1株内生真菌的分离鉴定及其对铁皮石斛的促生作用

从不同植物的茎和叶中分离获得204株真菌,通过对白菜的致病性测定筛选获得1株能显著促进白菜生长的内生真菌菌株24L-4。结合形态学特征观察进行ITS-r DNA和18S-r DNA序列分析,对其进行鉴定,确定为Devriesia lagerstroem。该菌株对铁皮石斛组培苗的株高、叶宽、茎径和干质量分别较未接种对照处理增加33.3%、65.7%、27.3%和45.1%,显著高于对照处理。同时,盆栽试验表明:D.lagerstroem铁皮石斛盆栽苗的茎径、鲜质量和干质量分别较无接种对照增加104.0%、83.9%和114.7%,显著高于对照处理。显微镜观察发现:D.lagerstroem可定殖于铁皮石斛根部的外皮层和皮层。研究结果表明,D.lagerstroem对铁皮石斛具有明显的促生作用,可用于铁皮石斛菌肥的开发。     

铁皮石斛促生内生真菌的筛选与鉴定

从铁皮石斛根中分离得到37株内生真菌,经过与组培苗共生筛选,获得9株促生菌,其中3株真菌对铁皮石斛的鲜质量增长率、根数增长率和芽数的促生效果最好。采用形态学观察和ITS序列测定相结合的方法对这9株促生菌进行鉴定。经形态学观察,初步鉴定出2株,均为瘤菌根菌属。根据rDNAITS序列分析显示,2株与Epulorhizasp．的相似性分别为100％和96％,1株与Guignardiacamelliae的相似性达100％,1株与MycosphaereUacruenta的相似性为99％。另外5株促生真菌分类地位尚不能确定,但这5株菌株与登录号为EU482263、GQ996178、AM901831、GU566294和GU566256的序列相似性分别达96％、95％、99％、98％和100％。     

铁皮石斛内生真菌的研究进展

铁皮石斛是国家珍稀药用植物。自然状态下,只有真菌与种子或根形成共生关系后,才能正常地萌发和生长发育。研究铁皮石斛内生真菌对挽救这一濒危物种具有重要的意义。该文对铁皮石斛内生真菌的多样性和促生作用的研究进展进行综述,为进一步研究提供参考。     

不同生境下野生铁皮石斛内生真菌多样性的初步研究

采集湖南省新宁县崀山世界自然遗产风景名胜区和广西省乐业县雅长兰科植物自然保护区这两个生境中处于生长期的铁皮石斛（Dendrobium of ficinale）的营养根,并进行分离培养。通过对分离所得的41个菌株进行形态观察和ITS序列测定相结合的鉴定,共获得内生真菌34种。对担子菌和子囊菌分别进行了系统发育树构建结果显示,子囊菌为优势种类（31种）,以炭角菌目（Xylariales）和肉座菌目（Hypocreales）的种类为主,担子菌则以胶膜菌科（Tulasnellaceae）为主。Simpson多样性指数分析结果表明,不同生境下野生铁皮石斛内生真菌的多样性都很高,且雅长的高于崀山的。     

铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选

[目的]开展铁皮石斛根系促生内生真菌的筛选,为铁皮石斛的批量化生产提供生物防治基础。[方法]采用组织分离法对铁皮石斛根系内生真菌进行分离纯化,再通过单一回接试验将已分离内生真菌回接到铁皮石斛组培苗中,40 d后观察铁皮石斛根系生长情况,60 d后统计成活率。通过铁皮石斛根系生长指标,筛选出对根系促生作用最显著的内生真菌。[结果]从铁皮石斛根系中共分离得到21株内生真菌,筛选出8株优势促生根系内生真菌,其中回接菌株F5的铁皮石斛组培苗生根率最高,达99.00%,回接菌株F14的铁皮石斛苗成活率达100.00%,为对照组的395%。[结论]该研究成功解决了铁皮石斛移栽成活率低的难题。     

铁皮石斛内生真菌的分离鉴定及其促宿主生长作用

利用微生物学传统分离培养方法从野生铁皮石斛根部分离内生真菌,依据形态学和真菌18SrDNA ITS序列分析对菌株进行分类,并采用正交设计法优化菌丝体液体培养基,考察发酵液对铁皮石斛组培苗生长的影响,以期为人工种植铁皮石斛提供优良菌肥。结果显示,共分离到4株内生真菌,其中TPSH1、TPSH2、TPSH3为镰刀菌属(Fusarium),TPSH4为柱霉属(Scytalidi-um)。优化后确定培养液的组分为:麦麸25g/L,土豆20g/L,蔗糖10g/L,1/2MS。菌株发酵液分别喷施铁皮石斛组培苗8周后,与对照(1/2MS)相比,以TPSH4菌株液体发酵8d,对铁皮石斛生长促进作用明显,成活率提高30.43%,植株高度增加了31.21%,鲜质量增加40.61%。TPSH4为具有促宿主生长作用的新菌株,其发酵液可作为菌肥,用以促进人工栽培铁皮石斛的生长。     

