双向电泳在植物蛋白质组中的应用及影响因素分析

双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)是蛋白质组学研究中常用的技术之一,因具有较高的稳定性和重复性,在植物蛋白质组学中应用广泛。蛋白质双向电泳(2-DE)过程复杂、时间持久以及影响因素众多,本文立足蛋白质双向电泳实验过程中可能出现的各种现象,如：分离的蛋白质点过少、条纹过多导致凝胶背景模糊、高丰度蛋白点聚集沉淀及低丰度蛋白点被掩盖等,着重分析其产生的原因并提出具体的解决办法,为蛋白质双向电泳技术初学者提供参考。     

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol.L-1尿素,2 mol.L-1硫脲,4%CHAPS,65 mmol.L-1DTT,2%IPG buffer)裂解之后,上样700μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。     

森林植物分子生态学的研究方法

森林植物分子生态学的核心内容是检测其群落、种群、个体水平上的遗传多样性.较详细地综述了DNA水平上森林植物分子生态学的研究方法:DNA分子标记、DNA测序、基因克隆技术、DNA芯片技术的的原理和方法;简要介绍了蛋白质水平上的研究方法:等位酶分析和蛋白质组学的原理和方法.     

蛋白质组学及其在植物研究中的应用

蛋白质组研究将生命活动直接化和具体化,将基因功能整体化、动态化、定量化,是后基因组计划的一个重要组成部分.为全面准确了解和揭示植物生命活动规律,对其在分子水平上的研究工作应将基因组研究和蛋白质组研究并列开展,为植物各领域的研究提供更可靠的理论依据.综述了蛋白质组学的研究意义、重要研究体系及在植物研究中的应用,同时展望了未来的蛋白质组学.     

蛋白质组学概况及在植物中的应用

蛋白质组学是后基因组时代的新兴领域,本文简要介绍了其研究内容和方法,特别介绍了蛋白质组学的关键技术———双向凝胶电泳和质谱,概括了蛋白质组学在草本及木本植物中的主要研究进展,展望了植物蛋白质组学的发展前景。     

自交不亲和杏李品种‘风味玫瑰’授粉早期花柱蛋白质差异分析

采用双向凝胶电泳和质谱检测技术,对自交不亲和的杏李品种‘风味玫瑰’自花及异花授粉(‘风味玫瑰’ב恐龙蛋’)的花柱进行差异性蛋白质组学研究。研究结果表明,自花授粉与异花授粉有79个差异蛋白点,表达量差异在2倍以上的蛋白点有43个,其中自花授粉中表达丰度明显升高的蛋白点有6个,表达丰度明显降低的蛋白点有37个。只有34个蛋白点在质谱分析中成功鉴定,其中5种蛋白质分别为催化调节蛋白、防御/胁迫蛋白、结构蛋白等。这5种蛋白质直接或间接地影响花粉管在花柱中的生长。     

樟树叶片蛋白提取方法及其应用

提取高质量的蛋白质是蛋白质组研究的基础.以樟树5种化学类型(芳樟、异樟、脑樟、油樟和龙脑樟)叶片为材料,采用Tris-HCl结合TCA/丙酮沉淀法提取总蛋白质,并对提取效果进行检测.定量检测结果表明,所有样品的蛋白量都可以满足下一步消化实验的要求;PAGE电泳结果表明,Tris-HCl结合TCA/丙酮沉淀法所得图谱背景清晰,蛋白质信息量很大.检测结果说明用本试验的方法可获得高效、丰富的樟树叶片总蛋白质,能够满足蛋白全谱、磷酸化修饰、目标蛋白分析等相关研究,为深入开展不同化学类型樟树蛋白质组学研究奠定基础.     

植物花粉直感效应及其机理

在综述植物花粉直感效应对种子或果实内、外品质及其他性状影响的同时,探讨了花粉直感效应产生的机理,并提出在今后花粉直感机理研究中,要充分应用功能基因组学、蛋白质组学等现代生物技术,开展多层次研究,促进研究进程。     

蛋白质研究在植物发育过程中的应用

蛋白质组学伴随后基因组学发展的需要而诞生,其发展迅速,已广泛应用到生物学、医学等各个领域。文章综述了蛋白质研究在植物发育过程中的应用,包括了植物胚胎发育、花和种子发育过程中的蛋白质研究以及植物器官、植物激素、环境因子相关蛋白质组学研究。     

