芥菜随机扩增多态性DNA最佳参数的研究

对影响芥菜聚合酶链式反应主要因子的优化，建立了芥菜聚合酶链式反应体系。即Ｍｇ２＋２．０ｍＭ，ＴａｇＤＮＡ聚合酶１２．５ｎｍｏｌ／Ｓ，变性温度９４℃，退火温度３８℃，预变性９４℃，５ｍｉｎ；每个循环：９４℃，５０ｓ，３８℃，７０ｓ，７２℃，１２０ｓ，４０个循环后，于７２℃下延伸１０ｍｉｎ。     

金樱子随机扩增多态性DNA分析

[目的]揭示不同产地金樱子30个居群间的遗传多样性和亲缘关系.[方法]采用RAPD分子标记技术,从35条RAPD随机引物中,筛选出8条有效引物进行扩增,用NTSYSpc,ver.2.02软件进行UPGMA聚类分析.[结果]共扩增出86条带,其中多态性条带84条,多态性百分率(PPB)97.67％.30个居群的相似性系数在0.11 ～0.58,聚成A、B、C三大类群.[结论]金樱子具有丰富的遗传多态性,产自贵州地区的金樱子有较近的亲缘关系.     

海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

从海带孢子体的酶解单细胞中提取的基因DNA,可用于随机扩增多态DNA（RAPD）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应体系为：0.2μmol/L引物,1.5mmol/LMg^2 ,100μmol/L dNTP,1.0U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA,优化反应程序为：94℃变性2min,接着45个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,最后72℃延伸10min。在此优化条件下得到的RAPD图谱的较好的特异性和重复性,为海带遗传多样性,种质鉴定,分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。     

海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

从海带孢子体的酶解单细胞中提取的基因DNA,可用于随机扩增多态DNA（RAPD）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应体系为：0.2μmol/L引物,1.5mmol/LMg^2 ,100μmol/L dNTP,1.0U Taq DNA聚合酶,30ng模板DNA,优化反应程序为：94℃变性2min,接着45个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,最后72℃延伸10min。在此优化条件下得到的RAPD图谱的较好的特异性和重复性,为海带遗传多样性,种质鉴定,分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。     

外源DNA导入水稻的变异材料随机扩增多态性分析

以小麦、玉米、小米、高粱、狼尾草五个不同属的材料为外源ＤＮＡ供体，经减压渗透转导受体紫稻，从获得的变异材料中各选一份进行了随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，共用２０个随机引物，其中６个引物扩增出了有差异的多态性ＤＮＡ片段，１个引物可以区分受体材料与变异材料及变异材料间的差异。在以材料两两间的相似率进行的聚类分析中，发现聚类结果与材料变异性状一致，变异材料与受体材料间相似率高达９０．７％，认为变     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

三叶青种质资源遗传多样性的随机扩增多态性DNA分析

利用RAPD技术对64个三叶青种质资源样本进行遗传多样性分析,从40对引物中筛选出10对引物进行批量PCR实验。结果表明:64个三叶青样本的观测等位基因数(Na)为1.666 7~2.000 0,有效等位基因数(Ne)为1.247 9~1.701 3,Nei's基因多样性指数为0.167 0~0.398 4,Shannon多样性指数(I)为0.262 8~0.583 0,平均多态位点为7.5,平均多态百分数为93.145%;在遗传相似系数0.720 56处,可以将64个三叶青样本分成11大类;在遗传相似系数0.697 04处,则可将64个三叶青样本分成4大类;聚类分析的结果与种源的地理距离存在不一致性,这可能与种质资源库的地形、气候等自然因素有关。表明所测三叶青种质资源遗传多样性丰富,具有一定的开发利用价值,可为合理保护三叶青的基因资源及其遗传改良提供科学依据。     

