转基因B.t.抗虫棉新品系93R—4抗虫机理及喂饲结果简报

苏云金芽孢杆菌（Ｂ．ｔ．）是一种革兰氏阳性菌，在芽孢形成过程中产生一种伴胞晶体蛋白，被称为δ－内毒素或杀虫晶体蛋白（ＩＣＰ）。目前所发现的ＩＣＰ的毒杀范围包括鳞翅目、双翅目、鞘翅目等的昆虫，是目前世界上应用最为广泛的生物杀剂。Ｂ．ｔ．基因所编码的蛋白为一种碱溶性蛋白（ＩＣＰ），典型的ＩＣＰ由两个部分构成，Ｎ端的活性片断和Ｃ端的结构片断，活性片断由毒性区与细胞结合区组成。携带结构片断的ＩＣＰ被称作原     

基因技术与抗虫害作物品种培育

目前常用的抗植物虫害基因主要有苏芸金杆菌杀虫结晶蛋白基因、豇豆胰蛋白酶抑制剂基因、植物凝集素基因、淀粉酶抑制剂（简称α－AI）基因等。苏芸金杆菌属于革兰氏阴性，形成孢子细菌。在芽孢形成过程中，可产生伴胞晶体，它由一种或多种蛋白组成，具有高度特异性杀虫活性，这种蛋白被称作δ－内毒素或杀虫结晶蛋白（简称ICP）。ICP通常以原毒素形式存在，当昆虫取食ICP后，在昆虫的消化道内，原毒素被活化，转型为毒性多肽分子，导致昆虫死亡。目前已将不同Bt株系的不同类型ICP基因转入多种作物，如烟草、番茄、玉米、棉花、苹果、…     

茶花花粉蛋白酶解的最佳工艺研究

茶花花粉蛋白经过风味酶（外切酶）和中性蛋白酶（内切酶）组成的复合酶水解得到活性肽，通过单因素试验及正交试验得到各因素的优化组合。     

抗虫棉花

我们将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的两个变种 B.t.kurstaki HD-1(cryIA(b)和 HD-73(cryIA(c)的抗虫基因进行修饰后转化棉花并使其得到表达,其表达的抗虫蛋白能有效地毒杀农业生产上重要的鳞翅目害虫。在实验室中测定了这些转基因棉花叶组织的总抗虫能力,试验所用的两个鳞翅目昆虫是对 B.t.k.抗虫蛋白相对敏感的甘蓝尺蠖(Trichoplusia ni,cabbage looper)和敏感性比甘蓝尺蠖低100倍的甜菜粘虫(Spodoptera exigua,beet armyworm)。在高虫口密度胁迫下用棉铃虫(Heliothis zea.cotton bollworm)对整株棉花进行抗虫试验,结果显示出蕾、铃的有效抗虫性。对棉花植株进行的免疫(?)迹分析表明,抗虫蛋白的含量为总可溶性蛋白的0.05～0.1%。我们将这些结果视为向农业生产上推广这种经过抗虫遗传改良的经济价值高、种植面广的农作物的主要一步。     

Secondary Metabolites Produced by a Cockchafer-derived Streptomyces sp. BCa1

对一株分离自昆虫铜绿金龟子幼虫肠道的链霉菌Streptomyces sp. BCa1的次生代谢产物进行化学研究。采用摇瓶发酵，并用柱色谱技术对该链霉菌的次生代谢产物进行分离纯化和利用光谱分析进行结构鉴定。结果从菌株Streptomyces sp. BCa1的发酵液中分离获得1个具有Hsp90蛋白抑制活性的格尔德霉素（geldanamycin）以及2个萘醌型大环内酯类化合物。所有化合物均为首次从昆虫来源的链霉菌中发现，且格尔德霉素为其主要产物，表明昆虫来源的放线菌具有良好的开发前景。     

转基因抗虫棉安全性初步调查

棉铃虫是世界性重要农业害虫,它危害范围广大,繁殖潜力大,对环境适应力强,棉铃虫的危害严重制约了棉花生产的发展.苏云全芽孢杆菌（Bt）产生的杀虫晶体蛋白具有对昆虫专一高效毒杀和对人畜安全等优点.目前,转基因抗虫植物技术日趋成熟,并已商品化、实用化.我国转基因抗虫棉的研究获得了巨大的成功,并在我国棉区大面积推广应用,它不仅使棉铃虫对化学农药的抗性发展得到遏制,并取得了很好的社会和经济效益.转基因植物进入商业化之前,必须考虑所引入的外源基因产物对人及环境的影响,转基因对棉田靶标生物及非靶标生物的影响以及转基因扩散的可能性已成为迫切需要研究的课题.2004年,作者通过对转基因棉花的田间种群动态变化研究,为评估转基因植物安全性提供依据.     

