马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂的安全性、攻毒保护率及现场应用试验

对自行研制的马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂进行了安全性、攻毒保护率及现场应用试验。结果表明，该复合剂应用于1日龄SPF雏鸡安全可靠;与鸡马立克氏病火鸡郊疹病毒（HVT）疫苗联合应用，免疫1日龄SPF雏鸡可使其有效抵抗马立克氏病病毒强毒攻击；该复合剂在2℃－8℃下保存4年后仍然有效;其现场应用效果明显，可确实提高HVT疫苗的免疫效果。     

马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂对火鸡疱疹病毒疫苗蚀斑保护率及保存期试验

就本厂研制的马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂对火鸡疱疹病毒疫苗蚀斑的保护率及保存期进行了试验.结果表明,用该复合剂配合马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗稀释剂可明显提高对疫苗蚀斑的保护率;该复合剂在2℃～4℃条件下保存4年后,仍具有很好的效果.     

马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂对火鸡疱疹病毒疫苗蚀斑保护率及保存期试验

就本厂研制的马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂对火鸡疱疹病毒疫苗蚀斑的保护率及保存期进行了试验，结果表明，用该复合剂配合马立克氏病火鸡疱疹病毒疫苗稀释剂可明显提高对疫苗蚀斑的保护率，该复合剂在2℃-4℃条件下保存4年后，仍具有很好的效果。     

马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂的研究

本项研究通过科学组方 ,成功地研制出了鸡马立克氏病疫苗保护与免疫增强复合剂。用该复合剂稀释鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗 (HVT)较原稀释液 (SPG)能提高活疫苗效价 3 0 %以上 ;与马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗同时免疫 1日龄雏鸡能显著提高免疫鸡的细胞免疫水平 (T淋巴细胞数 ,P <0 0 1 )和体液免疫水平 (B淋巴细胞数、血清中和抗体水平 ,P <0 0 5 ) ,提高免疫接种鸡的攻毒保护率 (P <0 0 5 )。     

鸡马立克氏病疫苗免疫增强剂的研究：Ⅰ.免疫增强剂对火鸡疱疹病毒（HV …

将自行研制的免疫增强剂与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗联合使用。结果表明该免疫增强剂能量显著提高ＨＶＴ疫苗的保护率和ＨＶＴ苗活力,同时能提高机体Ｔ、Ｂ淋巴细胞免疫功能。联合使用的结果,经实践证明能更有效地控制鸡马立克氏病的发一。     

马立克氏病疫苗免疫增强剂对雏鸡血液T淋巴细胞数量的影响

观察了马立克氏病（MD）疫苗免疫增强剂合火鸡疱疹病毒（HVT）疫苗免疫雏鸡后外周血清ANAE^ T淋巴细胞数量的变化。结果表明，MD疫苗免疫增强剂不但可促进外 因液ANAE^ T淋巴细胞总数的增多，而且对免疫早期T淋巴细胞的迅速增殖和辅助性T淋巴细胞数量的增多都有十分明显的作用。     

三种鸡马立克氏病疫苗的攻毒保护试验比较研究

为比较3种商品化马立克氏病疫苗的免疫效果,本研究将150只1日龄AA+肉鸡随机分为攻毒对照组、乾元浩疫苗组、梅里亚疫苗组、瑞普疫苗组和空白对照组5组,并按厂家说明剂量进行马立克氏病疫苗免疫。8日龄时进行马立克氏病超强毒Md5株攻毒,每天观察各组临床症状,对病死鸡进行剖检和病理组织学观察。根据免疫攻毒后的临床观察、剖检病变和病理切片等综合分析,梅里亚疫苗组的保护指数略高于乾元浩疫苗组和瑞普疫苗组,差异不显著（P > 0.05）,说明不同厂家生产的鸡马立克氏病疫苗对Md5超强毒株的攻击具有相似的保护效果。因此在生产中使用国产马立克氏病疫苗或进口马立克氏病疫苗均能对我国当前流行的马立克氏病有较好的保护效果。     

不同疫苗对IBDV分离株攻毒鸡群的免疫保护试验

本试验分别用D78苗、B87苗,CA+CF+B87三价苗,法氏囊组织灭活油苗等4种疫苗免疫鸡群,然后分别用CL、SQ、QZ等3个本地分离毒株进行攻毒,测定每种疫苗对各毒株攻毒鸡群的保护指数.结果显示,4种疫苗对CL、SQ、QZ等3个毒株攻毒鸡群的保护指数分别为组织灭活油苗100%、100%、100%,CA+CF+B87三价苗85%、94.7%、53.3%,D78苗30%、68.4%和46.7%,B87苗35%、73.7%和40%.     

