TGF-β1诱导SUVEC向平滑肌样细胞转分化的初步研究

用不同浓度TGF-1β对猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)进行诱导,研究体外诱导SUVEC向平滑肌细胞分化的可能性。倒置显微镜下观察诱导前后细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学SP法对细胞表面特异性标志物进行染色。结果表明,诱导后细胞失去内皮细胞典型的铺路石样形态,而呈现出肌成纤维样细胞;对诱导后的细胞进行免疫组化检测,发现5～10ng.mL-1 TGF-1β诱导后,平滑肌特异性蛋白-αSMA的相对表达量均显著升高;而浓度升高为20 ng.mL-1时,升高不显著;内皮细胞特异性标志(F-ⅧRAg)的表达均显著下降。该研究表明TGF-1β可诱导猪脐静脉血管内皮细胞向肌样细胞分化,但诱导分化的能力与TGF-1β的浓度有关。     

密骨胶囊对去卵巢大鼠骨TGF-β1及Fas基因表达的影响

目的;观察密骨胶囊对TGF-β1及细胞凋亡Fas基因的影响。方法：采用免疫组化染色法分析去卵巢大鼠用密骨胶囊治疗前后骨组织内成骨细胞TGF-β1和破骨细胞Fas抗原表达的阳性率及平均光密度变化。结果：模型组骨组织TGF-β1表达下降,明显低于假手术组（P〈0．05）;Fas平均光密度及阳性单位都明显高于假手术组;而密骨胶囊高、低剂量组TGF-β1表达明显上升,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;低剂量组Fas阳性单位与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但Fas平均光密度与模型组比较无统计学差异。结论：密骨胶囊能够使去卵巢骨质疏松模鼠TGF-β1表达明显增强,表明该药治疗骨质疏松疗效机理之一,可能是通过调控TGF-β1的合成、分泌而起作用的;骨细胞凋亡活性下降,有利于减缓雌激素缺乏导致的骨量丢失,有利于成骨细胞增殖和分化。     

N-乙酰半胱氨酸对COPD患者气道上皮细胞TGF-β1表达的影响

目的：观察N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响及对气道重塑的改善，探讨NAC治疗COPD的临床疗效和怍用机制。方法：COPD患者60例随机打电治疗组和对照组．观察其治疗前后临床症状、第1秒用力呼气容积（FEV1）／用力肺活量（FVC）、FEV1占预计值的百夯比和血丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（COPD）水平及气道上皮细胞TGF-β1表达的变化情况，并与20名健康成年人作比较。结果：与对照组比较，治疗组肺功能指标和血MDA、COPD活性明显改善，TGF-β1的表达减少。结论：NAC可通过减少COPD患者TGF-β1的表达而改善气遭重塑．改善肺功能。     

IL-18对人近端肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨白细胞介素18(IL-18)对肾小管上皮细胞增殖及凋亡的作用以进一步明确其在慢性肾病进展中的作用。方法在体外实验中应用不同质量浓度(0.1、1、10、100 mg/L)的IL-18分别处理人类近端肾小管上皮细胞株(HK-2)24、36、48、72h,应用改良的MTT法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色法检测细胞凋亡。结果同一质量浓度不同作用时间,随时间的延长其光吸收值(A值)增加,两两比较差异有统计学意义(均P<0.05);同一作用时间不同质量浓度时的A值,各组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);IL-18作用24、36、48h随时间增加凋亡百分数与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),IL-18作用72h细胞凋亡明显增多,且随质量浓度增加而增加,凋亡百分数与对照组相比差异有统计学义(P<0.01)。结论慢性肾病状态下IL-18可能具有促进肾小管萎缩以至丢失的作用。     

