苜蓿子叶节离体培养体系的研究

以黑龙江省主栽优质紫花苜蓿为试验材料,建立快速有效的苜蓿子叶节离体再生体系,为便于开展苜蓿遗传体系研究,比较了不同激素组合、苗龄、切割方式以及不同蔗糖浓度对苜蓿再生体系的影响。结果表明,在MS+1.5 mg·L-1 6-BA+3%蔗糖、pH 5.8的条件下启动培养为最佳芽启动培养方式,再转入最佳芽诱导培养基MS+1.0 mg·L-1 6-BA+3%蔗糖、pH 5.8的条件下,苗龄8 d的子叶节出芽率最高,保留两片子叶各切除1/3为最佳切割处理方式,确定生根培养基为:1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA+1.5%蔗糖,pH 5.8,0.8%琼脂,整个过程从种子萌发到驯化移栽,仅需8周。     

黄瓜子叶节再生体系优化研究

研究了TDZ和IBA浓度、苗态、外植体切割和接种方式及基因型对黄瓜子叶节再生体系建立的影响。结果表明,最佳芽诱导培养基为M S+0.005 m g/L TDZ+0.05 m g/L IBA;两片子叶脱离种壳且与下胚轴处于弯曲状态的子叶节再生频率最高;保留单片子叶、下胚轴纵切、切除此子叶的2/3且竖直插入为最佳切割和接种方式;农城3号为最佳基因型,每块外植体再生芽数可达1.89。     

大豆子叶节离体再生体系优化研究

为获得大豆子叶节高效离体再生体系的优化方案,选用5个大豆品种的子叶节作为外植体,研究了种子萌发天数、外植体大小、不同激素浓度对大豆子叶节再生的影响。结果显示,大豆苗龄以5—7d最佳;外植体以保留全部子叶为宜;外植体的萌发和诱导均存在基因型差异,292黄豆的最佳萌发培养基为1／2MS＋1mg／L6-BA,而鄂8157、湘春豆18号、湘春豆13号、湘春豆15号的最佳萌发培养基为1／2MS＋2mg／L6-BA,292黄豆、鄂8157、湘春豆18号、湘春豆13号、湘春豆15号的最佳诱导培养擎组合分另0为MS＋2mg／L6-BA、MS＋2mg／L6-BA、MS＋1mg／L6-BA、1／2MS＋2mg／L6一BA＋0．05mg／LIBA,MS＋2Ing／L6—1;^、丛生芽诱导率分别为60％、62．5％、81．25％、77．27％和47．5％;子叶节丛生芽生根时IBA浓度以2mg／L为宜。     

硝酸银对黄瓜离体子叶培养芽再生的促进效应

以黄瓜品种“津春4号”无菌苗子叶为材料，研究了AgNO3对离体子叶芽再生频率的促进作用。结果表明，在含KT 2mg/L和NAA 0.1～0.4mg/L的MS培养基中附加AgNO3 2～6mg/L，可显著地提高离体子叶芽再生频率，其中最适培养基为：KT 2mg/L+NAA 0.3mg/L+AgNO3 2mg/L，芽再生频率达到77.2%。这种促进作用与AgNO3抑制乙烯的形成有关。     

陆地棉子叶离体培养诱导不定芽植株再生

以陆地棉种子无菌苗的子叶为外植体材料,研究不同苗龄的子叶、激素组合、硝酸银等对子叶诱导不定芽的影响.试验结果:15 h苗龄的子叶,在附加BAP 3.0 mg/L、IAA 1.0 mg/L、2ip 1.0 mg/L和AgNO3 5.0 mg/L的不定芽诱导培养基上,珂字棉312和泗棉3号的不定芽诱导频率分别为70%和60%左右.     

甜瓜自交系离体子叶节再生体系的建立

以4个不同甜瓜自交系为试材,研究基因型,激素(6-BA、IAA)组合、浓度对甜瓜离体子叶节再生的影响。结果表明:不同基因型甜瓜之间的再生频率差异较大,CM-15甜瓜自交系为最佳基因型,在培养基M8(MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA)上再生频率最高,达96.7%,平均每个外植体再生芽数为4;6-BA是甜瓜子叶节再生的必要激素,而IAA是促进子叶节高效再生的激素;MS培养基中添加0.05 mg/L 6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

辣椒子叶离体培养及植株再生

对5个辣椒品种进行了子叶离体培养试验，筛选出两种较适粗的培养基为：MS IAA0.2mg/L 6-BA2mg/L 30g蔗糖和MS ZT5mg/L 16g蔗糖。子叶于25℃下光照培养，21d后可陆续分化出芽，芽伸长形成茎芽约2-3cm高时移入生根培养基MS NAA0.5mg/L中，可发育为植株。     

