中药制剂“病毒宁”抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的活性

本试验研究了中药制剂“病毒宁”在体外对单纯疱疹病毒(HSV-1)增殖的抑制作用。结果显示:“病毒宁”在1.500~0.188 g/L稀释浓度下,对HSV-1有直接杀灭作用(P<0.05);“病毒宁”在1.500~0.375 g/L稀释浓度时,能显著阻断HSV-1对BKH-21细胞的感染(P<0.05),并显著抑制病毒在细胞内的增殖(P<0.05);中药制剂“病毒宁”在体外具有明显的抗HSV-1作用,其最大无毒浓度为1.500 g/L。     

泽漆体外抗单纯疱疹病毒活性研究

[目的]研究泽漆水煎剂的体外抗单纯疱疹病毒作用。[方法]MTT法研究泽漆水煎剂对HSV致细胞病变效应的抑制作用。[结果]泽漆水煎剂对Vero细胞的CC50为(1.633±0.014)g/ml,对HSV-1没有抑制作用,对HSV-2具有明显的抑制作用,IC50为(0.558±0.001 4)g/ml,TI为2.78±0.37。[结论]泽漆水煎剂具有体外抗HSV-2作用,值得进一步开发。     

猪伪狂犬病病毒在不同细胞中增殖的研究

研究了猪伪狂犬病病毒(PRV)在ST、PK-15、CEF、BHK-21细胞系上的增殖情况。结果表明:4种细胞对PRV均敏感,PRV在4种细胞上增殖产生的病毒毒价分别为10~(-8.87±0.04)TCID_(50)/mL、10~(-8.50±0.03)TCID_(50)/mL、10~(-7.68±0.06)TCID_(50)/mL和10~(-7.87±0.05)TCID_(50)/mL。4种细胞都能产生明显的病变,但不同的细胞上出现病变不同,PK-15细胞(20±2)h出现细胞病变且病变为葡萄串状的细胞;ST细胞(22±2)h出现细胞病变且病变为细胞圆缩后成合胞体病灶;BHK-21细胞(25±1)h出现细胞病变且病变为细胞圆缩后成合胞体病灶,有拉网现象;CEF细胞(24±2)h出现细胞病变为葡萄串状的细胞。以上结果说明,ST细胞也适合用于PRV的增殖培养。     

留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用

通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50％inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示：留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。     

奶牛卵巢中一株IBRV的分离鉴定

利用MDBK细胞从奶牛卵巢中分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株。设计扩增IBRV的通用引物,对卵巢组织中的病毒进行PCR扩增及测序;对卵巢组织感染MDBK细胞,进行IBRV的分离培养;测定IBRV的TCID_(50),同时利用IBRV FA进行鉴定。结果表明,分离到的病毒在MDBK细胞上产生了明显的病变;用特异性引物可扩增出特异性目的条带,目的序列与IBRV基因序列一致;该毒株的病毒滴度为10~(6.75) TCID_(50)/mL。     

猪睾丸细胞保存期试验及致瘤性鉴定

分别从液氮罐中取出保存12个月、36个月、60个月的猪睾丸细胞(ST细胞),在同等条件下培养,观察细胞生长情况。在3次传代后,每批次细胞分别接种PPV及PRV,观察细胞病变出现的时间,并测定TCID_(50)。细胞传代50次后,取活细胞及经反复冻融的细胞分别接种裸鼠,进行临床观察。结果表明:ST细胞在液氮罐中保存60个月,对细胞生长和病毒繁殖无显著影响,经50次传代后的细胞无致瘤性。     