禽腺病毒免疫后抗体水平分析及与攻毒保护相关性研究

本文采用推荐剂量和低于推荐剂量腺病毒相关疫苗（腺病毒+ND联苗）免疫鸡,寻找不同抗体效价的鸡进行攻毒实验,界定抗体效价和攻毒保护的相关性,确定能使禽群抵御Ⅳ型腺病毒感染的抗体临界值。对空白对照组禽群,定期采血,监测母源抗体情况,以期为禽腺病毒病的研究和防控提供参考。     

甲硝唑对鸡马立克氏病疫苗免疫作用影响的观察

选1日龄雏鸡,肌肉注射火鸡疱疹病毒(HVT)冻干疫苗,随机分为4组,每组20只.1组和2组鸡免疫同时分别应用10、100毫克/千克体重·天甲硝唑,3组免疫同时应用10毫克/千克体重·天左旋咪唑,连用3天,4组为空白对照组.采集外周血淋巴细胞和血清,应用淋巴细胞转化试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定T淋巴细胞转化和抗HVT抗体滴度.结果表明,10和100毫克/千克体重·天甲硝唑用药鸡外周血T淋巴细胞转化和鸡血清抗HVT抗体滴度均比空白对照组明显升高;10毫克/千克体重·天左旋咪唑用药后也具有类似作用.     

病毒保护剂在鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中的应用

2种不同的病毒保护剂A和B,应用于鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗生产中,3批试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,保护剂B的蚀斑数比对照平均增加121%,保护剂A最低使减少14%。保护剂B的最佳添加浓度筛选试验结果表明:1次添加浓度为1%或2%,2次添加浓度为2%。3批病毒保护剂B扩大中试试验结果表明:裂解后SPGA4万倍稀释,试验组比对照组蚀斑数平均增加66.5%。HVT活疫苗(病毒保护剂B)特异性试验结果表明,马立克氏病标准阳性血清对其特异性识别;平行冻干后,试验组比对照组蚀斑数高200%;经37℃10d耐热试验表明,试验组比对照组蚀斑数高242%;试验苗免疫攻毒保护率为75%,对照苗为33.4%。     

表达鸡IL2和IL15重组新城疫病毒的免疫增强作用研究

为提高新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫保护效果,本研究选取鸡IL2(chIL2)和chIL 15两个细胞因子作为分子佐剂,通过反向遗传操作技术分别将这两个基因克隆于NDV Clone30株中,构建表达chIL2和chIL15的重组病毒rClone30-chIL2和rClone30-chIL15.ELISA法检测结果表明两种细胞因子在重组病毒中均能够稳定表达.将重组病毒免疫雏鸡,以NDV强毒BJ株进行攻毒试验,测定其抗体产生情况和保护效果.结果表明,两种重组病毒均可以诱导雏鸡产生较高水平抗体;而且两种重组病毒保护率可达100％,具有较好的保护效果.本研究为进一步提高NDV重组基因工程疫苗的效果提供了新思路.     

马立克氏病病毒感染鸡对新城疫疫苗和法氏囊疫苗免疫反应的影响

研究了马立克氏病病毒(MDV)不同致病型毒株感染鸡后对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗抗体反应的影响。结果表明，2周龄接种MDV超强毒株RBIB和7日龄接种MDV强毒株GA的鸡HI效价均显著低于对照鸡，但在本试验条件下尚未发现MDV感染对法氏囊病病毒疫苗免疫效果有显著影响。     

表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性及生物安全性评价

为了评价表达鸡马立克氏病病毒gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB/R)的遗传稳定性,我们将纯化后的重组病毒在CEF单层上连续传30代,引起细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;覆盖含X-Gal的琼脂引起的空斑均为蓝色;间接免疫荧光实验证明rFPV-gB/R中的gB基因始终能稳定表达;序列测定结果表明,重组病毒在细胞上连续传30代、在SPF鸡上连续传5代后,gB基因序列没有发生任何变化;以0、10、20、30代重组病毒制成冻干疫苗进行的实验室免疫效力实验表明,细胞连续传代后rFPV-gB/R仍然保持了原有的免疫原性。可见重组鸡痘病毒gB基因的结构和免疫原性都是高度稳定的。为了评价rFPV-gB/R的生物安全性,我们将rFPV-gB/R通过SPF鸡连续传5代,检测病毒在鸡体的存在部位及其消长、生长繁殖性能和毒力变化;将rFPV-gB/R免疫鸡与未免疫鸡同笼饲养,攻击FPV-102E6强毒,以检测rFPV-gB/R感染鸡的接触传染性。结果显示,rFPV-gB/R在鸡体的存在时间大约为7d,在体内仅存在于接种部位;鸡体传代后痘病毒毒力有一定程度下降,gB基因核苷酸序列未发生任何变化;同居未免疫SPF鸡在痘病毒强毒攻击后全部发痘,可见重组病毒免疫鸡没有接触传染性,能在鸡体内稳定地传代,rFPV-gB/R具有高度的生物安全性。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗蚀斑计数的影响因素

目前我国生产的鸡马立克氏病疫苗的效力检验是通过测定产品的病毒含量（蚀斑形成单位）来确定的。然而在测定疫苗病毒含量的过程中，有诸多因素影响测定结果。本文仅就影响疫苗蚀斑计数的因素，通过对不同培养时间的细胞、细胞密度、溶液的pH值、不同时间配置的营养液、培养温度、覆盖琼脂量、     

Improvement of the immune response to foot and mouth disease virus vaccine in calves by using Avridine as adjuvant.