京彩甜椒离体培养及植株再生的研究

利用甜椒的下胚轴、子叶、带柄子叶的外植体诱导分化和植株再生。结果表明：带柄子叶的分化能力最强，6-9d苗龄的带柄子叶在MS 5.0mg/L6-BA 0.5-1.0mg/L IAA 4.0mg/L AgNO3培养基上，分化频率最高可达100%。并形成大量的不定芽（1个外植体可产生15-20个以上的芽），幼苗在MS 0.2mg/L IAA培养基上能正常生根，长成健壮的再生植物。     

黄瓜子叶高效再生体系的建立与遗传转化

实验以S05、S062个黄瓜品系的子叶为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的BA、ABA、AgNO3进行再生培养。结果表明,在MS培养基上,ABA与BA组合能有效地抑制愈伤组织的形成,促进芽的发生,其再生率超过90%,每个外植体的出芽数为1～3个。S05、S06的最佳芽诱导培养基分别为:MS BA3.0mg·L-1 ABA1.0mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1和MS BA1.5mg·L-1 ABA0.5mg·L-1 AgNO32.0mg·L-1。在此基础上,以S06子叶为受体材料,建立了pBI121-ATT1为中间载体,根癌农杆菌LBA4404介导的遗传转化体系,最终获得了3株抗性植株,经过PCR检测,初步确定均为阳性转化植株。     

棉花子叶离体培养与植株再生

以棉花无菌苗子叶为外植体，就激素对其不定芽的分化及植株再生的影响进行了研究。实验结果表明，BA对子叶不定芽的诱导效果最好；TDZ次之，ZT和KT不能诱导子叶形成不定芽，IAA与BA配合使用，叶片不定芽分化频率明显提高；NAA与BA配合使用叶片不定芽分化频率有所下降；2，4－D对子叶不定芽分化有明显的抑制作用。在分化培养基中添加1．5mg/L GA3有利于芽的伸长。不定芽伸长后在不含激素的MS或MS＋0．5mg/L NAA培养基上诱导生根，形成完全植株。     

外源BR诱导黄瓜(Cucumis sativus L.)幼苗的抗盐性

【目的】明确外源油菜素甾醇(Brassinosteroid,BR)对黄瓜(CucumissativusL.)幼苗抗盐性的诱导作用。【方法】采用根际注射结合叶面喷施外源BR(0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.2mg·L-1)的方法,比较分析了盐胁迫下幼苗植株盐害指数、抗氧化酶活性、渗透调节物质含量等生理指标。【结果】外源BR能够明显改善盐胁迫下黄瓜幼苗植株的生长发育状况,降低盐害指数,最高幅度达40.2个百分点(P﹤0.01),极显著地提高叶片细胞游离脯氨酸(Pro)和可溶性糖的含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶活性(P﹤0.01),进而保护细胞膜的稳定性。【结论】外源BR可以有效诱导黄瓜幼苗的抗盐性,并且最佳浓度范围是0.01～0.05mg·L-1。     

无土栽培黄瓜品种比较试验

对在土壤栽培中表现较好的三个品种“西杂”、“828”和“长春密刺”进行了无土栽培比较试验。观察测定了各品种的生长势、生育期、果实性状、早期产量和总产量。综合分析认为:黄瓜杂一代“828”较为适合无土栽培。     

黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究

［目的］提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。［方法］以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。［结果］DNA 模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB 提取法可用于黄瓜AFLP 分析,形成清晰的AFLP 指纹。优化的酶切连接体系为：以37 ℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200 ng,预扩增时Taq酶用量为0.5 U/20 μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。［结论］为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。     

外源硅和辅酶Q10对盐胁迫下黄瓜根系线粒体的保护作用

【目的】探明外源Si和辅酶Ｑ10(CoQ10)对NaCl胁迫下黄瓜(Cucumis sativus L.)幼苗根系离体线粒体膜生物物理特性和呼吸功能的保护作用。【方法】试验设置3个处理：CK; 加50 mmol·L-1 NaCl; 加1.0 mmol·L-1 K2SiO3 + 50 mmol·L-1 NaCl。处理10 d后取各处理植株根系提取线粒体，在离体线粒体中加入10 mmol·L-1 CoQ10。【结果】Si能显著降低盐胁迫下黄瓜线粒体的H2O2含量，抑制线粒体的脂质过氧化，增加线粒体膜的流动性和膜电位(ΔΦM)，降低膜的肿胀度，使线粒体呼吸控制比(RCR)和氧化磷酸化效率(P/O)显著升高，提高线粒体的呼吸速率。CoQ10也有降低线粒体膜膨胀度，增加线粒体膜流动性和膜电位的作用，同时可以降低线粒体的H2O2和MDA含量，缓解盐胁迫的伤害作用。【结论】外源Si和CoQ10能有效缓解盐胁迫对黄瓜根系线粒体膜的损伤，增强线粒体抗膜脂质过氧化能力和膜完整性，提高线粒体的呼吸作用。     

