B型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从辽宁某公司鸡场疑似鸡传染性鼻炎的病鸡眶下窦分离到一株副鸡嗜血杆菌，用Page程序和Kume程序对其进行血清型鉴定，确认为B型副鸡嗜血杆菌，这是首次在我国分离到B型副鸡嗜血杆菌。     

一株A型副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从山东省某蛋鸡场发病鸡群中分离到一株细菌,经培养特性观察、生化试验、V因子生长试验、致病性试验和PCR试验,证实分离菌为一株致病性副鸡嗜血杆菌,血清型鉴定该菌为A型。药物敏感性试验表明分离菌对头孢噻肟、头孢曲松、丁胺卡那霉素高度敏感,对硫酸新霉素、强力霉素中度敏感,对磺胺间甲氧嘧啶钠、环丙沙星、庆大霉素耐药。     

A型副鸡嗜血杆菌河南株的分离鉴定

从河南某发生肿头、流泪、流涕等呼吸道症状的蛋鸡发病场分离到1株细菌,结合临床症状、分离培养和PCR实验等,初步确定为副鸡嗜血杆菌。23SrRNA基因测序结果显示该菌与副鸡嗜血杆菌A型疫苗株C-Hpg-8株(CVCC254)99.6%同源,通过血清型凝集试验证实为A型,为本省副鸡嗜血杆菌的防治提供了科学依据。     

用单克隆抗体进行副鸡嗜血杆菌定型

抗副鸡嗜血杆菌血清A和C型株所制备的两个血清型单克隆抗体（MAbs），分别对副鸡嗜血杆菌血清型A、B、C中的各型参考株作HI和dot－blotting试验。一种MAb（E5C12D10）为抗血清型A代表株221，另一种MAb（F2E6）为抗血清型C代表株S1。在两种试验中，不同血清型的MAbs可与对应的血清型中的副鸡嗜血杆菌株血凝（HA）抗原反应，而与血清型B代表株91、147均无反应。故这些MAbs可用于dot－blotting或HI试验进行副鸡嗜血杆菌定型。     

B型副鸡嗜血杆菌北京株的分离与鉴定

鸡传染性鼻炎(IC)是由副鸡嗜血杆菌引起的一种上呼吸道传染病，本病主要影响蛋鸡的产蛋(下降10％～40％)和肉鸡的肉质，给养鸡业造成较大的经济损失。     

一株B型副鸡嗜血杆菌的分离与鉴定

副鸡嗜血杆菌是鸡传染性鼻炎的致病菌,该菌感染鸡后可引起急性或亚急性上呼吸道传染病,临床上该病菌潜伏期短、传播速度快、发病率高,且常与其它致病微生物一起引发混合感染,造成严重的经济损失。自2018年6月份以来,山东滨州博兴某养鸡场陆续发生蛋鸡产蛋迅速降低、打喷嚏、鼻孔流出黏液性或脓性分泌物等症状,严重者出现颜面肿胀、生长停滞等临床表现,每天发病鸡不断增多,但死亡鸡6~10只/d不等;通过到鸡场现场调研、采样、实验室分离鉴定等,最终确诊鸡群感染副鸡嗜血杆菌,并指导该鸡场采用有效药物开展治疗及加强免疫等,疫情得到了有效控制。现将实验室分离鉴定等工作总结如下。     

副鸡嗜血杆菌PCR检测方法的建立

参照GenBank中已发表的副鸡嗜血杆菌血凝素（HA）基因设计合成了一对引物,预计扩增片段大小约为412bp。利用这对引物,通过对PCR反应体系和反应条件的优化,建立了针对副鸡嗜血杆菌的PCR检测方法。结果表明,该方法敏感性较高,最低可检出1．7×10^4CFU／mL的副鸡嗜血杆菌,对副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌在相同反应条件下未扩增出任何片段,说明该方法具有较好的特异性。     

培养副鸡嗜血杆菌用干粉培养基的优化研究

优化副鸡嗜血杆菌干粉培养基配方。通过单因素平行对比配方中碳源、血清、辅酶等营养物质,确定各个因素对副鸡嗜血杆菌生长的影响。研究筛选出了适宜副鸡嗜血杆菌生长的干粉培养基配方：鸡肉蛋白胨、酪胨、多价胨、酵母粉、葡萄糖等,再添加7.5%鸡血清和10 mg/L辅酶Ⅰ,于37℃、5%CO₂恒温培养箱中160 r/min振荡培养14～16 h。优化后的配方更适于培养副鸡嗜血杆菌,为副鸡嗜血杆菌疫苗大规模生产提供了参考依据。     

鸡副嗜血杆菌病的诊治

2002年12月初,承德市某校办养鸡场2 400余只产蛋鸡和3 000余只6周龄的雏鸡,相继发生一种以流泪、流鼻涕及面部水肿为主要特征的传染病,造成鸡只死亡和产蛋率下降.     