转化生长因子β_1对奶牛乳腺组织细胞凋亡及HSP_(70)蛋白表达的影响

应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子猹1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响.用10 ng·mL-1 TGF-猹1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组.结果显示,随TGF-猹β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P<0.05),LDH活性逐渐升高,6、12、24和48 h组极显著高于对照组(P<0.01).处理12、24和48 h组织DNA发生断裂;Caspase-3活性在24 h达到高峰,并极显著高于对照组(P<0.01);上皮细胞逐渐由腺泡脱落,腺泡塌陷,但间质结构基本完整;超微结构观察显示,48 h时上皮细胞呈现染色质凝集、线粒体肿胀等明显凋亡特征,而成纤维细胞胞浆致密、线粒体丰富,结构较完整.处理3～12 h后组织过表达HSP70,且均显著高于对照组(P<0.05).结果提示:TGF-猹1以促进上皮细胞凋亡的方式促进奶牛乳腺发生退化.     

慢病毒介导的CRISPR/Cas9敲除TGF-β1基因对鹿茸软骨细胞增殖的影响

为探究TGF-β1基因在鹿茸快速生长期的作用,利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计并构建3条靶向梅花鹿TGF-β1基因第1外显子的gRNA寡核苷酸序列,在人胚肾细胞293T内进行慢病毒包装,通过neo抗性筛选稳转细胞株。提取稳转细胞株总蛋白,经BCA法测定总蛋白质量浓度,Western Blot检测TGF-β1蛋白的相对表达水平;MTT法检测TGF-β1基因敲除对鹿茸软骨细胞体外增殖的影响。结果表明:成功构建了靶向梅花鹿TGF-β1的CRISPR/Cas9基因敲除载体p BOBI-gRNA2。TGF-β1基因的缺失抑制了鹿茸软骨细胞的体外增殖。     

脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响

研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞,收集细胞,提取RNA,用实时荧光定量PCR方法检测IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;同时收集培养上清,用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明,脂多糖浓度(1~1000ng/mL)对IL-1β、TNF-α影响显著(P<0.05);刺激时间(1~24h)对IL-1β、TNF-α影响显著(P<0.05),且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。     

雀鹰肾脏的组织结构观察及AQP-2、EGF和TGF-β_2在肾脏中的表达

利用切片法观察了雀鹰(Accipiter nisus)肾脏的组织结构,应用免疫组织化学法检测了水通道蛋白-2(AQP-2)、表皮生长因子(EGF)和转化生长因子β2(TGF-β2)在雀鹰肾脏中的表达。结果表明:雀鹰的肾脏主要由许多肾单位、集合管和少量结缔组织构成;肾单位是肾脏的结构功能单位,由肾小体和与之相连的上皮样肾小管构成;肾小球结构简单,由一团盘曲的毛细血管构成;近曲小管上皮细胞游离面有刷状缘;远曲小管和集合管管腔较大,腔面无刷状缘;近曲小管上皮细胞呈EGF和TGF-β2免疫反应阳性;集合管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性;EGF、TGF-β2和AQP-2可能发挥着不同的功能,对肾脏中水分的平衡及肾单位的功能等可能具有重要的调节作用。     

护卵汤对慢性应激超排卵小鼠卵巢TGF-β1,P-Smad3及FSHR mRNA表达的影响

目的 观察护卵汤对慢性应激超排卵小鼠卵巢转化生长因子-β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）、信号蛋白P-Smad3及卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor,FSHR）mRNA表达的影响。方法 建立慢性应激小鼠模型,造模成功后,随机分为模型组、护卵汤组和生长激素组,另设正常组。在超排卵第3天和注射绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,HCG）24 h后,检测各组卵巢TGF-β1、P-Smad3及FSHR mRNA表达。结果 与模型组比较,在超排卵第3天,护卵汤组和生长激素组TGF-β1、P-Smad3及FSHR mRNA表达均显著升高（P<0.01或P<0.05）;注射HCG 24 h后生长激素组表达升高更明显（P<0.01）。结论 护卵汤可能通过激活TGF-β/Smads信号通路,发挥促进卵泡发育和改善卵巢功能的作用。     