中草药红茶菌的制备及其体外抗口蹄疫病毒活性

[目的]研究中草药红茶菌的细胞、乳鼠毒性以及对口蹄疫病毒在体外的抗病毒活性。[方法]将中草药红茶菌过滤,用细胞培养液稀释,分别接种在BHK21细胞上观察细胞生长情况,评价其对细胞的毒性作用。将中草药红茶菌用灭菌水稀释,分别接种3日龄乳鼠,观察乳鼠生长、健康状态和接种部位变化情况,评价其对乳鼠的毒性作用。用稀释的中草药红茶菌与浓度为1000LD_50的口蹄疫病毒等量混合,37℃条件下作用30min,接种3日龄乳鼠,观察乳鼠发病死亡情况,估算中草药红茶菌体外可杀灭口蹄疫病毒的最大使用浓度。用稀释的中草药红茶菌与口蹄疫病毒混合,接种BHK21细胞,观察致细胞病变效应,记录不同稀释度的中草药红茶菌对口蹄疫病毒的杀灭效果。[结果]BHK21细胞和乳鼠试验表明,中草药红茶菌在1：4稀释后,对BHK21细胞无毒性反应,并可有效抑制1000TCID_50口蹄疫病毒在BHK21细胞生长繁殖;1：2稀释的红茶菌微生态制剂对3日龄乳鼠无毒性反应,并可有效杀灭1000LD_50口蹄疫病毒。[结论]中草药红茶菌是一种安全性好且对口蹄疫病毒有较好杀灭作用的口蹄疫预防中草药微生态制剂。     

鲫细胞与病毒微载体规模化培养工艺研究

本文研究了在Cephodex微载体悬浮培养系统中规模化培养鲫脑组织细胞(Gi CB)和鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)的工艺。结果表明,Cephodex微载体适合GiCB细胞的贴壁培养,细胞贴壁期培养基中血清浓度为10%,微载体浓度为6 g/L;细胞初始接种密度为2.5×10~5cells/m L时,以转速35 r/min,每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌条件贴壁率最佳,8 h后贴壁率可达90%以上;增殖期以45 r/min的连续搅拌速度可获得最佳的细胞生长效能。采用优化的工艺条件,以感染复数为0.2的CyHV-2病毒接种规模化培养的GiCB细胞5 d后,出现典型的细胞病变效应,病毒滴度(TCID_(50)/m L)可达10~(6.50±0.30)。本项研究为鲫造血器官坏死症疫苗的规模化制备技术研究奠定了前期基础。     

微管对狂犬病病毒胞内感染的影响

狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标准攻击毒株CVS-11,通过诺考达唑(Nocodazole)抑制剂破坏微管形成,采用实时荧光定量PCR方法、Western Blot方法、免疫荧光方法检测微管对于RABV感染量的影响,并采用TCID_(50)法测定微管对RABV病毒滴度的影响。结果表明,Nocodazole通过抑制微管的形成,使RABV N基因水平降低25%、N蛋白水平降低50%,免疫荧光检测到病毒感染率降低70%,上清液中病毒滴度由10~(6.5)TCID_(50)/mL降低至10~(4.5)TCID_(50)/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于细胞骨架-微管的参与。该结果为进一步研究狂犬病病毒胞内运输及其复制机制的研究提供了理论依据。     

牛伪狂犬病病毒的研究Ⅱ—牛伪狂犬病病毒在鸡胚及多种单层细胞上的病变及含毒量的研究

牛伪狂犬病病毒(闽A株)能通过鸡胚卵黄囊、尿囊腔、尿囊膜感染和繁殖,并出现不同程度的病变,经卵黄囊、尿囊腔接种的鸡胚,均于48～72小时死亡,死亡率达100％。经卵黄囊接种的鸡胚其羊水含毒量最高,对H.K细胞半数感染量(TCID_(50))达10~7/0.1ml,胚胎为10~6/0.1ml,尿囊液为10~2/0.1ml;经尿囊腔接种的鸡胚,其尿囊液及羊水均为10~5/0.1ml,胚胎为10~3/0.1ml。 该毒株对H.K、M.K等15种单层细胞均可引起细胞致病作用,其病变可分为二种类型:于单层肾细胞上形成聚融合和萎缩圆形坏死,在鸡胚等细胞上形成萎缩圆形坏死。 病毒在H.K细胞上生长繁殖后,经测定在上清液、细胞质、细胞核质中均含有10~6TCID50/0.1ml的毒价。 牛伪狂犬病病毒经H.K细胞连续传代后,对H.K细胞的毒力可达10~8TCID_(50)/0.1ml,出现细胞病变的时间由原来的24小时缩短为3小时。     

Study on Antimicrobial and Antiviral Activities of Lysozyme From Marine Strain S-12-86 In Vitro