栽培一粒小麦α-，γ-，ω-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析

为全面揭示栽培一粒小麦诱发乳糜泻（Celiac disease,CD) 的毒性和在小麦品质改良中的应用价值,根据已注册基因的保守序列分别设计2~3对特异引物,采用AS-PCR技术对栽培一粒小麦的醇溶蛋白新基因进行克隆、CD毒性肽识别和同源性分析。结果表明,从栽培一粒小麦中分别克隆得到26个具有独特编码区的α-（命名为：Gli-A-1~Gli-A-7,GenBank登陆号为JN831382-JN831385和JX828193~JX828195）、γ-（命名为：Gli-R-1~Gli-R-6,GenBank登陆号为HM120220,JX828376~JX828380）、ω-（命名为：Gli-w-1~ Gli-w-13）醇溶蛋白新基因和1个已知基因（Gli-R-7,ACJ03494）。CD毒性肽的识别分析表明,栽培一粒小麦具有较强的CD毒性,分布于醇溶蛋白的5种主要T细胞优势多肽和4种“毒性肽”除A基因组来源的α-醇溶蛋白中不含有的毒性肽Glia-α2和Glia-α外,其余多肽在克隆基因的编码蛋白中均有分布。克隆基因与已知基因的同源性分析表明,α-、γ-醇溶蛋白的推断氨基酸序列存在明显的基因组来源的差异性,而ω-醇溶蛋白基因的基因组来源差异不明显。此外,所克隆的7个α-醇溶蛋白变异相对广泛,而γ-、ω-醇溶蛋白基因的组成则相对单一,具有极高的相似度。     

油酸在黄曲霉毒素诱导肝细胞损伤中的保护作用

为了解油酸在黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）诱发的肝损伤中所起的保护作用,以体外培养的肝细胞（L-02）作为靶细胞,研究油酸的保护机制。设置3组实验：对照组（无处理）、AFB1组（只有AFB1）、油酸组（AFB1和油酸共同处理）,药物处理24h后显微镜观察细胞形态,细胞增殖-毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8, CCK-8）检测细胞活力,荧光法检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹检测血红素加氧酶-1（heme oxygenase 1,HO-1）、Caspase-3以及Survivin蛋白的表达。采用t检验或单因素方差分析进行统计分析。结果发现：与对照组相比,AFB1暴露能够明显抑制细胞活力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.001）,升高ROS水平（P<0.001）;与AFB1组相比,油酸作用后细胞活力显著增加（P<0.01）,细胞凋亡减少（P<0.01）,ROS水平降低（P<0.001）。与AFB1组相比,油酸作用后可显著提高 HO-1（P<0.05）和抑凋亡蛋白Survivin的表达（P<0.05）,降低凋亡蛋白Caspase-3（P<0.01）表达。因此认为油酸对AFB1引发的肝细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其通过促进抗氧化酶蛋白HO-1的表达,从而降低氧化应激水平,降低细胞凋亡有关。     

解淀粉芽孢杆菌11B91对藜麦生长影响的初探

植物促生菌可以促进植物生长，从而对农业生产起到促进作用。藜麦是一种全蛋白谷物，具有很高的食用与药用价值，发展前景广阔。通过藜麦接种促生菌解淀粉芽孢杆菌11B91后，测定藜麦在正常及盐胁迫下的生物量变化，探究促生菌对藜麦生长的影响。结果表明，解淀粉芽孢杆菌11B91处理后，藜麦根、茎长及干、鲜质量显著高于对照组（ 0.05），其中11B91处理的藜麦根长与LB 对照相比提高31.19%，茎长与LB 对照相比提高6.26%；11B91 处理的藜麦干质量与LB 对照相比提高300.00%，鲜质量与LB 对照相比提高50.96%。在0、150、300 mmol/L 盐胁迫下，解淀粉芽孢杆菌11B91处理的藜麦幼苗茎长较未经11B91处理的分别显著提高21.54%、49.36%、39.12%（ 0.05）；11B91 处理的藜麦根鲜质量显著高于未经11B91处理的（ 0.05），分别提高182.00%、200.00%、533.00%；11B91 处理的藜麦地上部鲜质量较未经11B91处理的分别显著提高45.46%、26.58%、39.58%（ 0.05）。在300 mmol/L 盐胁迫下，解淀粉芽孢杆菌11B91处理的藜麦幼苗根长较未经11B91处理的显著提高172%（ 0.05），地上部干质量较未经11B91处理的显著提高144%（ 0.05），根干质量较未经11B91处理的显著提高266%（ 0.05）。     

蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式分析

蓖麻毒蛋白（Ricin）是一类异二聚体复合物,包括一条具有催化活性的A链和具有半乳糖识别功能的B链,具有剧毒性。以RC2蓖麻为材料,利用半定量PCR和定量PCR技术分析蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式。结果表明,在苗期蓖麻各组织中蓖麻毒蛋白前体基因不表达,而在成熟开花植株的各组织部位中,只在根和种子中有表达;而在种子发育过程中,授粉后1～2d内,子房中蓖麻毒蛋白前体基因有表达,之后伴随种子生长发育特异性表达消失;授粉后24 d,蓖麻毒蛋白前体基因再次表达,并且表达量快速增高。这一规律的发现为进一步研究蓖麻毒蛋白合成积累以及选育低毒蓖麻提供了重要参考。     

具有BT毒素基因的抗虫棉品系的产量,产量组成与纤维特性

具有外源抗虫基因的作物，产量与品质常会受到一定影响。孟什都（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）公司的科学家培育了九个转基因陆地棉品系，它们都具有１－２个苏云金芽孢杆菌（ＢＴ）中Ｋｕｒｓｔａｋｉ的毒素基因、ｃｒｙＩＡ（ｂ）或ｃｒｙＩＡ（ｃ），这类基因可编码合成对鳞翅目有毒性的毒蛋白。我们从事的本项研究目的是确定这些转基因品系是否具有某些不良的农艺或纤维品质性状。在亚利桑那州（ＡＺ）Ｍａｒｉｃｏｐａ，我们分别于１９９０、１９９１、１８８２年种植了５、４、３个转基因品系，同时在每年试验中都以亲本品种柯字３１２（Ｃｏｋｅｒ３１２）和当地抗议的、无蜜腺型高纤维强度品系──“Ｍｄ５ｌｎｅ”作对照。体细胞无性变异，具抗虫蛋白基因以抗虫性的表达总体上并未导致皮棉产量、产量组成与纤维品质性状的下降。转基因品系在所测试的每一项性状上都有所变化。三年平均皮棉产量是转基因系１３５．４±４．５ｇ／ｍ２；柯字３１２为１１５．１±７．７ｇ／ｍ２；ＭＤ５ｌｎｅ为１４１．２±１１．４ｇ／ｍ２。九个转基因系中有六个皮棉产量较柯字３１２显著增产（１３－３０％）。同是这六个转基因系产量与ＭＤ５ｌｎｅ持平（－１０％～十７％）。与柯字３１２相比，九个转基因系中有４个     

番木瓜环斑病毒海南株系植物RNAi表达载体的构建

为研究广谱抗环斑病毒（PRSV）海南株系转基因番木瓜育种方案,采集海南番木瓜各主要种植区的PRSV株系,以外壳蛋白（CP）、辅助成分－蛋白酶（HC-Pro）和复制酶（Nib）基因作为靶标基因,通过序列比对和运用Clustalx软件分析,得到干扰基因的保守区域和挑选出海南PRSV典型株系的代表样品。以pUCCRNAi为骨架质粒,利用代表样品的CP、NIb、Hc-Pro基因片断保守序列构建RNAi发夹结构,将发夹结构导入pCAMBIA2300-35S-OCS植物表达载体,构建出抗PRSV植物表达载体pCAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS、pCAMBIA230035S-Hc-Pro-RNAi-OCS、pCAMBIA2300-35S-NIb-RNAi-OCS。实验将PRSV不同株系保守序列的分析与RNAi的高效抗病设计理念相结合,可用于创造高效、广谱抗PRSV病毒病的新种质。     

铜绿金龟子肠道链霉菌Streptomyces sp. BCa1 菌体的抗菌成分研究

为从昆虫来源的放线菌次级代谢产物中寻找药物先导分子，对铜绿金龟子幼虫肠道链霉菌Streptomyces sp. BCa1菌丝体化学成分进行了研究。通过活性跟踪，从其菌丝体的氯仿甲醇萃取物中分离得到主要成分1。利用高分辨质谱、一维和二维核磁波谱技术，将该主要成分1鉴定为具有双重旋转对称结构的不饱和大环内酯类抗生素阿扎霉素（elaiophylin），具有显著的抗金黄色葡萄球菌活性。该类化合物为首次从昆虫来源的放线菌中发现。     

十类农药 禁止使用

最近国家颁布了五批农药安全使用标准。下列十类农药禁止在农业上使用。1、敌枯双对人可引起皮炎，对动物有致畸作用。2、二溴氯丙烷可引发男性不育，对动物有致癌作用或引发突变。3、三环锡、特普丹对动物有致畸作用。4、福朗急性吸入毒性高，并有慢性毒性。5、蝇毒磷高毒农药，禁止在蔬菜上使用。6、六六六（滴滴涕）高残留农药．能在生物体内富集，通过生物链浓缩对生物产生影响。7、二溴乙烷可使人、畜致畸，精子、卵子遗传失常导致畸形胎儿，还可使肝、肾受损和细胞产生突变。8、杀虫眯对人有潜在致癌危险，对动物有致癌作用．9、艾氏…     

