苹果树腐烂病菌拮抗枯草芽孢杆菌E1R-j抗菌蛋白的分离纯化

【目的】从枯草芽孢杆菌E1R-j菌株的发酵液中分离纯化抗菌蛋白,分析确其对苹果树腐烂病菌菌丝的抑制作用,为更好地利用该菌株防治植物病害和研制生物农药奠定基础。【方法】采用盐酸沉淀法从E1R-j发酵液中提取粗蛋白,并筛选酸沉淀的最佳pH值,然后通过反相柱RESOURCETMRPC、凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析技术,提取并分离纯化粗蛋白;在粗蛋白分离纯化过程中,以皿内对峙试验测定蛋白的抗菌活性;通过扫描电镜技术,观察抗菌蛋白对病原菌菌丝的抑制作用。【结果】以pH 4.0盐酸沉淀获得的粗蛋白活性最强,抑菌效果最佳。反相柱RESOURCETMRPC获得的活性峰收集物经凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析后,得到1个对称的活性峰,其收集物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测为单一条带,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱中显示有2个分子质量相近的条带,表明该抗菌蛋白可能含有2个亚基,2个亚基的分子质量分别为55和60ku,将该活性蛋白命名为EP-1。扫描电镜结果显示,抗菌蛋白EP-1可使苹果树腐烂病菌菌丝出现膨大、弯曲以及原生质外渗等现象。【结论】通过盐酸沉淀及柱层析技术,从枯草芽孢杆菌E1R-j发酵液中分离纯化出一种分子质量为115ku的抗菌蛋白EP-1,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长具有明显的抑制和破坏作用。     

枯草芽孢杆菌XM16分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化

以苹果腐烂病菌等22种植物病原真菌为供试菌,研究了枯草芽孢杆菌XM16无菌滤液的抑菌活性,结果表明,该无菌滤液对供试的植物病原菌具有强烈的抑制作用,抑菌谱非常广。无菌滤液经硫酸铵盐析,然后过Sephacryl S-100HR凝胶柱进一步分离纯化,获得2种不同组分的具强抑菌作用的抗菌蛋白。SDS-PAGE电泳显示,2种蛋白的分子量分别为21kD和30kD。     

枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质的性质

用硫酸铵分级沉淀枯草芽孢杆菌B-916胞外抗菌蛋白质,共获得8个蛋白质粗提物,其中硫酸铵饱和度为40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质具有较强的抑菌活性,研究结果表明:硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质浓度分别为17.261μg/m l和18.899μg/m l,上述两者对水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌有较强的抑菌活性,对马铃薯晚疫病菌则没有抑菌活性;当温度高于40℃时抑菌活性均降低,但在120℃时仍有部分抑菌活性;对pH值适应范围较宽,但在pH值为13.6时抑菌活性均丧失;经蛋白酶K、蛋白酶E、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后,抑菌活性均下降。SDS-PAGE电泳结果表明枯草芽孢杆菌B-916能分泌多种蛋白质,其中硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质中相对分子质量为48 000的蛋白质可能为抗菌蛋白质。硫酸铵饱和度40%~50%和50%~60%提取的粗蛋白质经Sephadex G-100层析后检测到4个蛋白质吸收峰。     

枯草芽孢杆菌B21抗菌蛋白的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B21对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea Pers.)有较强的抑制作用,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,利用饱和硫酸铵沉淀法得到拮抗粗提蛋白,所获粗提蛋白不耐高温,对胰蛋白酶和蛋白酶K部分敏感,对链霉蛋白酶不敏感而对氯仿敏感,作...     

枯草芽孢杆菌生防菌株Bp产生抗菌物质的条件

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在不同培养基、不同培养时间、不同温度、不同pH值、不同碳源和氮源条件下,产生抗菌物质的量有显著差异.在NB和M9两种培养液中,Bp对水稻白叶枯病菌及小麦赤霉病菌的抑菌效价随时间延长而提高,培养120h后,仍继续上升.在30℃,以pH9的NB培养的Bp对水稻白叶枯病菌的抑菌效价较高;而对小麦赤霉病菌的抑菌效价,又以20℃,pH6～9的NB培养时较高.在所测定的9种不同碳源、6种不同氮源中,以终浓度为0.2%的可溶性淀粉、0.2%的甘露醇或0.1%的葡萄糖作碳源,0.1%的硫酸铵、氯化铵、硝酸铵或半胱氨酸为氮源有助于Bp抗菌物质的产生.     

枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的性质及对魔芋软腐病菌的抑制作用

以枯草芽孢杆菌为试验材料,以魔芋软腐病致病菌胡萝卜软腐欧文氏杆菌属胡萝卜软腐菌亚种(Erwinia carotovora var.carotovora,简称软腐菌)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aure,简称金葡菌)作指示菌,采用抑菌圈法,利用不同浓度硫酸铵盐析分离抗菌蛋白.结果表明,30%硫酸铵处理盐析的蛋白对软腐菌的抑菌活性最高;抗菌蛋白对软腐菌的抗菌活性在室温至60℃处理10 min时无明显影响,70℃处理10min,其活性仅下降17.1%;在pH值5.5～10.0的范围内抗菌蛋白活性无明显变化;经过氯仿处理后抗菌蛋白活性保持最好;胃蛋白酶可降解部分抗菌蛋白.     

枯草芽孢杆菌S-16产抗菌蛋白发酵条件优化及蛋白分离纯化

以抑菌率为指标,采用单因素试验和响应面法对枯草芽孢杆菌S-16菌株产抗菌蛋白的发酵条件进行优化.结果表明,以可溶性淀粉为碳源,大豆蛋白胨为氮源,初始pH值为7.5的LB液体培养基,接种量为4.74％,在温度为34℃条件下振荡培养53 h,转速为200 r/min为菌株最佳发酵条件.在此条件下纯化得到的抗菌蛋白分子量约为...     

黄瓜内生枯草芽孢杆菌B10抗菌活性物质稳定性研究

为了明确枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B10抗菌活性物质的稳定性,采用平板对峙培养法研究了温度、紫外线、蛋白酶和pH值对其活性的影响。结果表明,高温和过度酸碱均对其抑菌活性有一定影响,蛋白酶和紫外线照射对其生防活性没有明显的影响。     

枯草芽孢杆菌Bs-916胞外抗菌蛋白质的生物功能分析

采用AKTA-epxlore层析系统,利用DEAE sepharose fast flow、Phenyl sepharose 6 F.F.和羟基磷石灰石柱层析后,分离纯化获得枯草芽孢杆菌Bs-916抗菌蛋白质Bacisubin.该蛋白质对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisease)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、白菜黑斑病菌(Alternaria oleracea)、甘蓝黑斑病菌(A. Brassicae)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici (syd.) Butl.)和水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme Sheld)均有抑菌活性,尤其对Alternaria属的病原菌具有较高的毒力.枯草芽孢杆菌Bs-916胞外抗菌蛋白质的抑菌机制是造成病原菌菌丝营养吸收困难,致使菌丝顶端膨大,分支增加,胞壁加厚、断裂,从而抑制了病原菌的生长.研究发现抗菌蛋白具有凝集素活性和核糖核酸酶活性,无蛋白酶活性和蛋白酶抑制活性.     

枯草邪包杆菌生防菌株Bp产生抗菌物质的条件

枯草芽孢杆菌在不同培养基,不同培养时间,不同温度,不同ｐＨ值,不同碳源和氮源条件下,产生抗菌物质的量有显著差异。在ＮＢ和Ｍ９两种培养液中,Ｂｐ对水稻白叶枯病菌及小麦赤霉病菌的抑菌效价随时间延长而提高,培养１２０ｈ后,仍继续上升。在３０℃,以ｐＨ９的ＮＢ培养的Ｂｐ对水稻白叶枯病菌的抑菌效价较高;而对小麦赤霉病菌的抑菌效价,又以２０℃,ｐＨ６－９的ＮＢ培养时较高。     

枯草芽孢杆菌BS-1菌株抑菌活性研究

对1株枯草芽孢杆菌BS-1进行了抑菌活性测定研究。以苹果炭疽病菌、番茄灰霉病菌、水稻恶苗病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫霉病原菌、玉米小斑病菌7种植物病原菌为指示菌,采用对峙培养法、杯碟法以及菌丝生长速率法测定了枯草芽孢杆菌及其无菌发酵液对7种植物病原菌的拮抗活性,结果表明,枯草芽孢杆菌及其发酵液对番茄灰霉病菌生长有较强的抑制作用,对苹果炭疽病菌没有抑制作用。     