In this study, the in vitro antimicrobial and antiviral activities of the lysozyme from marine strain S-12-86 （LS） were investigated, The antimicrobial activity of LS was tested by minimum inhibition concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration （MBC） method. The inhibiting effects of LS on pseudo rabies virus （PRV） in swine kidney cells （PK-15 ceils） were judged by cytopathogenic effect test （CPE）, The results showed LS had a broad antimicrobial spectrum against several standard strains including gram-positive bacteria, gram-negative bacteria, fungi, etc, The MIC of LS was 0.25-4.00 mg mL^-1 and its MBC was 0.25-8.00 mg mL^-1, respectively, Observation under the transmission electron microscope revealed that the cell wall of Candida albicans was distorted seriously, and the cytoplasm with many cavities was asymmetrical after being hydrolyzed by LS, The median cytotoxicity concentration （TC50） of LS was 100.0 μg mL^-1, the median effective concentration （EC50） was 0.46 μg mL^-1, and the selectivity index （TI = TC50/EC50） was 217. LS could inhibit PRV in PK-15 cells when it was added to cell culture medium at 0, 2, 4, 6, and 8 h after PK-15 cells had been infected by PRV. From the results, we concluded that LS had broad antimicrobial spectrum and good inhibiting effects on PRV,     

生物制剂绿液对几种病原菌的抑制作用

研究了生物制剂绿液对苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、烟青霉病菌、草莓灰霉病菌和黄曲霉菌5种病原菌的抑制作用。结果表明:绿液对几种病原菌菌丝的生长均有一定的抑制作用。其中,对草莓灰霉病菌的抑制效果最好,EC50为2.18 mg/L;其次是苹果炭疽病菌和苹果轮纹病菌,EC50分别为3.97和7.39 mg/L;而对黄曲霉菌和烟青霉病菌的抑制效果较差,EC50分别为472.79和982.06 mg/L。     

大戟狼毒提取物对朱砂叶螨生物活性的初步研究

采用玻片浸渍法和叶片残毒法,选用大戟狼毒3种不同溶剂氯仿、甲醇和石油醚的提取物对朱砂叶螨的成螨进行了生物活性测定。结果表明,大戟狼毒石油醚提取物对朱砂叶螨有很强的生物活性,而其它两种溶剂的提取物效果不明显,24 h成螨死亡率仅为15.61%和14.64%。石油醚的提取物1 g/L对朱砂叶螨成螨24 h死亡率和校正死亡率分别为56.78%和53.73%,LC50为1.244 2 g/L。而三种萃取物的杀螨情况也是石油醚的效果最好,1 g/L对朱砂叶螨成螨24 h死亡率达到68.15%,LC50为0.5681 g/L,氯仿的LC50是0.6736 g/L。     

Establishment of an avian leukosis virus subgroup A-resistant cell line

Rapid diagnostic methods for classifying avian Ieukosis subgroups in the field were needed for routine,large-scale screening.As a first step in method development,we inserted the avian Ieukosis virus subgroup A(ALV-A) envgene into plasmid pcDNA3.1/Zeo(+) and used this construct to transfect DF-1 cells.Zeocin-resistant cells were obtained after 2 weeks of zeocin selection.Then,the cells were analyzed using PCR,immunofluorescence,and Western blot for expression of the envA-encoded envelope protein after 30 serial passages.The DF-1/Acell line was completely resistant to 10~4TCID_(50)/0.1mL(50%tissue culture infective dose) ALV-A and was partially resistant to 10~5 TCID_(50)/0.1 mL ALV-A viral particles.By comparing the DF-1/Aand DF-1 cell lines,an ALV-A isolate was identified using a gag-specific ELISA for capsid protein p27.Thus,we established a DF-1/Acell line that was resistant to ALV-A infection.This cell line will be useful as a diagnostictool.     