马铃薯内生促生菌的促生长作用

1998年从马铃薯块茎内分离到两个菌株A-10'和H1-6。经鉴定,分别为芽孢杆菌(Bacil lus)和荧光假单胞菌(Pfluorescensbiovar)。连续3年大田和温室试验表明,这两个菌株在马铃薯植株的高度、茎粗、地下块茎及大薯率的提高等各项指标上均明显优于对照,说明其促生作用明显而稳定。进一步研究发现,H1-6作用强弱与其定殖力呈正相关。     

铁皮石斛内生真菌及其代谢产物研究进展

铁皮石斛(Dendrobium officinale)是我国传统中药材,富含多糖、生物碱、氨基酸、酚类等多种药理学活性成分。近年来,随着人们对健康生活品质的追求,铁皮石斛日益受到国内外学者的广泛关注。但其生长缓慢,病害时常发生,产量和品质受到严重影响。研究表明,内生真菌在铁皮石斛的生长过程中具有重要作用,本文重点梳理已报道的铁皮石斛内生真菌多样性及二者共生关系,概括内生真菌对铁皮石斛生长发育及病害防治的作用,并归纳其代谢产物的生物学活性,为铁皮石斛栽培产业中绿色防控和增产增收技术的开发与科学应用提供参考。     

核桃内生菌HT3对番茄和黄瓜的促生作用

为了测定核桃内生菌HT3的培养滤液对番茄和黄瓜的促生作用,采用浸种法测定了不同稀释倍数HT3培养滤液对番茄、黄瓜种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,当HT3培养滤液稀释倍数在5～100倍之间时,对番茄和黄瓜的种子萌发具有明显的促生作用,稀释倍数小于5倍时对种子的萌发有抑制作用;稀释10倍的HT3培养滤液处理的番茄和黄瓜种子的胚芽生长率最大,分别为对照的215%和142%。番茄种子浸泡时间为12 h时的促生作用明显好于浸泡24 h。HT3培养滤液处理的番茄、黄瓜植株苗比清水处理的健壮、叶片大、叶色浓绿、茎秆粗,且促进番茄和黄瓜幼苗平均鲜质量或干质量增长率均达到130%以上。     

防治烟草黑胫病内生细菌的分离鉴定及促生作用研究

通过常规分离方法、平板对峙培养法从健康烟株的根、茎、叶中分离得到内生细菌127株,从中筛选出8株菌株对烟草黑胫病菌有明显抗性,并对其进行了皿内拮抗试验、发酵液抑菌试验、温室盆栽试验和发酵液浸种、灌根试验,结果表明:8个菌株培养液滤液中存在具有明显抑菌作用的活性成分。以菌株wy11对烟草黑胫病的防效最好,防效为51.7%。菌株wy2发酵液浸种对烟草幼苗有显著促生作用,能显著提高地上部分鲜重、茎围、根长、叶长、叶宽。     

铁皮石斛高效设施栽培技术研究

[目的]实现铁皮石斛的高效设施栽培。[方法]以铁皮石斛无菌试管苗为试材,当苗高5cm左右时,分别移栽到3种不同的栽培基质中,筛选出铁皮石斛的最适生长基质;以其最适生长基质为栽培基质,设置清水(CK)和营养液浇灌2个处理,研究营养液浇灌对铁皮石斛生长的影响。[结果]所设置的3种栽培基质都适合铁皮石斛生长,其中,以石灰岩碎石滤水层5 cm+锯末(杂木粗糙的锯末)8cm+活苔藓2 cm为基质时,铁皮石斛长势最好、产量最高;适当浓度的营养液浇灌可较大幅度地提高铁皮石斛的产量。[结论]该研究为铁皮石斛的高效设施栽培提供了参考。     

铁皮石斛的组织培养与快速繁殖研究

以铁皮石斛(Demdrobium cardidum Wall.ex Lindl)无菌幼苗茎段为外植体,分别研究了不同基本培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛原球茎、不定芽诱导、增殖和生根的影响.结果表明,在不定芽诱导和增殖中,4种基本培养基中以B5的效果最好.而芽增殖率则以B5基本培养基中添加O.1 mg/L6-BA的效果最好;在3种天然附加物中,以添加椰子汁对芽的增殖效果最好;原球茎的增殖以1.0 mg/L的NAA效果最佳,诱导生根则以1.0 mg/L的NAA效果最明显.     

铁皮石斛组培快繁技术的研究

为了建立铁皮石斛快速繁殖体系,以其茎段为材料,研究了不同培养基组分、激素浓度对铁皮石斛增殖和生根的影响。结果表明:铁皮石斛在初代培养中用酒精消毒30s后再用0.1%升汞杀菌6min最为适宜;最适培养基为MS基本培养基;在MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA中铁皮石斛的增殖效果最佳,在MS培养基中添加3.0mg·L-1 IBA生根效果最好,生根率可达100%;试管苗移栽的最佳基质为苔藓,单独使用成活率可达90.6%。     

铁皮石斛栽培基质研究

分别以树皮、水草、砂石和泥炭土为基质,研究不同基质对铁皮石斛组培苗移栽成活率和生长发育的影响.     

