酚含量,提高了超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性及DPPH自由基清除能力,降低了丙二醛(MDA)的含量。研究结果表明伤处理通过显著降低酚类物质的积累、酶促氧化以及提高鲜切马铃薯的抗氧化能力降低膜透性来抑制鲜切马铃薯的褐变,为抑制鲜切马铃薯褐变提供了一种简便易行、安全有效的新方法。     

抑制剂处理对杨桃汁酶促褐变的影响

[目的]为加工优质杨桃汁提供试验依据。[方法]以新鲜杨桃为原料,将其与抑制剂（柠檬酸、抗坏血酸、盐酸-L-半胱氨酸、氯化钙等）一同打浆后制备杨桃果汁,探讨不同浓度抑制剂处理对杨桃汁酶促褐变的抑制效果。[结果]4种抑制剂中,抗坏血酸对杨桃汁酶促褐变的抑制效果最好,添加量≥0.04%的抗坏血酸可有效抑制杨桃汁酶促褐变;单一的氯化钙处理对杨桃汁酶促褐变的抑制效果较差,但氯化钙与抗坏血酸2种抑制剂复合处理对杨桃汁褐变度具有明显的加成效应影响,其中0.02%Vc＋0.1%CaCl2的复合抑制剂处理对杨桃汁酶促褐变具有明显的抑制效果。[结论]该研究筛选出了优质杨桃汁加工过程中的最佳抑制剂组合。     

莲藕天然保鲜剂的研究

采用某种天然保鲜剂在不同的pH值下对莲藕进行贮藏保鲜研究,确定保鲜剂最适的pH值,并通过测定莲藕的褐变度、呼吸强度、还原糖含量、蛋白质含量、过氧化氢酶活力、多酚氧化酶活力6个指标来反映莲藕的贮藏效果。结果表明,随着贮藏时间延长,莲藕褐变度逐渐上升;呼吸强度缓慢上升;还原糖含量缓慢上升;蛋白质含量在贮藏前期变化不大,后来呈缓慢下降的趋势;过氧化氢酶活力逐渐下降;多酚氧化酶活力先下降后上升;当天然保鲜剂处理液pH值为4.4时,贮藏期延长,贮藏效果好。     

鲜切莲藕贮藏中的酚类物质变化及控制褐变的抑制剂组合筛选

挑选、清洗、预冷、切分后的鲜切莲藕采用不同褐变抑制剂组合处理 ,并贮藏于 4℃下。贮藏期间定期测定鲜切莲藕的褐变度 (BD)、总酚 (TP)、游离酚 (FP)和儿茶酚含量。试验结果表明 ,鲜切莲藕中FP占总酚的 70 %以上 ,且FP又以儿茶酚为主 ;鲜切莲藕在贮藏期间TP、FP和儿茶酚的量先上升后下降 ;效果最好的褐变抑制剂的组合是4 0mg·mL-1L Cys +1 5mg·mL-1EDTA 2Na +2 0mg·mL-1Zn(Ac) 2 。     

荔枝、龙眼采后酶促褐变反应化学机理研究进展

荔枝、龙眼采后果皮极易褐变,主要是果皮细胞中多酚氧化酶（PPO）与酚类底物的酶促反应所致。文章系统综述了荔枝与龙眼果实采后PPO酶促褐变机理、褐变底物种类确定与化学结构鉴定、外界条件对酚类底物性质的影响及贮藏期间底物含量变化规律等方面的研究进展,发现除花色素苷类物质外,有关荔枝、龙眼果皮中其他酚类褐变底物理化性质的研究鲜见报道。今后需进一步研究探讨有关酶促褐变底物种类及其化学结构鉴定、外界环境因素如何影响PPO底物性质和酶活性变化、外界环境因素与不同品种褐变过程差异的关系、贮运期间PPO底物含量的变化规律等,为控制荔枝、龙眼果实采后贮运过程中果皮酶促褐变提供理论依据。     

臭氧对鲜切莲藕酶促褐变的影响

以鲜切莲藕为原料,通过测定褐变度、失重率、总酚含量、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性,研究了臭氧处理对鲜切莲藕贮存过程中酶促褐变的影响。结果表明,随着贮存时间延长,鲜切莲藕褐变度和失重率呈增加趋势,臭氧处理可以极显著降低鲜切莲藕褐变度和失重率(P0.01),且0.3 mg/L臭氧比0.6 mg/L效果好。当贮存时间由8 d延长为12 d时,样品总酚含量和PPO、POD活性开始降低,但总酚含量变化不大,PPO和POD活性下降较快。Pearson相关性分析表明,臭氧浓度与褐变度呈负相关(P=0.024);贮存时间与失重率、褐变度、总酚含量呈极显著正相关,与PPO活性呈极显著负相关(P0.01)。鲜切莲藕用0.3 mg/L臭氧水处理12 min后,可以在0~4℃冰箱贮存8 d。