用非放射性原位杂交技术定位家猪PGD和HSL基因

用地高辛为标记物,以随机引物法标记猪ＰＧＤ ｃＤＮＡ和ＨＳＬ ｃＤＮＡ探针,经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后,将猪ＰＧＤ和ＨＳＬ基因分别定位在猪６号染色体６ｑ＾２５和６ｃｅｎ－６ｑ＾２１区域。     

用非放射性的Digoxigenin标记的DNA探针检出马立克病病毒DNA

用非放射性的Digoxigenin标记的Ⅰ型马立克病病毒特异性DNA探针,杂交反应可有效地检出通过Southern blot及Dot blot固定到硝酸纤维膜上的同型病毒的DNA,其特性及敏感性均不低于放射性~(32)p标记的相同DNA探针。     

非放射性核酸探针技术的进展与应用

<正> 核酸探针技术是近年发展起来的灵敏度高、特异性强、使用方便的检测方法和研究手段。将一个已知顺序的单链核酸DNA或RNA片段加以标记就成为核酸探针。用非放射性物质(如生物素等)标记核酸叫非放射性核酸探针。利用核酸链间碱基配对(分子杂交)来识别特定核酸顺序的方法,可用来探测标本核酸中与它具有互补的碱基顺序。如果两者顺序互补则杂交成功,结果阳性。反之,则杂交失败,结果阴性。这种方法如果用于疾病诊断,叫基因诊断。由于放射性核酸探针技术已广泛应用,本文主要介     

用荧光原位杂交技术检测黑麦染色质

荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization ,FISH）是一种快速、准确、直接检测和定位外源染色质的新技术。本研究荧光原位杂交用毛地黄毒苷-11-dUTP标记黑麦总DNA作探针,以检测小麦中黑麦染色质。结果如下：八倍体小黑麦（2n=8x=56）有丝分裂中期有14条染色体显示黄色,42条染色体显示红色,红色间期核显示有14个黄色亮点,表明这八倍体小黑麦含14条黑麦染色体。八倍体小黑麦中黄色黑麦染色体显C-带和H-带的末端有绿色的带。这是由于黑麦染色体末端结构异染色质含量高所致。黑麦附加系2R的间期细胞核中有1 ～ 2个黄色亮点。这表明2R含有1至2条黑麦染色体。     

RT-PCR和Digoxigenin标记的核酸探针检测鸡传染性支气管炎病毒试验研究

用２对已发表的引物和１对自行设计的引物对同一ＩＢＶＨ１２０株进行ＲＴ－ＰＣＲ，分别获得了Ｓ１基因上与引物设计相一致的１７２０ｂｐ，２２８ｂｐ，６０２ｂｐ，的扩增片段。用自行设计的引物对７个毒株（Ｈ１２０，Ｈ５２，Ｍ４１，Ｃｏｎｎ，Ｇｒａｙ，Ｔ，Ｈｏｌｔｅ）和５个分离株（宜毒，上毒，云毒，ＨＫ，１１８）的含毒尿囊液或纯化病毒进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果除Ｈｏｌｔｅ株，２个分离株（宜毒，云毒）外，其余均被成功地扩增出６０２ｂｐ的片段。将ＩＢＶＨ１２０株０６ｋｂＰＣＲ产物用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记为探针，分别与上述各ＩＢＶ毒株的核酸及其扩增产物进行核酸杂交，均呈现阳性反应，而该探针不与ＩＢＤＶ和ＮＤＶ的ＤＮＡ，ＥＤＳ－７６病毒的ＤＮＡ及正常鸡胚尿囊液抽提物反应。ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交技术提供了直接从尿囊液中快速检测出病毒，作为诊断ＩＢＶ的新方法。     

鸡传染性支气管炎病毒地高辛标记探针检测方法的的建立和应用

根据GenBank中已经发表的IBV N基因的保守序列,设计合成一对引物,利用RT-PCR技术扩增IBVN基因的582 bp的核酸片段,并制备出地高辛标记的IBV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与不同毒株的IBV核酸发生特异性杂交,而与对照的NDV、鹅副粘病毒的核酸杂交反应为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对IBV的最低检出量为10 pg,显示所制备的核酸探针用于IBV的检测是可行的。     

珍珠鸡对新城疫病毒和传染性法氏囊炎病毒抵抗力试验

21日龄伊莎珍珠鸡分别用于新城疫病毒（NDV）、传染性法氏囊炎病毒（IBDV）攻毒，并设相同日龄雏鸡攻毒做对照。经口感染NDV组珍珠鸡全部发病，死亡率30％（3／10），雏鸡对照组亦全部发病，死亡率70％（7／10）；经口接种IBDV的珍珠鸡无一发病，剖检无病变，琼脂扩散试验亦未检测到IBDV抗体，也未能在法氏囊中检测到IBDV抗原，而经口腔接种IBDV的对照鸡则有80％发病，死亡率20％，血清中检测到IBDV抗体，并从其法氏囊中检测到IBDV抗原，经泄殖腔接种IBDV的珍珠鸡亦未见发病，但经病理组织学检查发现在法氏囊，脾脏及肾脏等处出现病变。     