不同刈青高度对饲用甘蔗闽牧101的影响

研究两种刈青高度对饲用杂交甘蔗闽牧101的影响，结果表明：产量方面草层在200cm刈青时（B处理），年可刈青2-3次，年平均鲜草产量达154．61t／hm^2，干草产量达31．76t／hm^2，显著高于草层在120cm刈青时（A处理），每年刈3-4次，年平均产量达84．00t hm^2。A、B两处理的分蘖数随刈次的增加均逐渐增加，且B处理前两次的分蘖数高于A处理，冬春季节同一时间刈青的分蘖数，A处理显著高于B处理。叶茎比A、处理大于B处理，叶量较大。日生长量及干物质含量B处理均高于A处理。建议采用草层高度在200cm刈青，可显著提高产量，且切碎饲喂肉牛可提高阈牧101的利用率。     

大麦耐盐性研究进展

大麦的耐盐性机制很多，有细胞的渗透调节作用，盐分离子的选择吸收与区域化分布（即高K＋／Na 比的保持）、细胞膜的稳定性以及糖类物质代谢活性，氮类物质合成，矿质营养等。其中有些方面又包括许多小机制，如调节细胞渗透势的内源有机物质主要为甜菜碱，脯氨酸和蔗糖，决定K^ ，Na^ ,Cl^-的选择吸收和较高K^ /Na^ 比的机制有离子分隔作用，根部细胞的排盐性和Na^ /H^ 交换作用；影响细胞膜透性的主要因素有盐离子毒害作用及SOD的活性；氮类物质的合成则包括各种氨基酸、几种多胺以及盐诱导蛋白的合成情况。     

A.B.T生根粉在棉花上的应用研究

A．B．T生根粉是由中国林科院研制的一种新型、高效、无毒、广谱型植物生根促进剂。它具有补充根系生根所需外源生长素和促进植物体内源生长素合成的双重功能，能促进不定根的形成。在95年通过田间试验筛选出适宜应用于棉花的A．B．T绿色植物生长调节剂的基础上，96年继续进行试验鉴定，为今后大面积推广提供依据。1试验材料和方法1．1试验材料中国林科院提供的A．B．T生根粉系列药剂：ABT6号、ABT7号、ABT4号。1．2试验方法①用ABT6号、ABT7号、，ABT4号用酒精初溶的20mg·kg（－1）的水溶液浸种，以清水作对照。②试验采用随机…     

向日葵柄锈菌效应子P2的定位及功能研究

由向日葵柄锈菌（Puccinia helianthi Schw.）引起的向日葵锈病严重威胁着向日葵的安全生产。效应子是一类病原菌侵染过程中分泌的蛋白，促进病原菌侵染或触发寄主免疫。为明确向日葵锈菌效应子P2在锈菌侵染过程中发挥的作用，对该基因序列进行了生物信息学分析；以向日葵锈菌夏孢子cDNA为模板，克隆了P2基因的编码序列，利用qRT-PCR技术分析了该基因在侵染过程中的表达特性；采用农杆菌瞬时表达系统在烟草上验证了P2的毒性功能，并在烟草上瞬时表达对其进行了亚细胞定位。研究结果表明，P2编码58个氨基酸，N端含24氨基酸的信号肽，无核定位信号及跨膜结构域，并在向日葵锈菌侵染早期上调表达。在本氏烟中瞬时表达P2可以抑制BAX诱导的细胞坏死，亚细胞定位结果表明P2定位在细胞膜及细胞核。     

生物农药“天霸”防治茶小绿叶蝉,茶叶害螨的效果试验

茶叶是一种天然保健饮料，过去长期使用有机氯化学农药防治条小绿叶蝉和茶叶害螨，致使茶叶有机氯的残留量增加，茶叶健康饮料受到威胁。为更有效地降低茶叶中有机氯的残留量，寻求替代茶园中禁止使用的高毒、高残留农药，省农科院和省绿十字生物中心联合研究开发新型高效生物杀虫剂——天霸，其内含高效价杀虫晶体蛋白和害虫解抗增效剂。今年我县引进天霸对茶小绿叶蝉和茶叶害螨进行防治试验和示范。现将试验结果小结如下：一供试药剂及浓度1．沃霸可湿性粉剂（省农科院、省绿十字生物工程联合发展中心提供）800倍液；2．15％唯螨酮可湿性…     

生长素在玉米胚乳发育中的作用，DNA的核内复制、玉米蛋白的表达和细胞

生长素在玉米胚乳发育中的作用，ＤＮＡ的核内复制、玉米蛋白的表达和细胞激动素的同步性─（Ｈ．Ｓ．Ｌｕｒ等），ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９３，Ｖｏｌ．１０３，Ｎ０．１，２７３～２８０（英文）试验检测了玉米胚乳的发育进程和生长素的有规则的作用之间...