夏洛莱羊非繁殖季节胚胎移植试验研究

试验于2004年4月8日开始，随机选择12只夏洛莱羊作为供体，当地普通绵羊100只作为受体，进行诱导发情处理和超排处理。供体诱导发情率83．3％（10／12），受体诱导发情率88％（88／100）。回收卵128枚，其中获得有效胚胎96枚、未受精卵32枚。移植妊娠率64．8％（57／88）。     

影响细胞核移植效率的因素

1997年,世界上第一只成年绵羊乳腺上皮细胞核移植后代多利（Dolly）的诞生。标志着核移植技术进人了一个崭新的发展阶段。这一成就具有划时代的意义。而且进一步证实了基因活性学说的正确性,证明高度分化的体细胞仍然具有基因组的等同性,其细胞核仍然具有支持哺乳动物全程发育的全能性。此后,以不同动物不同组织来源的体细胞进行核移植均得到了后代。这些细胞包括颗粒细胞、卵丘细胞、鼠尾尖细胞、乳腺细胞、皮肤成纤维细胞、输卵管和子宫上皮细胞、转染或未转染的牛生殖嵴细胞、牛肌肉细胞、牛乳腺上皮细胞、肺组织细胞、兔成纤维细胞等。     

特克赛尔羊JIVET技术研究

探讨特克赛尔羊JIVET(juvenile in vitro embryo technology)技术,为优种绵羊JIVET技术体系完善提供技术支撑。试验对4~8周龄特克赛尔羊超数排卵,采用活体采卵的方法及对卵母细胞的体外成熟—受精—受精卵培养—受精卵移植的方法进行特克赛尔羊JIVET技术研究。结果显示:4只4~8周龄特克赛尔羊获得可用卵母细胞296枚,平均74枚/只;获得2~4细胞期受精卵205枚,卵裂率为69.26%,平均获2~4细胞期受精卵51.25枚/只;将66枚2~4细胞期受精卵移植给11只受体羊,6只羊受孕,生产11只羔羊,受胎率为54.55%。研究表明,本试验方法可作为特克赛尔羊JIVET技术研究的方法。     

绵羊胚胎37℃体外培养试验(摘要)

随着家畜胚胎移植技术的成功和运用以及家畜胚胎学研究的进展,受精卵的体外保存和培养已成为迫切需要解决的问题。据国外报导,绵羊受精卵发育的早期阶段(1～4细胞)也可以在体外培养发育至胚泡阶段。Tervit和Rowson(1974)报导,18个8细胞的绵羊受精卵在体外培养三天后移植产下10只羊羔。为代替母兔输卵管内培养鉴别受精卵死活的方法,我们于1978年8～9月间,进行了绵羊受精卵37℃体外培养试验。现将试验方法和结果简述如下:     

精子提取液对绵羊同异种核移植重构胚的激活效果

应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚，比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用，并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明，绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚，每一重构胚注射3pL浓度为5mg／mL的绵羊精子提取物，对同种和异种胚的发育效果均为最好，并显著高于其他试验组（P〈0．05）。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响，与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著（P〉0．05）。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响，与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著（P〉0．05），但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著（P〈0．05）高于化学激活法的细胞数（72．4vs65．2）。     

用牛奶克隆出牛

日本科学家４月底宣布，他们利用牛奶中的乳腺细胞克隆出两头牛犊，这是世界上首次使用动物乳汁克隆出动物。研究人员于１９９８年７月从一种荷兰乳牛的初乳中取出５０个乳腺细胞，先从这些乳腺细胞中取出细胞核，然后与剔除核的未受精卵子融合，促使卵子分裂成胚胎，再移...     