电针颈夹脊穴对颈型颈椎病模型兔椎间盘软骨细胞MMP-3、TGF-β1的影响

目的 采用ELISA法观察电针颈型颈椎病（CS）模型兔对其椎间盘软骨中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、转化生长因子-β1（TGF-β1）含量的影响,从而探讨电针治疗颈型CS可能的作用机制。方法 将18只新西兰纯种兔按随机数字表法随机分为空白组、模型组、治疗组,每组6只,除空白组外其余两组采用复合病因造模法造模,连续10周。造模成功后,治疗组予电针治疗,其他两组正常饲养,连续4周。耳缘静脉注射空气栓塞处死各组动物,取C_4-7椎间盘组织,分离出软骨终板,采用ELISA法观察椎间盘软骨中MMP-3、TGF-β1的含量。结果 与空白组比较,模型组兔椎间盘软骨细胞中MMP-3、TGF-β1含量均升高,差异具有显著统计学意义 （P<0.01）。与模型组比较,治疗组兔椎间盘软骨细胞中MMP-3含量降低,TGF-β1含量升高,差异具有显著统计学意义（P<0.01）。结论 电针颈型CS模型兔颈夹脊穴可以降低其椎间盘软骨细胞中MMP-3含量,抑制其对软骨细胞外基质（ECM）的降解,维持血窦-软骨终板界面弥散营养物质的能力,延缓或阻止椎间盘退变的发生;同时可以升高TGF-β1含量,促进ECM的合成,对椎间盘进行修复,维持椎间盘软骨终板的正常形态结构,减轻早期椎间盘退变的程度。     

中药组方“回乳康”对回乳期奶牛血清E、P4和TGF-β1含量的影响

【目的】探究中药组方"回乳康"对回乳期奶牛血清雌激素(Estrogen,E)、孕酮(Progesterone,P4)和转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)含量的影响。【方法】选取即将干乳日产奶量为(15.42±0.71)kg的健康奶牛80头,随机分为4组,每天饲喂0(对照组)、400、500和600 g"回乳康"中药,采用逐渐干奶法回乳,分别在回乳第0、1、3、5、7、9和11天采集奶牛尾静脉血,并记录奶牛单日产奶量,采用ELISA法检测血清E、P4和TGF-β1含量。【结果】0、400、500和600 g处理回乳时间分别为11、7、5和5 d;各组奶牛血清E含量在回乳期均随时间推移呈下降趋势,对照组下降趋势较中药组慢;对照组奶牛血清P4含量在回乳期变化不显著,而中药组奶牛血清P4含量均随时间推移呈上升趋势,在回乳期之后下降,但下降后仍极显著高于对照组;各处理回乳期奶牛血清TGF-β1含量均呈上升趋势,而在回乳期之后中药组奶牛血清TGF-β1含量呈下降趋势;回乳期奶牛血清E、TGF-β1含量和日产奶量两两间均呈极显著相关,血清P4含量与血清E、TGF-β1含量、日产奶量均无显著相关性。【结论】在奶牛回乳过程中,添加中药组方"回乳康"能显著促进回乳期奶牛回乳,E是奶牛回乳的负调控激素,TGF-β1是正调控因子,而P4对回乳无明显影响。     

外源性雌激素对小鼠子宫b-FGF和TGF-β1表达的影响

为探明雌激素对小鼠子宫碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,应用免疫组化染色观察雌激素对小鼠子宫b-FGF和TGF-β1表达的影响。结果表明,随着外源性雌激素的介入,子宫基质细胞中b-FGF和TGF-β1阳性着色反应增强,腺上皮则减弱。提示外源性雌激素对小鼠子宫不同类型细胞中b-FGF和TGF-β的表达有不同的调节作用,此调节可能参与小鼠胚泡着床过程。     