用核酸探针技术检测脊尾白虾体内的白斑综合症病毒

用斑点杂交和原位杂交检测了从病虾池捕获的脊尾白虾体内的WSSV。8尾脊尾白虾的斑点杂交检测阳性率为100%;脊尾白虾胃的上皮组织和结缔组织、位于鳃区头胸甲处的角化上皮、头胞甲反缘与虾体相连的角化上皮、结缔组织、附肢外的角化上皮、鳃丝的柱状上皮及其腔隙内的血淋巴、肝胰腺小管间的上皮组织及其血窦内的血淋巴、头胸甲的肌肉、造血组织、脊尾白虾精荚之结缔组织细胞、卵巢的结缔组织及其滤泡细胞原位杂交呈阳性。以上结果进一步证实了脊尾白虾是WSSV的天然宿主。     

鼻咽癌中EB病毒的原位杂交检测

目的：在分子水平探讨ＥＢＶ在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：采用ＥＢＶ ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ（ＥＢＥＲ）原位杂交对２８例鼻咽癌和７例慢性鼻咽炎组织进行了检测。结果：２８例鼻咽癌组织中有２３例阳性，７例慢性鼻咽炎均是阴性。鼻咽高分化鳞癌、低分化鳞癌和未分化癌均存在ＥＢ病毒感染，不同分化程度的肿瘤组织间ＥＢＥＲ阳性率差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：在鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作     

鼻咽癌中EB病毒的原位杂交检测

目的：在分子水平探讨ＥＢＶ在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：采用ＥＢＶｅｎｃｏｄｅｄｓｍａｌＲＮＡ（ＥＢＥＲ）原位杂交对２８例鼻咽癌和７例慢性鼻咽炎组织进行了检测。结果：２８例鼻咽癌组织中有２３例阳性,７例慢性鼻咽炎均是阴性。鼻咽高分化鳞癌、低分化鳞癌和未分化癌均存在ＥＢ病毒感染,不同分化程度的肿瘤组织间ＥＢＥＲ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：在鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用。鼻咽活检组织中有ＥＢＶＲＮＡ片段的检出,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值     

两种非放射性标记DNA探针检测菊花矮化类病毒的比较

以含菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）全长序列的重组质粒ＰＵＣ为模板ＤＮＡ，加入通用引物，在聚合酶链式反庆系统中制备地高辛标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针和生物素标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针。用这两种探针检测感染菊花矮化类病毒的菊花样本均为阳性反应，而检测健康对照的结果为阴性。采用ＰＣＲ－微量板杂交法，地高辛标记的探针检测ＣＳＶ ｃＤＮＡ的吸光值明显高于生物素标记的探针检测的吸光值，采用斑点杂光法，地高辛标记的ｃＤ     

用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒cDNA探针及其应用的研究

应用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒ｃＤＮＡ，制备核酸探针、经斑点杂交法和碱性磷酸酶显色后，探针同以ｃＤＮＡ为模板合成的ＰＣＲ产物及其重组子ｐＳＸＩＢＶＳ１均呈现强阳性的蓝色斑点，而与正常尿囊液、新城疫病毒和鸡败血霉形体无杂交。一个初诊为ＩＢ感染的田间病料与探针杂交阳性结果相符合。试验表明该ｃＤＮＡ探针是敏感和特异的检测方法。     

葡萄茎痘伴随病毒cDNA探针检测技术研究

选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%.利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4h,可获得较高灵敏度.     

3种梨树病毒cDNA探针检测

利用Biotin-16-dUTP标记的cDNA探针分子杂交检测分析了新疆梨树上的3种主要病毒(梨环纹花叶病毒、梨脉黄病毒、苹果茎沟病毒)并优化了杂交反应体系。结果表明,这3种病毒探针的检测灵敏度分别为5、10和10 pg。用文中的方法提取的RNA均能在10-3稀释后显色。该方法与RT-PCR方法对样品带毒状况的检测结果一致。     

用酶联免疫吸附试验检测马传染性贫血病毒抗体

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测马、骡传染性贫血抗体,并与琼脂扩散沉淀试验(AGID)相比较,结果ELISA检出率为84.26％—96.45％,AGID相应为25.67％—47.87％,前者检测效果优于后者。     

用ELISA检测传染性囊病病毒诱导的细胞凋亡

用５株传染性囊病病毒（ＩＢＤＶ）分别感染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,于感染后不同时间收集接毒组与对照组的细胞进行检测,试验结果显示,接毒组与对照组细胞的ＤＮＡ在琼脂糖凝胶电泳谱上均呈现梯状条带,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测各组细胞中降解ＤＮＡ量,发现感染ＩＢＤＶ７ｈ后,接毒组细胞降解ＤＮＡ量比对照组明显增加,且各接毒组间降解ＤＮＡ量有一定的差异,试验结果表明：各株ＩＢＤＶ均诱导ＣＥＦ发生细胞     

鸡传染性法氏囊炎病毒的分离与提纯

取接种4周龄雏鸡的法氏囊,经匀浆,高速离心,超速离心,CsCI 密度梯度离心,可获得纯化的鸡法氏囊炎病毒(IBDV)条带。通过电子显微镜观察,说明 IBDV 呈球状,直径约60nm,无囊膜,其浮力密度为1.32g/ml。本试验所分离的病毒粒子的平均含量为957μg/ml,病毒有活力,并具有抗原的特异性。     

尼罗罗非鱼X和Y染色体原位杂交探针的制备

通过染色体显微切割的方法，分别从尼罗罗非鱼XX和YY个体有丝分裂中期相染色体滴片上，割取第1对染色体，随后经简并PCR扩增，分别用生物素和地高辛标记，得到X和Y染色体探针。将探针与尼罗罗非鱼XY个体的染色体进行荧光原位杂交，在第1对染色体上得到很强的杂交信号。结果表明，染色体显微切割和简并PCR技术相结合，可以有效地制备鱼类DNA探针。