新牧1号苜蓿两个抗逆相关基因启动子的克隆及分析

采用实时荧光定量PCR分析了新牧1号苜蓿（Medicago varia Xinmu 1）MvNHX1和MvDREB1基因在盐胁迫下的表达情况。此外,根据已获得的MvDREB1和MvNHX1基因序列设计特异引物,并以新牧1号苜蓿的基因组DNA为模板,克隆得到了这两个基因的启动子。利用生物信息学方法,分析这两个基因启动子的类型和结构,结果表明,MvNHX1和MvDREB1基因的启动子序列中均含有通用启动元件和上游调控元件,如CAAT框、TATA框、光响应元件、低温响应元件等,但部分响应元件的种类和数量不同。通过对两个基因启动子的克隆、分析及比较为进一步研究这两个基因的表达调控机制奠定了基础。     

兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展

因不合理或违规使用兽药, 导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留, 继而危害人类健康、破坏生态环境。因此, 兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力, 根据其特性已发开了不同的检测方法, 如免疫分析法、受体检测法及生物传感器法等方法, 广泛用于生物医药的研究。由于分子识别元件是分析的主体, 影响分析的选择性, 因此不同识别元件与兽药相互作用的机制越来越受到人们的重视。随着计算机技术的发展, 同源建模和分子对接广泛用于残留检测技术, 主要用于药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等生物分子之间相互作用的研究。笔者重点介绍了单链抗体(ScFv)、受体和适配体3种识别元件与兽药小分子之间的互作机制, 主要分析生物识别元件与兽药结合部位形成的氢键、疏水性及关键氨基酸或碱基, 在分子水平上探究药物与识别元件的机理和规律, 从而找出影响识别元件与药物结合的关键因素, 并对3种识别元件进行了总结, 以期为全面了解识别机制和体外进化, 制备出亲和力更广的ScFv、受体、适配体提供理论支撑, 为后续药物残留检测技术和药物开发奠定基础。     

M310核电机组在役检查稳压器电加热元件及套管视频检查技术

稳压器电加热元件在核电站运行一段时间后,电加热元件包壳可能会出现贯穿性缺陷,引起电加热元件变形和肿胀,受包壳的影响电加热元件套管有可能发生机械失效,出现破口,导致反应堆冷却剂泄漏,故需对电加热元件及套管进行在役目视检验。针对稳压器电加热元件组件的丛林分布、层叠结构和在役检查时高放射性的特点,介绍流量分配孔的结构和多种检查思路,研究视距技术和周向覆盖技术,研制出一套稳压器电加热元件及套管的视频检验设备,对电加热元件及套管的外表面进行远程目视检验。通过在役检查期间的工程应用,研制的稳压器电加热元件及套管视频检验设备满足在役检查使用的技术要求。为稳压器维护提供依据,对预防电加热元件及套管的失效,保证稳压器的完整性提供有效手段。     

带有反向捏合块的双螺杆挤出机三维流场分析

运用ANSYS/CFX对具有反向捏合块元件的啮合同向双螺杆挤出机的流道进行流场分析,研究分析豆粕在其流道中的运动情况,包括速度矢量图、速度流线图、宏观压力图,并和具有普通双螺杆元件挤出机进行对比分析。结果表明:由于反向啮合块的存在使得双螺杆元件的分布混合性能以及分散混合性能大幅度提高。研究结果可为双螺杆挤出机加工提供参考。     

猪内源性逆转录病毒(PERV)γ1长末端重复序列(LTRs)的分子特性及鉴定

猪基因组中的猪内源性逆转录病毒(PERV)γ1可能是异种移植(从猪到人)中的有害因子。众所周知,长末端重复序列(LTRs)是强启动元件,能够控制PERV元件和邻近功能基因片段的转录活性。本试验通过生物信息学和试验分析对猪组织中PERVγ1 LTRs的转录活性进行了研究。经RT-PCR扩增及测序鉴定出69个不同的LTR转录元件。并根据种内变异将69个LTR元件分为6个类型(15个亚型),包括串联重复序列,插入和缺失(INDEL)。更值得注意的是,所有的种内变异都发生在LTR元件的U3区域。本试验结果表明,不同PERV LTR转录体的分子特性及鉴定为进一步研究PERV及其转录奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。     

乳铁蛋白基因启动子元件调控效应分析

本试验先后进行2轮载体构建及转染试验,对牛乳铁蛋白基因启动子元件调控效应进行了分析。首先进行第1轮载体构建及转染试验：采用PCR方法,利用4对引物从牛乳铁蛋白基因5′调控区-1 799向3′端依次缺失500bp进行调控序列扩增,将获得的扩增片段替换pEGFP-N1的CMV启动子,构建了4个重组载体,将重组载体转染牛乳腺上皮细胞（BMEC）,经筛选获得稳定的单克隆细胞,测定并比较各组细胞的荧光强度。在以上试验基础上,为进一步精确确定牛乳铁蛋白基因启动子顺式调控元件序列,进行第2轮载体构建及转染试验,方法同第1轮。结果表明,牛乳铁蛋白基因上游调控序列-1 323～-1 372存在负调控元件,-1 372～-1 560存在正调控元件。     