混合感染中鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

从冀南地区某养鸡场患呼吸道疾病的病鸡群采集5份样品（气管和眶下窦分泌物）中，同时分离到鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌两种病原体。通过病原的分离培养、细菌L型检验、生化试验、血清学试验等鉴定，证明分离的鸡毒支原体与国际标准株S6的血清型一致，副鸡嗜血杆菌的血清型为A型，动物试验表明，分离的鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌均具有明显的致病性，说明该病鸡群同时混合感染了鸡毒支原体和副鸡嗜血杆菌。     

B型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定

血凝素是副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum，Hpg）的主要抗原成分之一，鸡只对Hpg的免疫力与血凝素抗体滴度成正相关。根据GenBank上已发表的B型Hpg Dalian株的血凝素基因序列（AY622378），设计合成了1对特异扩增Hpg血凝素基因的引物。以大连分离株Hpg中提取的细菌DNA为模板，利用PCR扩增出了1038bp的血凝素基因，将其克隆到pET-32a载体上，构建了pET-HA原核表达质粒并在BL21。大肠杆菌中过量表达。血凝试验显示纯化的重组蛋白具有血凝活性；Western试验证明该重组蛋白可以被B型Hpg特异性鸡血清所识别。本研究在国内首次对Hpg的血凝素基因进行克隆表达，并分析了重组蛋白的血凝活性。     

A C型副鸡嗜血杆菌免疫鸡血清抗体动态观察

副鸡嗜血杆菌 ( Hpg)是引起鸡传染性鼻炎 ( IC)的病原体。其感染鸡群后 ,引起蛋鸡产蛋率下降、生长发育鸡群的生长受阻及淘汰率的增加 ,并易继发或并发其他传染病造成更严重的后果 ,从而引起很大的经济损失。本菌通常分为 A、B、C 3个血清型 ,由于各型均能致病且现有疫苗无型间     

A型副鸡嗜血杆菌(山东株)的分离与鉴定

2011年11月,山东某肉鸡场发生以肉鸡眼睑及眶下窦周围明显肿胀为主要特征的传染性疾病。从采集的发病鸡眶下窦中分离到1株细菌,根据发病鸡群的临床症状、细菌的分离培养、形态观察、过氧化氢酶试验、革兰氏染色、动物回归试验、免疫攻毒试验和PCR等方法初步鉴定为副鸡嗜血杆菌(Hpg)。此外通过分离菌株的水平传播试验结果表明,造成该鸡场Hpg的水平传播和鸡传染性鼻炎的反复发作与饲养密度有很大的关系。最后将分离菌株送匈牙利诗华研发中心进行分型鉴定,确定为A型副鸡嗜血杆菌。根据分离地点将分离菌株命名为A型副鸡嗜血杆菌(山东株)。另外通过与GenBank已发表的Hpg基因序列进行同源性比对分析,结果显示,该基因序列与参考株的基因核苷酸序列同源性达99.0%。     

副鸡嗜血杆菌人工感染鸡抗体动态的研究

本研究采用阻断ELISA（B－ELISA）和血凝抑制试验（HI）方法,检测了鸡体分别人工感染副鸡嗜血杆菌Hp8株（A型）和H668株（C型）后0－9周的血清抗体消长情况,并绘制了示意抗体曲线。结果表明,Hp8人工感染后,从第2周到第9周,B－ELISA阳性检出率一直保持100％,其中抗体效价在感染后第4周达到效价高峰,平均约为15．2。而H688人工感染鸡则在感染后第7周检出率最高,此后急剧下降。AI方法对A型抗体的阳性检出率亦在在第4－5周达到高峰,而对C型抗体的检出率一直较低。结果进一步显示了B－ELISA良好的特异性和敏感性,为本方法及其试剂盒产品的进一步应用提供了参考。     

鸡副溶血性嗜血杆菌病的诊断

本文所报道贵阳市某鸡场鸡群发生的,一次以眼结膜炎为主伴有鼻炎症状的传染病,该病传播快,发病率达64％,死亡率65％,经采取病鸡和病死鸡的眼结膜及鼻腔分泌物进行病原分离、鉴定确诊为副溶血性嗜血杆菌。现将实验诊断情况详述如下。1 流行情况 贵阳某鸡场于1994年11月从某种鸡场引进500羽45日龄肉用AA仔鸡,仔鸡进场     

副鸡嗜血杆菌病的诊断要点

副鸡嗜血杆菌病可做涂片镜检呈两极浓染,分离培养蘸取分泌物的棉拭子直接在鲜血琼脂培养基上进行划线接种,通过烛缸置于37℃的条件下培养2 d即可。药敏试验可分别采用磺胺嘧啶、磺胺米隆以及新诺明等磺胺类药物和氟苯尼考、罗红霉素、土霉素、新霉素等广谱抗菌药物。血清学试验和动物接种试验及ELISA和PCR也可对本病进行诊断。     

副鸡嗜血杆菌液体发酵培养试验研究

用发酵罐采取相应工艺对副鸡嗜血杆菌的液体培养特性进行试验。结果发现发酵罐培养的活菌数平均能达到16.5亿/ml,培养最适时间为10～12h。用发酵罐培养菌体抗原比鸡胚接种培养产量高,更适合工业化大规模生产,且方便浓缩。     

副鸡嗜血杆菌分离鉴定血清学定型研究

通过流行病学调查，发展我省有鸡传染性鼻炎流行，采集试验样品３０５份，分离得副鸡嗜血杆菌１０２株，分离率３３．４％。根据Ｐａｇｅ的凝集试验分型方案，对１０２株副鸡嗜血杆菌分别与Ａ，Ｂ，Ｃ三种标准血清定型，有６４株菌定为Ａ型占６２．７％，其余３８株为Ｃ型占３７．３％。从流行地区的型别分布来看，有６个地区是Ａ型和Ｃ型均有流行占３７．５％，Ａ型或Ｃ型单独流行的地区各有５个，各占３１．２５％。研究结果对研制