梅花鹿成熟型TGF-β1基因的克隆与结构分析及其在鹿茸顶端组织中的表达

为探究细胞因子对鹿茸再生的影响,提取鹿茸顶端组织总RNA(Trizol法),反转录获得cDNA模板,克隆TGF-β1成熟肽基因。利用生物信息学软件,对其基因序列及蛋白质结构进行分析。结果表明:成功获得梅花鹿TGF-β1成熟肽基因,序列长339 bp,共编码112个氨基酸,蛋白性质稳定,理论分子质量约为12.8 kD。同源性分析结果显示,TGF-β1在进化过程中具有高度保守性,梅花鹿与牛、羊、猪、人、鼠的核苷酸序列同源性均>90%;除鼠外,梅花鹿与其他物种氨基酸序列并未发生变化。免疫组化结果显示,TGF-β1在鹿茸顶端不同组织中差异表达,软骨层中表达水平最高。由此推测,TGF-β1在鹿茸再生过程中可能发挥重要作用。     

EETs对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌的影响

本实验旨在分析不同浓度的EETs对胰岛β细胞的影响,为防治2型糖尿病提供理论依据。体外培养MIN6小鼠胰岛瘤细胞,经不同浓度EETs处理细胞后,分别采用CCK-8法和ELISA法检测细胞活性和胰岛素含量。浓度为100 nM的11,12-EET和14,15-EET对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌能力具有显著促进作用。100 nM11,12-EET和14,15-EET均显著增加胰岛β细胞的增殖以及其胰岛素分泌能力。     

CTRP3、TGF-β1在糖尿病肾病中的表达及相关性研究

采用免疫组织化学法检测糖尿病肾病组(DN)及正常对照组(NC)大鼠肾组织CTRP3与转化生长因子β1 (TGF-β1)的表达情况。采用病例对照,研究正常健康者(NC组)、单纯2型糖尿病(T2DM组)、早期糖尿病肾病(DN1组)和临床糖尿病肾病(DN2组)患者胰岛素代谢参数、血脂和肾功能等临床指标,ELISA法检测血清CTRP3和TGF-β1水平。结果表明：DN组大鼠肾组织TGF-β1表达增高(P<0.05), CTRP3低表达(P<0.05); ELISA检测显示DN2组血清CTRP3水平显著下降(P<0.01),而TGF-β1水平显著升高(P<0.01); DN2组HOMA-IR、HbA1c、TG、ACR、BUN、SCr、Cysc水平升高(P<0.05),而GFR水平降低(P<0.01);相关分析显示血清CTRP3与TGF-β1、HOMA-IR、FBG、HbA1c、SBP、TG、ACR、SCr、BUN、Cysc呈负相关(P<0.05),与GFR呈正相关(P<0.01);回归分析显示HOMA-IR、TGF-β1、ACR、GFR是CTRP3...     

转化生长因子α对人肠上皮细胞增殖、细胞总RNA和总蛋白质含量的影响

主要探讨转化生长因子-α(Transforming Growth Factorα,TGF-α)对人结肠细胞生长、增殖以及细胞总RNA和总蛋白质含量的影响。以人结肠腺癌细胞(Adenocarcinoma,LoVo)为试验模型,分别添加重组人TGF-α0.1、1(接近人乳TGF-α含量最低值)、10(接近人乳TGF-α含量最高值)[1]和100ng·mL-1后,观察细胞增殖能力、细胞总RNA和总蛋白质含量变化。添加TGF-α24h后,细胞较对照有明显的增殖现象,且增值率随细胞浓度增加而呈上升趋势,并在10ng·mL-1时达到最大(P<0.01)。细胞总RNA含量随TGF-α浓度增加而上升为控制组的1.67倍(P<0.05)至4.20倍(P<0.01)。而100ng·mL-1组细胞总蛋白质含量明显高于控制组和其他各剂量组。为对照组的1.28倍(P<0.05)。TGF-α能够促进人肠上皮细胞细胞增殖且具有剂量依赖性,TGF-α同样能够促进人结肠上皮细胞RNA含量的增加和蛋白质的合成。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