铁皮石斛茎段快繁技术研究

为建立铁皮石斛快速繁殖体系,实验以其茎段为外植体材料,研究不同外源激素配比对铁皮石斛芽诱导增殖及生根的影响。结果表明,芽诱导增殖以MS+0.1 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-16-BA为最好,茎段外植体生长健壮,芽分化数和诱导率较高,诱导率可达86.7%,为茎段最适初代培养基;最适生根培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg.L-1+0.5%活性炭。     

铁皮石斛的生物学特性与开花授粉技术研究

[目的]研究铁皮石斛的生物学特性和开花授粉技术。[方法]采用实地考察、显微观察与统计分析的方法对铁皮石斛的表皮细胞、气孔器及其分布、花期进行了调查与分析,并对铁皮石斛花、果实和种子的主要特征、人工授粉方法及花粉粒保存方法进行了研究。[结果]铁皮石斛上表皮细胞排列整齐,每个细胞周围有5～7个细胞与其相邻;其气孔全部分布于下表皮;铁皮石斛花主要集中在6月下旬开放,从花芽萌发到花朵开放大约需要35 d;自然状态下的铁皮石斛很难完成授粉过程;铁皮石斛人工自花传粉成功率只有30%,人工异花授粉成功率为100%;室温即可实现花粉粒的保存。[结论]通过人工种内杂交授粉可以极大的提高铁皮石斛的结实率。     

环草石斛和铁皮石斛试管苗叶片气孔特征比较(英文)

[目的]比较环草石斛和铁皮石斛试管苗叶片的气孔特征和光合特性。[方法]对环草石斛和铁皮石斛不同生长发育时期试管苗叶片的气孔进行扫描电镜观察,并用调制式荧光仪测定荧光诱导光响应曲线。[结果]在各个生长发育时期,环草石斛试管苗叶片的气孔密度均明显高于铁皮石斛,而气孔开放率则较低。随着生长时间的延长,环草石斛和铁皮石斛试管苗叶片气孔的大小变化不大,而气孔的数量则逐渐增加,气孔密度分别增加了83%和17.6%,两者均以播种生长240d时叶片的气孔开放率最高。在设定的3种光照强度下,环草石斛试管苗叶片气孔开放程度随光强的增加而增大,光强为54μmol/(m2.s)时气孔的开放度最大。在相同的培养条件下,环草石斛试管苗的最大电子传递速率14μmol/(m2.s)和光饱和点318μmol/(m2.s)均低于铁皮石斛20μmol/(m2.s),483μmol/(m2.s),其潜在的光合作用能力较差。[结论]不同种类石斛试管苗的气孔特性不同,因而光合速率也不同。通常组培室内的光强为27μmol/(m2.s),这样的条件下,两种石斛试管苗叶片气孔的开度都未达到最佳状态。若能遵循试管苗对光照强度的需求规律,选择合适的培养条件,增大气孔开度,提高光合速率,将更有利于试管苗的生长发育。     

铁皮石斛的抗逆性研究

[目的]研究不同时期、不同试验处理组铁皮石斛的抗逆生理反应及人工干预对其抗逆性的影响。[方法]铁皮石斛组培苗人工种植,分6-BA 50μg/L定期喷施(激素组)、一定波长和强度的光照补充(物理组)、对照组3个试验组,测定3个生长期3个试验组的铁皮石斛叶片过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量,并进行统计分析。[结果]激素组、物理组POD、CAT活性高于对照组,MDA含量低于对照组。[结论]施用6-BA或一定的光照补充均可提高铁皮石斛抗逆能力。     

铁皮石斛种子无菌萌发

[目的]研究铁皮石斛种子的无菌萌发方法。[方法]以改良MS+土豆熟汁液2.0%+蔗糖2.0%+琼脂0.65%+0.1 mg/L NAA为种子萌发培养基,将铁皮石斛种子播种后统计萌发率。[结果]铁皮石斛种子萌发率达90%以上,继代培养后组培苗生长正常。[结论]该研究建立了铁皮石斛种子的无菌萌发体系,为铁皮石斛实生苗的大批量生产奠定了基础。     

铁皮石斛圆球茎增殖影响因素的研究

[目的]探讨培养基的不同组成对铁皮石斛圆球茎增殖的效果及影响,为提高其组培种苗的商业化生产效率提供技术参考。[方法]以无菌播种获得的铁皮石斛圆球茎为材料,对影响铁皮石斛圆球茎增殖的几种因素进行了研究。[结果]铁皮石斛圆球茎在1/2MS培养基中增殖效果较好;在1/2 MS＋NAA 0.5 mg/L培养基中加入BA 2.0 mg/L可促进铁皮石斛圆球茎增殖;培养基中加入天然物质有利于铁皮石斛圆球茎的增殖生长,以加入椰子汁100 ml/L为最佳。[结论]铁皮石斛圆球茎在1/2 MS＋NAA 0.5 mg/L＋BA 2.0mg/L＋椰子汁100 ml/L培养基上增殖效果最佳,增殖系数达到4.8。