猪隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病是一种全球性的人兽共患病 ,猪隐孢子虫病世界各地均有报道 ,严重威胁着人类和动物的健康。本文对猪隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和生活史、流行病学特点、诊断、防治等方面目前研究状况进行了综述 ,为猪隐孢子虫病的有效防制提供参考     

猪隐孢子虫病调查

采集湖南省7个县、市猪场和农户饲养的495头猪粪样进行了隐孢子虫病调查,发现其中6个县、市有隐孢子虫感染,感染率为4.2～46.3%,其中以攸县和浏阳县的感染率为高,分别为45.2～46.3%和42.1%;各年龄组猪中,1月龄仔猪和7月龄以上成年猪的感染率(分别为50%和55.9%)高于2月龄、3月龄、4月龄、5月龄、6月龄猪(感染率为16.7～40%),6月龄猪的感染率最低;不同品种猪都可感染隐孢子虫,其中两头黑猪的感染率(74.2%)高于杂交猪,湘白Ⅰ系猪和长白猪(感染率为28.1—40%)。此外,还对饲养管理和患球虫病与猪感染隐孢子虫的关系进行了探讨。     

用CPN60基因序列研究隐孢子虫种系发育关系

本试验以编码线粒体功能性蛋白Chaperonin 60(CPN60)的核基因作为研究对象,对隐孢子虫分离株CPN60基因进行扩增测序,用Clustal X1.81对扩增序列与GenBank相关参考序列进行比对,然后用PAUP4.0程序中邻接法(Neighbor-joining,NJ)、最大简约法(Parsimony,MP)构建基因树,同时用TREEPUZZLE程序Version4.1构建最大似然树(Maximum likelihood,ML),以确定不同隐孢子虫虫株之间的进化关系,并以18S rRNA和HSP70基因构建的进化树作参照,评价CPN60是否更适合作为隐孢子虫基因分型和进化关系的分子标记。结果显示:基于CPN60构建的进化树将隐孢子虫分为两大类:C.baileyi和C.meleagridis处于一个分枝,C.hominis、C.suis、C.parvum牛基因型和C.parvum鼠基因型处于另一个分枝上。不同隐孢子虫之间的同源性介于96%~100%,能有效区分隐孢子虫不同基因型。因此,CPN60基因序列也可作为隐孢子虫分离株种系发育的遗传标记。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪隐孢子虫感染率不同,年龄越小感染强度越大,育肥猪的感染率为4%,断奶仔猪的感染率为11%。     

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点,用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列,并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树,试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征,以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析,其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型;河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型;河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C. parvum猪基因I型,即C. suis;河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis;河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi;河南牛源隐孢子虫分离株为C.andersoni。     

僵猪球虫隐孢子虫调查

<正> 球虫和隐孢子虫引起仔猪、犊牛、羔羊和家禽腹泻、死亡、生长发育停滞的重要病原,对生产影响很大。云南各地仔猪黄白痢和生长发育不良的僵猪不少,是否和这些病原有关,很值得研究。本文报告了调查的初步结果。     

安徽省猪隐孢子虫病流行病学调查

为了查明安徽省猪隐孢子虫感染与地理分布情况,选取该省10个县、市进行了猪隐孢子虫感染情况的调研。结果在58头猪的粪样中查到了隐孢子虫卵囊,其感染率为10.05%(58/577)。经鉴定,所获虫体为小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)。该省猪的隐孢子虫感染存在年龄和地区性差异,但与性别无关。     

绵羊肺炎支原体Y98株未知基因Hsp70（DnaK）的克隆

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）是绵羊传染性胸膜肺炎（Contagious ovine pleuropneumo-nia）的主要致病菌。热休克蛋白Hsp70也叫（DnaK）,具有分子伴侣和免疫的作用。本试验以MO Y98基因组为模板,通过比对15种支原体Hsp70基因的序列并设计简并引物,分别利用同源克隆和染色体步移—Tail-PCR技术克隆到了四段Hsp70（DnaK）基因片断并进行了核苷酸序列测定。利用序列拼接软件对克隆的四段序列进行序列拼接,通过ORF Finder软件分析出了MO Y98的Hsp70的开放式阅读框架,预测分析该基因是由1 815bp组成,编码604个氨基酸。本试验于国内外首次克隆到了MO的Hsp70基因序列,为MO的抗原研究以及Hsp70的功能研究等奠定了基础。     