枯草芽孢杆菌D-29拮抗作用及其抗菌蛋白特性研究

枯草芽孢杆菌D-29是从地肤根内分离获得的一株生防细菌,为进一步了解D-29的生防特性,采用平板对峙法测定其抑菌谱并对其抑菌蛋白进行了研究。结果表明,该菌对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌等11种植物病原真菌均具有抑制作用,其中对玉米大斑病菌的抑菌效果最好,抑制率为54.6%;确定80%饱和硫酸铵为最佳盐析饱和度,获得的粗提蛋白耐高温,对有机溶剂和紫外光照不敏感,耐酸不耐碱。     

蜡样芽孢杆菌JK14对小麦全蚀病的防治及其抑病机理

目前国内外研究较多的小麦全蚀病菌拮抗微生物是荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）。枯草芽孢杆菌用于防治植物病害国内外已有较多研究,但是对于小麦全蚀病的防治还鲜见报道。该研究利用从小麦根际土壤中分离到的1株蜡样芽孢菌,研究该菌株对小麦全蚀病菌的抑制作用及防治效果,并对其作用机制进行了初步探讨。     

生防枯草芽孢杆菌CAB-1抑菌蛋白产生条件及其稳定性研究

枯草芽孢杆菌CAB-1是一株对番茄灰霉病有显著防效的生防菌株,抑菌蛋白是其产生的主要抑菌物质之一。研究表明,菌株CAB-1产生抑菌蛋白的最佳培养条件为：接种量2%,培养温度30℃,转速180 r/min,装液量100 mL/250 mL,培养时间48 h。考马斯亮蓝法测得最佳培养条件下菌株CAB-1产生的粗蛋白浓度为0.16 mg/mL。该粗蛋白对胰蛋白酶及蛋白酶K不敏感,胃蛋白酶处理使其活性降低14%;抑菌蛋白在100℃以下处理30 min活性变化差异不显著,而121℃处理30 min其抑菌活性为对照的72%。抑菌蛋白对酸碱的耐受范围广,在pH值3~12的范围内抑菌活性均能保持在75%以上,pH值2时抑菌活性降低为对照的59%。经甲醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯及丙酮处理后该粗蛋白的抑菌活性变化不大。     

蜡样芽孢杆菌JK_(14)对小麦全蚀病的防治及其抑病机理

[目的]研究蜡样芽孢杆菌JK14对小麦全蚀病菌的抑制作用及防治效果,探讨该菌的抑病机理。[方法]从小麦根际土壤分离得到蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)JK14拮抗菌株,室内测定其带菌培养液对小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var tritici)9826菌株和9812菌株的抑制效果,探讨拮抗菌对小麦全蚀病的作用机理。利用逐步增加浓度的方法获得对利福平和全蚀菌具有抗性的双抗菌株JK1*4,对该菌在小麦体内定殖情况进行了研究。[结果]盆栽试验中,JK14对9826菌株和9812菌株的防治效果为63%和59%,高于化学杀菌剂处理的55%和51%。该菌株可以造成病菌菌丝畸变和菌丝细胞壁瓦解。JK14*在小麦根系中具有一定的消长动态,种子上的JK14*菌可以随种子发芽、生根而扩展至根部,但是单位组织上菌体数量逐渐减少。[结论]室内试验表明,蜡样芽孢杆菌JK14对小麦全蚀病有一定的防治效果。     

蜡样芽孢杆菌JK_(14)对小麦全蚀病的防治及其抑病机理（英文）

[Objective] Study on control efficacy and inhibitory effect of Bacillus cereus strain JK14 against wheat take-all disease,investigating its antifungal mechanism.[Method] B.cereus JK14 was isolated from soil in the rhizosphere of wheat,inhibitory effects of whose nutrient solution form against Gaeumannomyces graminis var tritici strains 9862 and 9812 were measured in laboratory and then for its antifungal mechanism.The strain JK14 with rifampicin and wheat take-all disease resistance was screened by increasing concentration of the two substrates,and colonization of JK14was studied.[Result] In pot experiment,the control effects of JK14 against 9862 and 9812 are 63% and 59%,respectively,which are higher than that of chemical fungicides,with 55% and 51%,respectively.JK14 could deform mycelium and causes degradation of cell wall.And there are also dynamic change of JK14 in root system.JK14 on seed could extend to root along with seed germination and rooting,but per unit tissue mycelium number decreased gradually.[Conclusion] The results indicate some control efficacy of B.cereus strain JK14 against wheat take-all disease.     

枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理

[目的]揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理.[方法]采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析;以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为...