The epidemiological analysis of the cattle population during the eradication plan of foot and mouth disease (FMD) in Argentina clearly indicated a higher incidence of the disease in animals within their first year of age. It is important to improve the efficacy of the vaccination in those animals. In a previous report, we have shown the effect of an immunomodulator, Avridine (Avr), in the enhancement of the immune response elicited by FMD virus (FMDV) vaccines in experimental hosts [Berinstein, A., Pérez Filgueira, M., Schudel, A., Zamorano, P., Borca, M., Sadir, A.M., 1993. Avridine and LPS from Brucella ovis: effect on the memory induced by foot-and-mouth disease virus vaccination in mice. Vaccine 11, 1295-1301]. In this report, we analyze the effect of Avr in the improvement of the anti-FMDV immune response elicited in young animals immunized with a tetravalent vaccine. The anti-FMDV antibody response was evaluated using a liquid-phase blocking sandwich ELISA (LPBE) [Smitsaart, E.N., Zanelli, M., Rivera, I., Fondevila, N., Compaired, D., Maradei, E., Bianchi, T., O'Donnell, V., Schudel, A.A., 1998. Assessment using ELISA of the herd immunity levels induced in cattle by foot and mouth disease oil vaccines. Prev. Vet. Med 33, 283-296] while the cellular response was detected using an antigen specific lymphoproliferative test [Zamorano, P., Wigdorovitz, A., Chaher, M., Fernández, F., Sadir, A., Borca, M., 1994. Localization of B and T cell epitopes on a synthetic peptide containing the major immunogenic site of FMDV O1 Campos. Virology 201, 383-387]. The results show that, while no differences were detected in the cellular response, the anti-FMDV antibody reaction was significantly (<0.05) higher in animals immunized with the immunogen containing Avr. At 90 days post vaccination, 89-100% of the animals immunized with Avr presented predicted protection (PP) higher than 82% while just 50-61% of the animals immunized with vaccine without immunomodulator presented that characteristic. Also, it is shown that the increase in the anti-FMDV antibody titre in animals immunized with the vaccine containing Avr was mediated by an increase in the levels of both IgG1 and IgG2 which presented a significative correlation with LPELISA antibodies titres. It is concluded that the addition of Avr in the FMDV vaccines improve the immune status of the calves, the cattle population that suffers the highest epidemiological risk.     

重组鸡痘病毒vFV282活疫苗最小免疫剂量及攻毒保护试验

将重组鸡痘病毒vFV282疫苗用生理盐水作10^-1，10^-2，10^-3，10^-4系列稀释，分别免疫7天龄鸡，于免疫后21d，分别用NDV、IBDV和FPV攻毒，观察其保护率，结果除NDV攻毒在10^-4组保护率为40％（4／10），其余各组均为100％（10／10）保护。表明该疫苗的最小免疫剂量≤10^-3TCID50/0.02mL。     

区分马立克氏病病毒疫苗株CVI988与其他毒株的PCR方法的建立及应用

利用马立克氏病病毒(MDV)疫苗毒CVI988株pp38基因上游启动子区域连续5个碱基的缺失(5′-AGCCG-3′),设计2对特异性引物,建立了能区分MDVCVI988株和MDV其他毒株的PCR诊断方法。该方法对8株MDV毒株(弱毒疫苗株CVI988和814,强毒参考株GA,超强毒参考株RB1B、Md5和Md11,特超强毒参考株648A及1个中国野毒株J-E)的PCR鉴定结果均与预期吻合。以16只疑为MDV感染鸡的脏器组织核酸提取物为模板,用所建立的PCR方法,能从其中7只鸡样品中扩增出特异性条带,其检测结果与细胞分离培养和单克隆抗体的检测结果一致。试验证实,本研究所建立的PCR诊断方法具有良好的特异性和敏感性。     

口蹄疫A型灭活疫苗毒种和种子批的研究

为了保证制苗及攻毒用毒种的质量和稳定性，在对制苗和攻毒毒种的毒力、特异性、保存期、扩繁代次等进行研究的基础上，建立了口蹄疫A型灭活疫苗制苗和攻毒用毒种种子批。结果表明，原始毒种和基础毒种的扩繁代次均控制在5代以内，适宜的保存方法和保存期均为加含500mL／L甘油的PBS后在-30℃保存1年、-70℃保存2年；用于生产抗原的工作毒种，最高扩繁代次控制在15代以内，最佳保存方法和保存期为加保护剂后在-20℃保存半年、-70℃保存1年；用于效力检验的攻毒毒种采用原始毒种。通过制苗和攻毒用毒种种子批的建立，规范了口蹄疫疫苗生产和检验过程中的毒种管理。