冷应激对湖羊血清因子及热休克蛋白70 mRNA表达的影响

为研究冷应激对湖羊免疫系统及热休克蛋白70(heat stress proteins 70,Hsp70)的影响,试验分别采用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测冷应激前后湖羊肝脏、肺脏、脾脏、淋巴结组织中Hsp70mRNA表达量及血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)浓度。结果显示,与冷应激前相比,冷应激后湖羊肝脏、肺脏及脾脏组织中Hsp70mRNA表达量均极显著增加(P0.01),其中肝脏的表达量尤为显著;冷应激后湖羊血清中IL-2、IL-4的浓度均呈下降趋势,其中IL-4浓度下降尤为显著(P0.01)。结果表明,冷应激条件下湖羊各组织中Hsp70mRNA表达增强,可提高动物机体的自我保护机能,增强对外界不良刺激的抵抗力,但细胞因子IL-2和IL-4的浓度下降,表明冷应激抑制机体免疫系统。     

中药复方对热刺激大鼠空肠热休克蛋白70的影响

为探讨中药复方的抗热应激机理,以大鼠为热应激模型,热应激条件为41℃,2 h。用Real-time PCR和ELISA方法检测了中药复方对热刺激后空肠组织中Hsp70的表达。结果显示,高温刺激后大鼠空肠组织中Hsp70的mRNA和蛋白表达均升高(P0.01),且中药组Hsp70表达高于热应激组(P0.01),说明中药复方能通过诱导Hsp70的表达来抵抗高温对机体造成的热刺激。     

本地毛形线虫HSP70基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的布氏旋毛虫HSP70基因序列设计了1对引物，用Trizol法从本地毛形线虫肌幼虫虫体中提取总RNA，用RT-PCR方法扩增了HSP70基因，将目的基因克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒用PCR、限制性内切酶BarnHⅠ和HindⅢ进行单、双酶切鉴定。测序结果表明，成功克隆了本地毛形线虫HSP70基因。序列分析表明，HSP70基因比较保守，不同物种之间氨基酸的同源性在40％～80％。与布氏旋毛虫HSP70序列相比，CDS区多出9个碱基，但核苷酸序列和氨基酸同源性分别为98%和94％，存在1个糖基化位点和1个潜在的信号肽位点。     

牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达

以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp65)基因,PCR产物经纯化与EcoRⅠ/SaⅠ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性.以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳.结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64 kD和22 kD,两个蛋白分子量相加与预测的86 kD(HsP60 kD GST26 kD)相符.牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础.     

急性热应激条件下肉鸡组织器官中HSP70表达定位

通过观察热应激条件下肉鸡各组织中的HSP70阳性表达部位分布特点,探讨HSP70对不同组织器官的保护作用。分别在肉鸡40日龄时(选择体重差异不显著健康鸡)进行急性热应激处理,温度处理如下33℃±0.5℃、35℃±0.5℃、38℃±0.5℃各30min,修复2h分别取各处理组鸡只的法式囊、胸腺、心脏、肝脏作HSP70的免疫组织化学染色。各组织的HSP70表达时间及强度为(由强到弱):肝脏、心脏、胸腺、法氏囊。结果表明HSP70具有同源性,抗兔、抗鼠的HSP抗体可以抗肉鸡的抗原。HSP70在各组织器官中的表达定位有时间差异,不同的细胞具有不同的反应性,反应面积由大到小:肝脏、心脏、法氏囊、胸腺。HSP70的定位:肝脏、心脏定位在细胞质中。法式囊、胸腺定位在细胞质与细胞核中。     

牛瑟氏泰勒虫HSP70 cDNA片段的克隆与系统发育分析

从血液涂片检查为牛瑟氏泰勒虫阳性的病牛血液中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增出牛瑟氏泰勒虫HSP70基因,将其重组到pMD-18TSimple载体后进行克隆、序列测定及分析。结果表明该片段长1 966 bp,编码620个氨基酸残基,将该基因片段序列与GenBank中13种已知梨形虫的相应序列进行比较分析,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与已报道的牛瑟氏泰勒虫亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫,与马巴贝斯虫亲缘关系较远。     

Hsp70 and HSF-1 expression is altered in the tissues of pigs transported for various periods of times

The aim of this study was to assess changes of Hsp70 and HSF-1 protein and mRNA expression in stress-sensitive organs of pigs during transportation for various periods of time. Twenty pigs were randomly divided into four groups (0 h, 1 h, 2 h, and 4 h of transportation). A significant increased activity of AST and CK was observed after 1 h and 2 h of transportation. Histopathological changes in the heart, liver, and stomach indicated that these organs sustained different degrees of injury. Hsp70 protein expression in the heart and liver of transported pigs did not change significantly while it increased significantly (p < 0.05) in the stomach. Hsp70 mRNA levels decreased significantly (p < 0.05) in the heart after 4 h of transportation. However, mRNA expression increased significantly in the liver after 1 (p < 0.05) and 4 h (p < 0.01) of transportation, and increased significantly in the stomach of the transported pigs after 1, 4 (p < 0.01), and 2 h (p < 0.05). HSF-1 levels were reduced at 1 and 4 h (p < 0.05) only in the hearts of transported pigs. These results indicate that Hsp70 mediates distinct stress-related functions in different tissues during transportation.