不同苗态对黄瓜子叶节离体再生及遗传转化效率的影响

研究选用黄瓜品系S52的子叶节作为试验材料,研究了不同苗态对黄瓜子叶节离体再生的影响,筛选出再生率最高的苗态;同时利用gus瞬时表达研究不同苗态对遗传转化效率的影响。结果表明,苗态为子叶刚脱离种壳时诱导率最高,达100%,每块外植体再生芽数可达4.13,且gus表达率比其他处理高,其中经轻伤口处理的外植体遗传转化效率最高,而伤口太重则对转化不利。在筛选出最佳苗态的基础上研究了不同浓度6-BA和ABA对黄瓜子叶节离体再生的影响,获得黄瓜S52品系最优培养基为MS＋1.5mg/L 6-BA＋0.5mg/L ABA＋2.0mg/L AgNO3。     

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。     

黄瓜的分子标记和连锁图谱研究进展

黄瓜分子标记和遗传连锁图谱的研究工作相对番茄、小麦等作物比较落后,至今开展的分子标记研究多围绕黄瓜遗传关系分析进行,现有的几张遗传连锁图谱基本是由美国Staub研究小组完成,已被定位在图谱上的同工酶、RAPD、RFLP、SSR、AFLP等标记总数达到300多个,各标记间平均距离达到2.1cM,被整合在一起的遗传基因不足10个(F、B、de、ll、dm)。     

厚皮甜瓜高效再生体系的建立

以优质厚皮甜瓜品种鲁厚甜2号和鲁厚甜4号为材料,系统研究了以子叶为外植体的厚皮甜瓜组培高效再生体系。结果表明:两个甜瓜品种在不定芽和愈伤组织诱导上存在着较大的差异,在MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L的分化培养基上,鲁厚甜2号不定芽诱导率最高达92.6%;而鲁厚甜4号在MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L中达94.3%;诱导出的不定芽丛的伸长以MS+KT 0.2 mg/L为最佳;两个甜瓜品种在1/2MS+IBA 0.4 mg/L中均获得良好的生根效果。另外,保持高温、高湿是甜瓜再生苗移栽成活的重要条件。     

黄瓜果实黑刺基因定位及候选基因多样性研究

果刺颜色影响黄瓜(Cucumis sativus L.)商品品质,是外观品质育种的重要性状之一。利用黄瓜黑刺自交系S52,黑刺野生种hardwickii以及3个白刺材料S1003、WI1983G和397为试材,分别构建BC1或F2遗传群体,对黄瓜黑刺性状(black spine,B)进行遗传分析与基因定位,并使用14个不同遗传背景的黑刺或白刺材料用于B候选基因Csa4G003095序列多样性研究。结果表明,S52、hardwickii中果实黑刺由显性单基因控制,利用3个群体均将B定位于第4染色体的短臂上,最近两侧翼标记(SSRB-130和SSRB-107)与B的遗传距离分别为2.01cM和0.78cM。序列分析发现,4个黑刺黄瓜材料的Csa4G003095预测编码的氨基酸序列没有差异,但10个白刺材料在该基因编码区的变异很大,引起其编码蛋白的一小段或大段氨基酸缺失,功能缺失造成了刺色变异,验证了Csa4G003095即为黄瓜黑刺基因B。同时,B基因侧翼标记InDelB01、SSRB-99、SSRB-130可用于黑刺辅助选择育种,准确率在97.9%以上。     

烟叶下角料有机肥对番茄和黄瓜生长发育的影响

[目的]研究烟叶下脚料有机肥对番茄和黄瓜产量和品质的影响,为合理利用烟叶下角料提供依据。[方法]利用鸡粪和烟叶下角料有机肥在番茄和黄瓜上进行了田间肥效试验。[结果]结果表明,烟叶下角料有机肥对番茄和黄瓜的生长有明显的促进作用,其增产效果好于目前常用的鸡粪有机肥,在番茄上可增产20.0%~22.8%,黄瓜上可增产23.9%~29.6%;在番茄上,施肥净收入增加29 010~33 030元/hm2,黄瓜上净收入增加51 030~63 045元/hm2。[结论]可利用烟叶下角料有机肥代替农家肥,达到节肥增效的目的。