抗病毒药剂处理脱除淮山药温和花叶病毒试验

【目的】比较3种不同抗病毒药剂处理脱除淮山药温和花叶病毒（YMMV）的效果,以期在对植物材料伤害较低的同时达到脱除病毒的目的,为淮山药脱毒苗的培育提供新途径。【方法】采用经RT-PCR检测确定感染YMMV的淮山药品种粤北3号（YB3）为材料,以不同终浓度（10、20、30、40、50 mg/L）的抗病毒药物利巴韦林、盐酸吗啉胍和阿昔洛韦加入培养基,处理带毒淮山药茎段3个月,至其形成再生苗,再用RT-PCR检测其中的YMMV。【结果】利巴韦林对淮山药植株生长有明显抑制作用,盐酸吗啉胍和阿昔洛韦对淮山药植株生长的抑制作用不明显;利巴韦林终浓度超过40 mg/L处理的样品、盐酸吗啉胍和阿昔洛韦终浓度超过30 mg/L处理的样品中均未检测出YMMV,其余浓度处理的样品可部分检出YMMV。【结论】终浓度30-50 mg/L的盐酸吗啉胍和阿昔洛韦处理3个月可有效脱除YB3淮山药中的YMMV,脱毒效果好于相同浓度的利巴韦林。     

酿酒葡萄“赤霞珠”叶片和叶柄离体再生系统建立的研究

以赤霞珠叶片、叶柄为材料,研究了细胞分裂素(TDZ)、不同基本培养基、叶柄砧有无对其不定芽再生的影响。结果表明:TDZ对赤霞珠离体叶片、叶柄不定芽再生有诱导作用,对叶片、叶柄的最高诱导率分别为18.06%和28.57%;叶片再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L,叶柄再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.01mg/L,叶片不定芽生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+20g/L蔗糖。     

不同环境下的8-HQS和CA对香石竹的保鲜效果研究

[目的]寻找8-HQS对香石竹"马士特"的最佳保鲜浓度。[方法]通过对瓶插期间香石竹"马士特"外观及生理指标的测定,研究0(T1)、0.4(T2)0、.5(T3)0、.6(T4)0、.8(T5)1、.0(T6)g/L 8-HQS对香石竹的保鲜效果。[结果]T5、T6、T3、T4和T2比CK(蒸馏水)和T1效果好,差异极显著。与对照相比,花径分别增大了1.78、1.92、1.491、.460、.87 cm,瓶插寿命分别延长了4.4、3.2、4.16、.53、.9 d。各处理均可以增大切花花径,延长瓶插寿命,不同程度的增加切花鲜重。高温不利于香石竹保鲜。8-HQS有很好的抑菌作用,可以延长切花的瓶插寿命。T5、T6保持切花鲜重在100%以上的时间长达14 d,切花花径显著增加,瓶插寿命延长。较高浓度的8-HQS(0.81、.0 g/L)仍可使香石竹的瓶插寿命延长。[结论]0.8 g/L 8-HQS+30 g/L蔗糖+0.25 g/LCA对香石竹的保鲜效果最好,并且提高了观赏品质。     

鹅膏菌产抑菌物质培养条件优化及安全性分析

经前期试验验证鹅膏菌菌株AV对杨树烂皮病病原菌金黄壳囊孢菌有抑制作用,通过比色法和生物量测定结果得出其抑菌物质产生的最佳营养条件。在供试营养物质中,乳糖为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,方差分析结果表明,碳源是鹅膏菌AV生物量及其抑菌物质产生的最主要影响因素,与其他营养元素差异显著(α=0.05)。培养基最佳组合为:①乳糖30.0 g/L,蛋白胨0.5 g/L,MgSO41.5 g/L,KH2PO44.5 g/L;②乳糖10.00 g/L,蛋白胨0.50g/L,MgSO40.75 g/L,KH2PO44.50 g/L;③乳糖30.0 g/L,蛋白胨2.0 g/L,MgSO41.50 g/L,KH2PO43.0 g/L。液体发酵培养时,菌株AV产生抑菌活性物质的最适培养条件为:pH值5～6,温度25℃,接种量1.25%,装液量50%,摇床转数180 r/min,培养时间20 d。当温度超过75℃,pH大于9或小于4时,或者紫外照射时间超过4 h都会使抑菌物质活性降低。小鼠毒性试验结果表明,小鼠饲喂菌株AV菌丝体,LD50为418.70 mg/kg,95%可信限为453.11～386.90 mg/kg,抑菌物质控制在2 g/L以内对小鼠无影响,因此,在进行病原菌防治时,为减少对环境中其他生物的影响,菌株AV抑菌物质质量浓度应低于2 g/L。