牛胚胎体外生产与早期胚胎发育的探讨

试验对牛胚胎体外生产技术中的体外受精液、精卵共育时间、血清和培乔液等影响早期胚胎体外发育的因素进行了研究。以BO（Brackett ＆ Oliphant）和BM（BO：成熟培养液=3：2）作为受精液，受精卵的囊胚发育率分别为26．0％和15．0％；精卵共育时间以9-12h为宜；受精卵在含血清FBS或OCS培养液中的专胚发育率分别为26．4％或29．9％，明显高于在无血清培养基中的囊胚发育率（10．3％）；TCMl99、mBECMaa、mSOFaa3种胚胎培养液均能支持受精卵的体外发育，在其中培养受精卵囊胚发育率分别为18．O％、30．7％和29．2％。试验结果表明：精卵于BM受精液中共育9～12h后，将假定受精卵置于添加5％OCS的mBECMaa或mSOFaa培养液中培养，能显著提高体外生产胚胎的囊胚发育率。     

道塞特、萨福克、特克塞尔三品种绵羊规模化胚胎移植应用研究报告

2003年5月和2004年6月分两批从澳大利亚引进三个绵羊品种：道塞特（Dorset）、萨福克（Suffork）和特克塞尔（Texel）共389只，选择其中116只作为供体母羊进行胚胎移植，使甩CIDR＋FSH递减法对供体超数排卵处理，其中111只供体发情，配种、采胚（反应率95．6％，111／116），平均采胚10．04枚（1114／111），可用胚平均6．23枚（691／111），可用胚率62.03％（691／1114）。将691枚2～16细胞可用胚移植给618只受体小尾寒羊，受体采用PG两次处理法同期处理。妊娠485只，妊娠率78．48％，共产羔537只，产羔率110．72％。     

2000年动物克隆及相关领域研究进展

1　猪的克隆成功与异种器官移植　　继 1 997年绵羊 Dolly克隆成功后[1 ] ,1 998年克隆了牛和小鼠 [2 ,3 ] ,1 999年克隆了山羊[4] 。我国科研人员在1 999年和 2 0 0 0年也成功克隆了山羊[5 ,6] 。在 2 0 0 0年 3月1 4日 ,PPL公司宣布通过体细胞核移植技术产生了 5头克隆猪 [7] 。 5头小猪与作细胞核供体的母猪一样全是雌性。之后 ,Polejaeva等 [8] 和 Onishi等[9] 2个研究组分别在《Science》和《Nature》上报道了通过体细胞核移植技术克隆猪的研究。克隆猪不像克隆绵羊和牛 ,其困难是植入母猪子宫中至少要有 4个以上胚胎才能保证成功…     

来自胚胎和成年哺乳动物细胞的存活后代

来自胚胎和成年哺乳动物细胞的存活后代Ｗｉｌｍｕｔ等著于希江摘译吴常信李宁校哺乳动物的卵受精后，进行连续细胞分裂与分化，首先进入早期胚胎，然后形成成年动物的各种细胞类型。将发育到一定阶段的单个细胞核移植到一个去核未受精卵内，提供了研究细胞分化到一定阶段...     

动物克隆技术研究进展

1 震惊世界的克隆“多利” 1997-02-27，英国《Nature》杂志，报道了英国罗斯林研究所Roslin Institute，Uk的威尔穆特（I．Wilmut）博士及其同事的题为“从胚胎和成年哺乳动物细胞繁衍后代”（Viable offspring derived from fetal and adult msmmalian cells）的研究论文，宣布了首次成功地运用成年母羊乳腺上皮细胞作为细胞核的供体的移植技术，克隆了1头名叫“多利”的小绵羊。     

小鼠卵细胞体外成熟培养及孤雌激活

[目的]利用小鼠卵母细胞体外成熟培养及3种激活方法（乙醇激活、氯化锶激活、乙醇-氯化锶激活）对小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。[方法]小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得3级未成熟卵母细胞．在成熟培养液（M199100mL＋丙酮酸钠2．2mg＋抗100IU／mL＋LH2IU／mL＋FCS10％）中对小鼠未成熟卵细胞进行体外成熟培养,获得的成熟卵母细胞分别在乙醇、氯化锶、乙醇一氯化锶不同激活剂中激活,[结果]A级卵母细胞成熟率为79％．B级卵母细胞成熟率为70％,C级卵母细胞成熟率为55％。A级卵母细胞使用氯化锶激活率可达80．0％,为最佳方法。[结论]A级卵母细胞成熟培养效果最好。孤雌激活氯化锶激活效果高于乙醇．．     

