食用菌异迟眼蕈蚊苏云金芽孢杆菌筛选及杀虫蛋白基因鉴定

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)杀虫谱广,活性高,可以很好地应用于双翅目眼蕈蚊科的防治。为了筛选出对食用菌异迟眼蕈蚊(Bradysia difformis)有高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株,并进行杀虫蛋白基因鉴定,采用醋酸钠-抗生素法,从江苏省南京市紫金山土壤中分离产晶体芽孢杆菌,通过室内毒力测定和对食用菌菌丝影响试验逐步进行筛选,同时进行Bt杀虫蛋白基因型聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism, PCR-RFLP)扩增鉴定。结果从分离到的17株产晶体芽孢杆菌中筛选出7个对异迟眼蕈蚊杀虫活性的校正死亡率在50%以上且不影响食用菌菌丝生长的菌株。经16S rDNA基因序列同源性分析,这7株菌与公共数据库中苏云金芽孢杆菌菌株的同源性可达99%以上,初步认定为苏云金芽孢杆菌(B. thuringiensis)。Bt杀虫蛋白基因型鉴定发现,这7个菌株含有cry4/10、cry11、cyt1、cyt2等4个不同的毒蛋白基因型。筛选出的这7株Bt菌株对于防治食用菌异迟眼蕈蚊具有较好的开发利用潜力。     

多黏芽孢杆菌Dw-6抗革兰氏阳性菌多肽的分离纯化及抑菌活性机理

多黏芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)Dw-6是1株具广谱抗菌活性的拮抗菌株.该菌株发酵液经热处理、固相萃取及柱层析得到了1个单峰化合物DwGPB.该化合物对蛋白酶K较为敏感,但对胰蛋白酶不敏感.对供试革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和苏云金杆菌均具有强烈的抑制活性.苏云金杆菌经DwGPB...     

小麦全蚀病拮抗微生物的分离及其拮抗性能研究

从开封北郊的麦田土壤中分离筛选出11株对小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis var.tritici)有拮抗作用的细菌,通过对它们进行生理生化检验,确定为4个种,即:巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringien-sis)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。分别利用平板拮抗和小麦活体拮抗对分离到的11株拮抗菌株的拮抗能力进行检测。结果表明,菌株的平板拮抗能力较强,在活体试验中,可以降低病害的发病强度。     

苏云金芽孢杆菌毒性研究

以菜青虫为试验材料,用苏云金芽孢杆菌浸泡过的小白菜饲喂菜青虫,提取菜青虫体内的伴孢晶体,通过生物测定法对苏云金芽孢杆菌的毒性进行研究,并对出发菌株进行紫外诱变筛选高毒性菌株。结果表明,苏云金芽孢杆菌毒性与伴孢晶体含量有关,伴孢晶体含量越多,毒力越高;紫外诱变16min时得到菌株B16,伴孢晶体含量比出发菌株提高8.2%,杀虫效率比出发菌株提高77%。该研究为苏云金芽孢杆菌生产高效率生物农药提供菌种。     

磷钾生物菌肥的菌种筛选及应用研究

从保存的47株菌中,根据解磷和解钾能力强、菌株间无拮抗性的原则,确定了3株菌作为菌肥生产菌,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)。以3株菌作为生物菌肥生产菌株,对其进行发酵培养,将发酵液施于吊兰土壤进行植株种植试验,结果表明施肥的植株在根长、株高、叶长、鲜重等明显优于空白对照组。     

1株脱毛蛋白酶生产菌株的选育和鉴定

[目的]筛选鉴定脱毛蛋白酶生产菌株。[方法]通过菌株分离、筛选与鉴定试验筛选并鉴定出了1株脱毛蛋白酶生产菌株,命名为Bacillus cereus SZ-4。[结果]经初筛得到11株脱毛蛋白酶生产菌株,经复筛得到菌株SZ-4。SEM观察结果表明,蜡状芽孢杆菌1.230与待鉴定菌株的细胞形态非常相似。菌株SZ-4的菌体细胞革兰氏染色呈阳性;荚膜染色呈阴性;芽孢呈椭圆形,中生或次端生。生理试验结果表明,葡萄糖、L-鼠李糖、肌醇、甘露醇及蔗糖均可用作菌株SZ-4的碳源;以葡萄糖为碳源时,菌株的生长状况最佳。该菌株是1株嗜盐菌。DNA序列分析表明,蜡状芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌同处于一个最小的分支,与已知菌株Bacillus cereus strain CCM2010的遗传距离最近,同源性达到99.8%。确定该菌株为蜡状芽孢杆菌,将其命名为Bacillus cereus SZ-4。[结论]该试验从盐腌原料皮中分离得到1株脱毛蛋白酶生产菌株SZ-4。     

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌,能引起胃肠感染和非胃肠感染。本研究从实验室分离的蜡样芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌1.026 0、巨大芽孢杆菌1.015 1、蕈状芽孢杆菌1.085 6和苏云金芽孢杆菌1.101 4这五株菌中提取蛋白,利用SDS-PAGE方法纯化,并测定出蜡样芽孢杆菌有3种分子量约为28.5、26.5和20.0 KDa的特征性蛋白,而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌则没有此特征性蛋白。     

雅安周公山土壤苏云金芽孢杆菌菌株资源的筛选和初步鉴定

采集四川雅安市周公山土壤样品320份,利用醋酸钠-抗生素筛选法分离出苏云金芽孢杆菌132株。通过光学显微镜镜检发现,这些菌株均呈典型的苏云金芽孢杆菌形态,其伴孢晶体主要形态有长菱形、短菱形、方形、球形、不定型等。根据GeneBank中公布的cry基因序列,设计了14对杀虫cry基因的通用引物,对这132株分离菌进行的PCR-RFLP分析鉴定表明:在86株菌中分布有除cry18、cry27/29、cry34/35外的11种cry基因型,其中以cry1型最多,其次为cry2型。另46株菌未检测出cry基因。对这132株苏云金芽孢杆菌进行SDS-PAGE蛋白分析,发现杀鳞翅目、鞘翅目和双翅目的约130、80、65、75 kDa的蛋白带最丰富。     

辣椒枯萎病主要致病菌的分离鉴定及农用拮抗菌筛选

[目的]分离鉴定辣椒枯萎病主要致病菌,探寻能够有效抑制该致病菌的生防菌株.[方法]采用植物病害组织致病菌划线分离方法分离致病菌,经形态学以及ITS区域PCR检测,确定菌株属性,通过平板拮抗筛选,确定对该致病菌具有拮抗作用的农用生防菌株.[结果]初步鉴定该致病菌为尖孢镰刀(Fusarium oxysporum),将该致病菌与11株农用微生物芽孢杆菌和3株农用微生物木霉菌进行拮抗试验,发现枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)6株芽孢杆菌对该致病菌拮抗效果明显,长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)2株木霉菌对该致病菌具有明显的拮抗效果.[结论]筛选到了8株能够有效抑制该病原菌的生防菌株,为以后研究生防肥料奠定了基础.