铜陵长江大桥桥面系制造及拼装工艺方案研析

本文对合福铁路铜陵长江大桥桥面系制造及拼装工艺方案进行了详尽的研究和分析,提出在桥面系整体拼装过程中的尺寸控制方法,以及公路及铁路桥面单元件制作的重点及要求。     

霍尔元件研究及发展方向

本文概述了霍尔元件的制作材料,研究了霍尔元件失调电压的产生及抑制失调电压的措施,最后探讨了霍尔器件的应用领域及发展方向。     

青香蕉苹果α-法尼烯合酶基因启动子的克隆及序列分析

α-法尼烯的合成及α-法尼烯合酶基因的表达调控机制的研究在苹果等虎皮病的防治中具有重要作用。本实验利用Tail-PCR技术克隆了青香蕉苹果中α-法尼烯合酶基因的启动子序列,长度为1235bp。序列分析结果发现,该启动子序列含有明显的启动子特征序列TATA-box和CAAT-box,还有含有GARE-motif,TATC-box,TGA element等赤霉素和生长素等激素响应元件,HSE,ARE等热胁迫响应元件,大量的光反应元件G-box,GA-motif,GAG-motif,以及MYB结合位点MBS。序列分析表明该启动子可能受到激素、温度和光的调节。     

基于噬菌体进行细菌检测的研究进展

噬菌体具有特异性、稳定性、制备廉价等优点,使其成为细菌和生物传感器试验中首选的生物识别元件。本文主要将近年来利用噬菌体作为分析检测中的捕获元件和传感层的相关研究进行简要综述,以期对相关研究有所帮助。     

电力系统事故中人为事故与防范措施

本文对电力系统事故给出了明确的定义并结合中外电力系统事故分析给出了事故的常见及主要因素,在本文中,笔者仅就电力系统设备元件方面因素、运行人员方面因素发表看法并提出了相应的防范措施.     

桑树成花素基因MaFT的启动子克隆和功能位点分析

FT(flowering locus T)是高等植物开花过程中关键的信号整合因子,主要在叶片维管束中合成,通过运输抵达茎顶端分生组织发挥作用。为了研究桑树FT基因的转录调控机制,以白桑种(Morus alba Linn.)品种新一之幼嫩叶片的基因组DNA为模板,根据NCBI数据库公布川桑(Morus notabilis)全基因组中FT同源序列的上游序列设计引物,PCR扩增获得FT基因的启动子片段,其长度为921 bp,命名为MaF TP。通过PLACE和PlantC ARE在线启动子预测工具分析,该序列中除含有TATA-box、CAAT-box等真核生物启动子的核心元件外,还存在脱落酸的响应元件ABRE,生长素响应元件AuxRR-core,水杨酸响应元件TCA-element,生理节律相关顺式作用元件circadian,光响应元件I-box、G-box、MNF1等,以及胚乳表达必需的顺式作用元件Skn-1-motif和抗逆性相关的顺式作用元件W-box、MBS、TC-rich repeats,表明FT基因的转录表达可能受光照、干旱、节律性、脱落酸、生长素、水杨酸等因素的调控,并参与胚乳的形成。将5'端缺失的5段FT启动子序列(从大到小依次为MaF TP903、MaF TP762、MaF TP542、MaF TP289、MaF TP162)分别与报告基因GUS融合构建表达载体,利用农杆菌转化烟草(Nicotiana benthamiana)植株,通过GUS染色对不同长度的启动子活性进行分析,结果表明:除了MaF TP903的活性较弱外,其余启动子缺失片段均能驱动GUS基因高效表达,且表达量相近。依据研究结果推测:MaF TP启动子的762~903 bp区段可能存在MaF T基因转录表达的负调控元件。     

物-场模型在成组夹具创新设计中的应用

在实际生产中产品对定位元件存在磨损,影响夹具的使用寿命。如何提高夹具中的定位元件使用寿命,利用TRIZ理论中的问题描述和分析工具,即根据系统功能建立物场模型,介绍了物场模型的的3条定律。本文以拨叉钻孔成组夹具为例,对成组夹具的定位夹紧系统进行分析。为成组夹具设计中应用物场模型进行问题描述,根据标准解法求解。在成组夹具设计中,其他功能系统的物场分析的标准解法及矛盾矩阵还需进一步研究。     