桑树随机扩增DNA多态性研究

改进桑叶ＤＮＡ分离方法后得到了纯度较高、分子量约２３ｋｂ的ＤＮＡ，用２４个随机引物进行ＰＣＲ扩增后，供试１２个桑品种显示出较丰富的ＤＮＡ随机扩增多态性。     

寄生松墨天牛的球孢白僵菌不同菌株DNA多态性的RAPD分析

采用RAPD技术对21个不同来源的寄生松墨天牛Monochamus alternatus的球孢白僵菌Beauveria bassiana菌株的DNA指纹图谱进行了测定.从RAPD结果可知寄生松墨天牛的白僵菌菌株间具有丰富的遗传多态性.聚类分析把21个寄生松墨天牛的白僵菌菌株分为两大类群:①B1,B14,B4,B5,B6,B7,B8,B12,B13,B10,F-263,Bxs,B2,B11,Bf,Bz,B9;②B3,B15,By2,By7.结果表明菌株DNA多态性与采集地之间有一定的相关性,与对松墨天牛幼虫的毒力未表现出相关性.图2表2参11     

RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

应用RAPD技术,用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析,结果表明,7条引物共产生244个扩增片段,其中有92个是多态性片段.相似系数分析结果显示,国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0.139～0.333,猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0.203-0.400.     

RAPD技术在茄子种子鉴定中的应用研究

以龙杂茄2号、佳杂茄1号2个茄子杂种及其父母本为材料,使用MJ/PTC-200型PCR仪并对电泳图谱分析, 建立了适合茄子随机扩增多态性DNA分析的PCR扩增反应的体系,从40个随机引物中找到了2个可用于鉴定龙杂茄2号、3个可用于鉴定佳杂茄1号杂种纯度的引物.     

随机扩增多态DNA(RAPD)技术及其在农业上的应用(综述)

随机扩增多态DNA技术是近年发展起来的一种DNA多态性检测技术。它以一系列不同的随机排列碱基顺序的寡核苷酸单链(通常是十聚体)为引物,对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。扩增DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD技术可以在对物种没有任何分子生物学研究的情况下,对其进行DNA多态性分析,同RFLP及DNA指纹图谱法等其他DNA多态性检测技术相比,RAPD具有检测效率高、样品用量少、灵敏度高和检测容易的优点。RAPD技术已广泛的应用于农作物和畜禽品种及品系的遗传纯度的测定、品种和品系的鉴定、品种和品系遗传关系的确定、基因的定位和分离以及构建基因图谱等方面的研究。     

不同倍性金鱼草基因组DNA

 利用25个10碱基的引物，对金鱼草3个不同花色品系的二倍体及其同源四倍体基因组DNA进行随机扩增（RAPD）。结果表明：二倍体与其同源四倍体金鱼草指纹图谱的差异，随不同花色品系及不同引物而变化；四倍体金鱼草在诱导过程中除了染色体数目加倍外，基因组DNA的核苷酸碱基序列也可能改变，这为培育四倍体金鱼草新品种提供了丰富的育种资源。指纹图谱的建立为金鱼草新品种的鉴定提供分子水平的依据，为新品种保护奠定初步基础。     

瓶霉属和外瓶霉属真菌的RAPD分析

选取瓶霉属,外瓶霉属８个种的１１个菌株,对其进行ＲＰＡＤ扩增,并用最短距离法和最长距离法两种类间距的计算方法对它们的相互关系进行分析。根据分析结果,可将１１个菌株划分为８个群,分别代表了８个种,其中甄工外瓶霉的２个菌株间遗传差异较大。根据最长距离法还可将１１个菌株分成两大类,分别代表了瓶霉属和外瓶霉属,这与传统的形态分类法的结果基本一致,证明ＲＡＰＤ技术是研究瓶霉属,外瓶霉属两属间及属内各菌种间的     

杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化

试验通过系统比较研究,确立了杜鹃属植物RAPD-PCR的最佳反应体系,即20μL反应体系中:模板DNA(10 g.L-1)1.5μL;10×PCR buffer 2μL;Taq酶(0.5 U.μL-1)0.3μL;引物(0.8μmol.L-1)4μL;MgCl2(25 mmol.L-1)1.8μL;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0 mmol.L-1)0.6μL。经试验验证,该反应体系重复性高,扩增条带亮度均匀,弥散现象少。     