绵羊受精卵(胚胎)移植研究报告——垂体促性腺激素(FSH、LH)促黄体释放激素(LRH)类似物对绵羊超数排卵和受精卵移植试验的研究

应用FSH400单位/LH200单位和FSH400单位/LRH类似物50微克,诱发老龄新疆细毛母羊超数排卵,在发情开始后65～80小时采卵,前者41只(包括茨盖羊3只)平均取得受精卵9.8±7.6个,卵子受精率70.09％,后者28只(包括茨盖羊4只)平均取得受精卵8.2±4.6个,卵子受精率68.15％。二者所得受精卵的移植产羔率无明显差异(X~2=1.16 P>0.05)。 32只试验供体于75～80小时采卵,平均取得受精卵10.31±6.7,卵子受精率77.66％,8～16细胞卵占受精卵总数的81.52％。 LRH类似物,应用于绵羊的超数排卵,具有效果稳定,使用方便,价格低廉的特点,更宜在生产上应用。据对移植受体产羔的分析,注意到: 1、当超排卵达到25个左右时(20例),对卵子受精率及其移植产羔率仍无明显影响。 2、16细胞卵单卵移植的产羔率69.44％(25/36),2细胞卵单卵移植的产羔率35.0％(14/40)。分裂阶段较高的受精卵,产羔率相应较高。 3、双卵移植的产羔率48.15％(26/54),单卵移植的产羔率46.34％(209/451)但双卵移植的受精卵存活率低达27.77％(30/108)。 4、双卵移植时的双羔率,似与受体品种本身的双羔率有关。     

应用Y—DNA特异片段的PCR技术鉴定牛和绵羊胚胎性别及应用研究

本研究采用国际八十年代中后期研究成功的特定ＤＮＡ片段扩增技术—聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，进行牛和绵羊胚胎性别鉴定。采用删除富集法，构建富含牛和绵羊Ｙ—ＤＮＡ文库，筛选出特异克隆，并根据其序列，分别设计合成引物，用ＰＣＲ技术分别扩增牛Ｙ染色体上约１４０ｂｐ的片段，绵羊Ｙ染色体上约１３０ｂｐ的片段。对已知性别的牛和绵羊血液样品进行检测，准确率均为１００％（１０／１０；１１／１１）。应用已建立的简易、快速胚胎取样方法及防污染措施，以及设计合成的引物和ＰＣＲ检测胚胎性别的技术方法，奶牛胚胎经性别鉴定后移植，产犊牛７头（４头公犊，３头母犊），准确率为１００％（７／７）。在内蒙牧区生产现场，对绵羊胚胎经性别鉴定后移植，共移植成功１８只受体母羊（每只母羊移植２－４枚同性别胚胎），产羔２５只（８只公羔，１７只母羔），准确率为８０％（２０／２５）。     

优化山羊体细胞核移植方案的研究

以乳腺细胞、胎儿成纤维细胞和颗粒细胞为供体细胞进行核移植，比较了供体细胞类型、细胞冷冻及核移植的重建方法（胞质内注射、电融合）对重构胚早期发育的影响。结果：（1）乳腺细胞支持重组胚的发育能力（囊胚率7．14％）显著低于成纤维细胞（16．19％）和颗粒细胞（19．01％）（P〈0．05），卵裂率无显著差异（P〉0．05）；（2）乳腺上皮细胞构建重组胚时电融合法的效率（69．52％）极显著高于胞质注射法（59．20％）（P〈0．01）；成纤维细胞的重组成功率、卵裂率和囊胚率在两种方法间均无显著差异（P〉0．05）；在颗粒细胞，胞质注射法重组成功率（82．17％）显著高于电融合法（50．99％）（P〈0.05），其囊胚率也稍高于电融合法，但无显著差异（P〉0.05）；（3）上述3种供体细胞在冻融后支持重组胚发育力方面无显著差异（P〉0.05）。结论：在山羊体细胞核移植中，上述3种细胞支持重组胚的发育力以成纤维细胞和颗粒细胞较好；细胞冷冻对其无显著影响；在构建重组胚方法上，乳腺细胞以电融合法为宜，颗粒细胞是胞质注射法优于电融合法，而成纤维细胞两种方法均可。     