山定子与早花山定子开花相关基因表达及MbAP1启动子分析

以山定子和Y系早花山定子为试材,分析苹果不同花发育相关基因MbFT1、MbFD、MbMADS12、MbAP1、MbSOC1在山定子和早花山定子的芽及韧皮部中的表达模式,以期为探究早花山定子早花机制提供理论依据。研究结果显示,MbAP1基因在山定子和早花山定子中的表达模式及表达量可能是影响早花山定子早花发育的一个重要因素,分别以山定子和早花山定子的基因组DNA为模板,扩增MbAP1基因的启动子序列。研究结果显示,山定子和早花山定子MbAP1基因的启动子序列存在碱基差异位点,其中在-388bp碱基处碱基由C 变为G,作用元件由山定子的生长素响应元件(TGA-element)变为早花山定子的水杨酸响应元件(TCA-element),推测MbAP1基因在山定子和早花山定子中表达模式的不同可能与两者启动子碱基差异有关。     

蒺藜苜蓿cation/H+ exchanger基因家族鉴定及表达特征分析

CPA（cation proton antiporter）超家族通过转运质子和一价金属离子调节细胞内离子和pH稳定。阳离子质子转运体（cation/H⁺ exchanger,CHX）基因家族属于CPA2（cation proton antiporter 2）超家族,其N端有一个Na⁺/H⁺ exchanger结构域,对植物维持细胞离子平衡、花器官发育起着至关重要的作用。通过生物信息学手段,系统地分析了蒺藜苜蓿CHX家族基因,通过全基因组筛选共鉴定出47个MtCHXs;染色体定位分析表明蒺藜苜蓿CHX基因分布在8条不同的染色体上;同源性分析显示蒺藜苜蓿和拟南芥亲缘关系近,而与水稻亲缘关系远;进一步进化关系分析将47个MtCHXs基因分为5组,并且各组内成员在基因结构和基序上比较保守;顺式作用元件分析发现MtCHXs基因启动子包含大量光响应元件、激素响应元件以及干旱、低温、创伤响应元件;表达特性分析发现MtCHXs在生殖器官中高表达,并且响应干旱、低温等非生物胁迫。     

西方蜜蜂的线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基-Ⅰ～细胞色素氧化酶亚基-Ⅱ富含A+T非编码区单倍型类群

西方蜜蜂(Apis mellifera)的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)细胞色素氧化酶亚基-(Icytochrome C oxidase subunit Ⅰ,COⅠ)~细胞色素氧化酶亚基-Ⅱ(COⅡ)富含A+T非编码区(AT-rich noncoding region,NC)属于高变异DNA序列,既呈现mtDNA长度变异又呈现mtDNA序列变异,它作为mtDNA多态性标记广泛地应用于A.m.地理亚种的DraⅠ酶限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,DraⅠ RFLP)分析和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分析。在本文中,A.m.非洲世系mtDNA的28种DraⅠ RFLP谱图被归纳为3种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P_0、Q元件组成类群,P_1、Q元件组成类群以及P_2、Q元件组成类群;A.m.西部欧洲世系mtDNA的90种DraⅠ RFLP谱图被归纳为1种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P、Q元件组成类群;A.m.东部欧洲世系mtDNA的25种SNP谱图被归纳为1种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即Q元件组成类群;A.m.亚洲世系mtDNA的29种DraⅠ RFLP谱图被归纳为3种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P_0、Q元件组成类群,P_0'、Q元件组成类群以及P_1'、Q元件组成类群。本文综述了这个研究进展。     

波音737翼身过热探测排故总结

分析了翼身过热探测系统的工作原理,介绍了翼身过热探测元件的位置和识别方式,以及测量探测元件的LCR879表的使用,总结了快速排除翼身过热故障的方法。     

牛呼吸道疾病克雷伯菌毒力及耐药性分析

为分析牛呼吸道疾病克雷伯菌的毒力性及其耐药性,采集患呼吸道疾病牛样品,对克雷伯菌进行分离鉴定,并对其血清型、毒力性、耐药性及其可移动元件的水平传播情况进行检测。结果显示,分离得到10株致病性克雷伯菌。在这些菌株中,检测出3种血清型,K2为优势血清型。分离菌对氨苄西林及阿莫西林的耐药率高达100.0%(10/10),其中8株为多重耐药菌。ureA毒力基因、gyrA与acc(3)-IIa耐药基因的检出率高达100.0%(10/10)。可移动元件中IS26的检出率高达80.0%(8/10)。可移动遗传元件不仅促进了细菌之间耐药基因的传播,还有可能与耐药基因有协同作用,增强细菌的耐药性。这为治疗由克雷伯菌导致的牛呼吸道疾病提供了依据。