RAPD法研究孝感荸荠和野生荸荠的遗传差异性

[目的]采用RAPD法研究孝感荸荠和野生荸荠的遗传差异性。[方法]利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对地方栽培种孝感荸荠、野生荸荠、蒲草和扁杆藨草的基因组DNA进行了遗传差异性分析。[结果]共筛选出841、842、807和840 4个随机引物,其中841随机引物的扩增产物多态性明显,获得清晰、重复性好的条带。聚类分析结果显示,栽培荸荠与野生荸荠的亲缘性相对于蒲草与扁杆藨草而言较近。[结论]为培植优质荸荠新品种提供了理论依据。     

仲彬草属物种的RAPD遗传变异分析

采用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术 ,对仲彬草属Kengyilia 14个种、1个变种 ,共 32份材料进行了遗传多样性研究 .4 6个引物产生的 341条DNA扩增片段中 ,32 7条 (95 9% )具有多态性 .每个引物可扩增出 1～ 13条多态性带 ,平均 7 1条 .利用 341个RAPD标记 ,计算Jaccard遗传相似系数 ,建立UPGMA聚类图 .结果表明 :①K .melanthera (Y2 70 8)与K .melanthera (Y2 70 9a)的GS值最大 (0 82 9) ,遗传关系最近 ;K .hirsuta(Y2 86 0 )与K .tahelaca na (Y0 5 99)间GS值最小 (0 16 4 ) ,遗传关系最远 ;②物种内不同居群都聚在一起 ,遗传相似系数较大 ,亲缘关系较近 ;③形态相似、地理分布一致的物种有一定的亲缘关系 ,聚类在一起 ;④物种间遗传差异明显 ,且种间的遗传变异大于种内不同居群间的遗传变异 ;⑤RAPD结果与形态学和细胞学等分析结果基本一致 .据此 ,RAPD分析方法可为仲彬草属植物的系统学研究提供分子水平上的丰富资料 .     

火棘基因组DNA的提取和RAPD稳定的反应体系的建立

[目的]研究提取火棘基因组DNA的最佳方法,并研究适合火棘的稳定的RAPD反应体系,为以后开展火棘的遗传多样性研究、物种资源研究和亲缘关系鉴定等提供重要的参考。[方法]采用改进的CTAB法,成功地提取了火棘基因组DNA,并对RAPD反应体系中的Taxi酶、MgCl2、dNTPs和引物4个因素进行4因素4水平的正交试验设计,从中筛选出最佳的优化条件。[结果]电泳结果显示,DNA无降解,杂质少。DNA浓度较高约为500ng／μl。并以此DNA为模板,成功地建立了RAPD稳定的反应体系：总体积25山,包括25ng的DNA,1×buffer,2．3mmol／LMgCl2,1．0μmol／L引物,O．15mmol／LdNTPs和2．0U的TaqDNA聚合酶。RAPD扩增程序为：先在94℃下变性4min,然后在94℃下变性40s,36．8℃下复性50s,72℃下延伸70s,反应40个循环,最后72℃延伸4min。[结论]改进的CTAB法能成功地提取火棘基因组DNA,利用正交试验设计所建立的RAPD反应体系,可以获得较为稳定、可靠的扩增产物。该体系可应用于火棘遗传多样性、亲缘关系等方面的研究中,为进一步开展火棘分子生物学研究奠定了基础。     

RAPD法研究孝感荸荠和野生荸荠的遗传差异性(摘要)(英文)

[目的]采用RAPD法研究孝感荸荠和野生荸荠的遗传差异性。[方法]利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对地方栽培种孝感荸荠、野生荸荠、蒲草和扁杆藨草4种植物的基因组DNA进行了遗传差异性分析。[结果]筛选出841、842、807和840共4个随机引物,其中841随机引物的扩增产物多态性明显,获得清晰重复性好的条带。聚类结果显示栽培荸荠和野生荸荠的亲缘性相对于蒲草和鹿茸杆藨草而言较近。[结论]该研究为培植优质的荸荠新品种提供了理论基础。