影响细胞核移植效率的因素

1997年,世界上第一只成年绵羊乳腺上皮细胞核移植后代Dolly的诞生[1],标志着核移植技术进入了一个崭新的发展阶段.这一成就具有跨时代的意义,而且进一步证实了基因活性学说的正确性,证明高度分化的体细胞仍然具有基因组的等同性,其细胞核仍然具有支持哺乳动物全程发育的全能性.此后,以不同动物不同组织来源的体细胞进行核移植均得到了后代.     

绵羊胚胎37℃体外培养初步试验

随着家畜胚胎移植技术的成功和应用以及家畜胚胎学研究的进展,受精卵体外保存和培养已成为迫切需要解决的问题。据国外报导,绵羊受精卵发育的早期阶段(1—4细胞)也可以在体外培养发育到胚泡阶段。Tervt和Rowson(1974)报导,18个8细胞的受精卵体外培养三天后移植,结     

哺乳动物的种間卵移植

将用“孕马血清”处理过的母绵羊,在手术前2 1/2～3天进行配种,然后由输卵管中将18个卵(2～12个细胞时期)移植到七个母兔的输卵管中,该母兔於2～114小时前曾用切断输精管之公兔配种,过4～5天后将母兔杀死解剖,发现9个绵羊卵和母兔卵在一起得到成活,并发现所有母兔卵均未分裂,而绵羊卵继续正常的分裂。(因母兔卵未受精——譯者按)。观察时其中有6个是32细胞桑椹期,2个为8天囊胚期,将后者再移植至一个未受胎,而六日前曾排过卵的母羊体中。16日后,将绵羊屠宰发现胚胎发育正常,以     

小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养及形态学变化

以无菌手术法取健康妊娠期、泌乳期昆明小白鼠的乳腺组织，用胰蛋白酶、胶原酶1分段消化法获得小鼠乳腺细胞。生长培养液为DMEM／F12，含10％胎牛血清，添加胰岛素（5μg／mL）、EGF（5ng／mL）、氢化可的松（1μg／mL）、青霉素（200IU／mL）及链霉素（0．1mg／mL）。从乳腺组织中获得的细胞直接放入-80℃冰箱中进行冻存，冻存液为DMEM／F12，含20％胎牛血清、10％DMSO。用倒置显微镜观察细胞形态，发现乳腺组织消化后即可获得呈圆饼状的上皮细胞；培养过程中，乳腺上皮细胞的形态以鹅卵石型和多角型为主，增殖可形成乳头状结构，称之为乳球体，大量增殖后形成圆顶型结构。细胞核呈圆形或椭圆形，在传代过程中，乳腺上皮细胞可形成岛屿状的闭合型细胞群，边界清晰，细胞之间结合紧密，细胞间呈拉网结构。结果表明：获得典型上皮细胞形态的小鼠乳腺细胞原代培养物，从泌乳期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第1代时无法长成单层；而从妊娠期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第3代时才无法长成单层；冻存后复苏的乳腺细胞在培养过程中仍然具有典型的上皮细胞形态，并且增殖旺盛。     

幼龄杜泊羊胚胎体外生产技术的研究

为探讨幼龄杜泊羊胚胎体外生产技术(JIVET),给幼龄杜泊羊卵巢卵泡的利用提供技术支撑,试验采用促卵泡素(FSH)和孕马血清(PMSG)对4~8周龄杜泊羊进行诱导、活体采集卵母细胞、卵母细胞体外成熟-受精-受精卵培养及2~4细胞期受精卵移植研究。结果表明:从8只4~8周龄杜泊羊中采集到可用卵母细胞585枚,平均73.13枚/只;获得2~4细胞期受精卵346枚,卵裂率59.15%;将77枚2~4细胞期体外受精卵移植于17只受体母羊的输卵管壶腹部,7只母羊受孕,产羔13只,受胎率41.18%。说明采用4~8周龄杜泊羊胚胎体外生产技术可作为JIVET的有效技术。