目的观察氯沙坦对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外基质(ECM)―Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以探讨糖尿病早期肾脏肥大和氯沙坦对糖尿病肾病(diabetes nephropathy, DN)保护作用的可能机理.方法实验大鼠随机分为3组,每组12只正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组).左下腹腔注射STZ 60mg/kg体重制成糖尿病模型,DL组在糖尿病模型确立后第2d予氯沙坦10mg/(kg.d)灌胃,C组与D组仅给予等量自来水灌胃.检测各组第4、8wk末(每组各取6只)的血糖、尿白蛋白、血浆血管紧张素Ⅱ含量及相对肾重;免疫组化检测肾内TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原蛋白表达水平,图像分析系统分析光密度值.结果DL组较D组尿白蛋白排泄量明显减少,相对肾重减轻(P＜0.01);免疫组化显示糖尿病大鼠肾内TGF-β1蛋白表达增多,肾小球FN和Ⅳ型胶原沉积增多;DL组TGF-β1蛋白表达均明显低于D组,治疗8wk后FN和Ⅳ型胶原蛋白表达低于D组 (P＜0.05).结论肾脏ECM积聚是糖尿病肾脏肥大的重要原因;氯沙坦对糖尿病肾脏病变的保护作用机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾脏的TGF-β1表达,减少ECM积聚.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

目的:观察氯沙坦对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外基质(ECM)―Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以探讨糖尿病早期肾脏肥大和氯沙坦对糖尿病肾病(diabetes nephropathy, DN)保护作用的可能机理.方法:实验大鼠随机分为3组,每组12只:正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组).左下腹腔注射STZ 60mg/kg体重制成糖尿病模型,DL组在糖尿病模型确立后第2d予氯沙坦10mg/(kg.d)灌胃,C组与D组仅给予等量自来水灌胃.检测各组第4、8wk末(每组各取6只)的血糖、尿白蛋白、血浆血管紧张素Ⅱ含量及相对肾重;免疫组化检测肾内TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原蛋白表达水平,图像分析系统分析光密度值.结果:DL组较D组尿白蛋白排泄量明显减少,相对肾重减轻(P＜0.01);免疫组化显示糖尿病大鼠肾内TGF-β1蛋白表达增多,肾小球FN和Ⅳ型胶原沉积增多;DL组TGF-β1蛋白表达均明显低于D组,治疗8wk后FN和Ⅳ型胶原蛋白表达低于D组 (P＜0.05).结论:肾脏ECM积聚是糖尿病肾脏肥大的重要原因;氯沙坦对糖尿病肾脏病变的保护作用机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾脏的TGF-β1表达,减少ECM积聚.     

牛初乳生物因子提取物对人体肠道细胞CaCO-2生长性能的影响

初乳是自然界中唯一含有两类主要生长因子(类胰岛素生长因子和转化生长因子)的天然产物。乳源生长因子对人体肠道具有显著的生理功能,可使新生幼体完成从胎盘营养到肠道营养的转变。本研究以CaCO-2细胞系作为人体肠道细胞模型,测定初乳乳清、乳清超滤物和乳清阳离子交换提取物对人体肠道细胞代谢活性和DNA复制能力的影响。结果表明,初乳乳清超滤物(截留分子质量990ku)0.01μg·mL-1条件下,具有最高的促细胞代谢活性,为10%胎牛血清的1.70倍。乳清阳离子交换提取物在更低的浓度下具有活性。酸乳清100ku超滤滤出物在0.01μg·mL-1质量浓度下,具有10%胎牛血清2.57倍促DNA复制活性。     

梅花鹿TGF-β1基因的克隆及序列分析

从梅花鹿的鹿茸血中提取总DNA,经PCR扩增后,对梅花鹿的TGF-61基因部分片段进行了克隆测序,序列长度为839 bp,现已将该序列提交到Gene Bank上.Gene Bank中的Blast分析表明,梅花鹿TGF-β1基因与牛同源性为92%,与羊同源性为94%.