低温诱导下山茶蛋白质的变化

为给山茶的抗寒机理的研究提供依据,通过差异蛋白质组学方法,利用2-DE差异显示和质谱分析法,研究了山茶在低温条件下蛋白质的变化。结果表明,在低温处理后有6个蛋白消失,分别是247、205、309、305、163、304号蛋白,有3个新出现的蛋白,分别是180、264、261号蛋白;经质谱鉴定,在低温处理后新出现的蛋白是264号磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶蛋白、261号推定的RING型锌指蛋白和180号的假想蛋白,消失的蛋白是205和247号2个核酮糖1,5-二磷酸羧化酶前体、163和309号2个假想蛋白、304号未知蛋白和305号未命名蛋白产物。这些蛋白都可能是与山茶抗寒性相关的蛋白网络中的一部分,它们在山茶抗寒性形成中起着不同的作用。     

基于质谱的差异蛋白质组学技术在植物逆境胁迫研究中的应用

随着质谱技术的发展,蛋白质组学在林业学科中得到了极大的发展,差异蛋白质组学已经成为目前林业学科的研究热点之一。通过对国内外植物蛋白质组学在林业学科逆境胁迫中的相关应用文献的整理总结,对蛋白质组学在干旱胁迫、盐胁迫和生物胁迫等方面研究的系统综述,总结植物蛋白质组学在林业学科逆境胁迫中应用的研究现状和研究进展,并对蛋白质组学在林业学科中的应用作出展望。     

杨树叶片蛋白质双向电泳图谱的建立

[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4~7内,选用24 cm、pH 4~7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。     

蛋白组学在植物中的研究

蛋白质组学是将生命活动直接化和具体化,在研究细胞分化及信号转导、癌症的发生及治疗等方面发挥着重要作用。本文综述了环境胁迫下植物中蛋白质的变化,种子萌发和发育过程以及突变体的蛋白质的改变,以期为未来的研究工作提供基础性理论支持。     

DNA芯片技术在细胞和分子生物学研究上的应用

基因组序列信息和DNA芯片技术给研究者同时分析大规模的基因表达创造了条件,这一技术对细胞和分子生物学研究有极大的促进作用,可以同时分析数百万基因表达的DNA芯片技术将有利于科学家们对重要生物学过程的研究和探索。本文综述了有关生物芯片技术的关键技术及这些技术在基因组和基因功能分析、基因表达研究、生物信号和防御系统、细胞周期调控、转录条控机制、蛋白质组学和食品组成分析上的应用。图3参59     

西藏巨柏双向电泳叶片总蛋白提取方法优化

为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The2-DQuantKit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。     

分子生物学技术在森林病虫害研究中的应用

介绍了分子生物学技术在森林病虫害研究上的应用，涉及蛋白质技术、核酸技术、分子互作及生物芯片技术等方面的内容。     

梨自交不亲和性研究的技术进展

综述运用杂交授粉试验、蛋白质产物分析、PCR-RFLP技术、DNA序列分析和cDNA克隆等技术确定梨品种自交不亲和基因型研究的技术进展,分析了这些技术在确定梨品种自交不亲和基因型确定方面的优点和不足之处,总结了运用这些技术研究梨自交不亲和性的成果,从基因型的确定和自交不亲和基因的应用角度提出了研究的前景.     

双向电泳技术及其在植物抗性研究中的应用

双向电泳技术是蛋白质组学研究中的核心技术之一,其作为高效、高分辨率的蛋白分析手段,在现代生命科学研究中扮演着重要的角色。本文主要对其基本原理、特点以及在植物抗性研究中的应用作了简要介绍,并对其今后的发展方向作了展望。     

麻竹叶片蛋白质双向电泳体系的建立

以麻竹花药培养再生植株叶片为材料,比较了改良酚抽法、三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和裂解液法3种不同方法对麻竹蛋白质双向电泳的影响,并对上样量、等电聚焦程序、平衡时间等进行了探索与优化.结果表明,用改良酚抽法分离麻竹叶片蛋白质、确定上样量为1 mg· IPG胶条-1、等电聚焦总聚焦功率为100 000 W、胶条两步平衡时间均设置为15 min、考马斯亮进行凝胶染色的实验体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,凝胶的蛋白斑点匹配率平均为85.57％,总蛋白斑点数的相对标准差为4.86％.本研究建立了一套适合麻竹叶片蛋白质组学分析的双向电泳实验体系,为进一步研究麻竹生长发育分子调控机制及其遗传改良奠定基础.     

技术进步对企业经济增长作用的定量分析

本文根据生产函致理论,推导出了技术进步对企业经济增长作用的定量评价模型,并对某森工企业的技术进步因素进行了定量分析。对开展企业技术进步的定量研究具有一定的参考价值。