猪脾转移因子对猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（CH-1R株）免疫抗体的影响

本研究旨在明确猪脾转移因子（TF）对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）活疫苗（CH-1R株）免疫抗体的影响,采用具有自主知识产权的中国发明专利制备3批猪脾TF,将PRRS活疫苗（CH-1R株）单独或分别与3批TF联合（单独免疫组、联合免疫组1、联合免疫组2和联合免疫组3）免疫PRRS抗体阴性仔猪,并设立非免疫空白组,采用ELISA方法检测PRRS抗体水平。结果显示,免疫后第7 d、14 d、28 d、42 d和56 d,联合免疫组1、联合免疫组2和联合免疫组3的PRRS抗体阳性率均比单独免疫组高20%～40%。结果表明,TF可以提高PRRS活疫苗（CH-1R株）的免疫抗体水平,为PRRS防控提供参考。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株致弱过程中ORF5基因遗传变异分析

将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株在Marc-145细胞上传代,用85代(S85)病毒对35日龄的仔猪进行人工感染试验,证实该毒株已经被致弱,将其命名为CH-1R株。利用RT-PCR扩增10个不同代次的CH-1a株和CH-1R株病毒的ORF5基因,并与9株参考毒株进行RFLP分析,发现了一个特异性的内切酶酶切位点-TspEⅠ。根据该酶切位点,可以区分CH-1R株、CH-1a株、其它野生型毒株和参考毒株。ORF5基因的变异分析显示,该致弱毒株与CH-1a株以及其它8株参考毒株存在着差异,并且它们的氨基酸同源性在88.5%～97.0%之间。系统进化树研究表明该弱毒株仍属于CH-1a亚支。     

猪繁殖与呼吸综合征CH-1R弱毒株低血清培养工艺研究

Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞。通过对PRRSV CH-1R高敏感Marc-145/D2克隆细胞株培养特性的研究,以及分析病毒在不同血清浓度细胞维持液中的增殖水平,筛选出最佳培养条件。结果表明,以Marc-145/D2克隆细胞株无血清转瓶培养PRRSV CH-1R的抗原效价可达到108.0TCID50/mL以上。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145细胞微载体上培养条件的研究

通过研究搅拌程序,细胞接种密度,微载体浓度与细胞生长的关系,探索Marc-145细胞在微载体上的生长条件,并测定猪繁殖与呼吸综合征病毒在微载体培养的细胞上的TCID50。结果表明:细胞接种密度为4.28×105 cells/mL时,病毒滴度可达到107.5TCID50,这说明利用微载体繁殖PRRSV是可行的,为猪繁殖与呼吸综合征疫苗的大规模生产奠定实验基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)免疫后病毒血症和抗体消长规律

应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)对28-30日龄的仔猪进行免疫,前8周每周采血,8周后每2周采血进行疫苗毒核酸检测和抗体水平检测,直至免疫后第16周。结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)在血清中存在的最长时间大约为6周;抗体从免疫后第2周开始转阳,至第3周时全部为阳性,并且抗体水平不断上升,至免疫后第10周时平均抗体水平达到最高。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株活疫苗抗体应答水平的观察

用本厂生产的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗及病毒液分别以不同剂量给PRRS阴性猪注射，并在不同时间采血测其相应的抗体水平，比较不同剂量抗体水平维持时间。结果表明，猪注射该疫苗后14d即可产生较高的抗体水平，并在21—35d达到高峰，42d略有下降，70d时抗体水平仍为阳性，104d仍有85％以上的猪抗体水平阳性。     

激流灌注式生物反应器培养猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(R98株)工艺的研究

为建立猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)疫苗的大规模生产工艺,本研究应用工作体积为l00 L的激流灌注式生物反应器培养Marc-145细胞,接种PRRS病毒R98株(PRRSV-R98),进行病毒培养,结果显示,培养6d细胞数量可增殖5倍～7倍,单次病毒收获量相当于3 000个～5 000个10L转瓶,而且培养的PRRSV-R98各项指标均符合规程要求.本研究在国内首次建立了应用100 L激流灌注式生物反应器制备PRRS活疫苗的生产工艺,为规模化培养工艺的推广与使用提供了技术参数.     

不同猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株在Marc-145细胞的生长特性研究

本试验对PRRSV-CG、YN9、TP、TP-A及SHB株在Marc-145细胞上进行了部分体外生长特性研究。病毒生长曲线分析发现TP-A毒株产生病变速度快且病毒滴度高,其次为YN9、TP、CG和SHB;病毒蚀斑形态学分析发现TP-A和YN9较其余毒株形成的蚀斑大且比较均一,为大蚀斑。综合可见不同的PRRSV分离株体外生长特性具有较大的差异,为病毒的分子生物学研究奠定了基础。     

金银花提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒研究

通过观察金银花提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的Marc-145细胞的保护效果、对病毒感染滴度(TCID50)的影响及对ORF7mRNA表达的影响来评价其体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的活性。结果表明,金银花提取物大孔树脂600mL/L的乙醇/水洗脱部位对PRRSV感染细胞具有较好的保护效果,最小保护浓度为6.25μg/mL。6.25μg/mL 600mL/L的乙醇/水洗脱部位使PRRSV病毒滴度从105.8 TCID50降低至100.3 TCID50左右,使PRRSV ORF7mRNA含量降低1 000多倍。因此,金银花提取物大孔树脂600mL/L的乙醇/水洗脱部位具有良好的体外抗PRRSV活性。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）免疫后在血清中存在时间的报告

本研究应用高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1－R株）对28～30日龄的仔猪进行免疫,前8周每周采血,8周后每2周采血进行疫苗毒核酸检测,直至免疫后第16周。结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1－R株）在血清中存在的最长时间约为6周,但有的猪呈现间歇性携带疫苗毒。     

猪伪狂犬病活疫苗（Bathar-K61株）免疫佐剂的筛选

为筛选到一种适合猪伪狂犬病活疫苗的免疫佐剂,本研究通过稳定性试验、病毒效价测定、安全性试验、效力试验对5种不同类型免疫佐剂(AD01、AD02、AD03、AD04和AD05)进行了比较筛选.稳定性试验结果表明,AD01、AD03、AD04和AD05 4种佐剂稀释疫苗后6h不分层,表现出良好的稳定性,而AD02佐剂稀释疫苗1h后出现分层;病毒效价测定结果表明,AD01、AD03、AD04 3种佐剂稀释后疫苗病毒滴度为106.25-6.50TCID50/100 μL,与对照组病毒滴度无差异,而AD05佐剂稀释疫苗后,测得的病毒滴度低于对照组,仅为103.5～5.17TCID50/100 μL,对病毒效价有干扰;安全性试验表明,用AD01佐剂稀释疫苗免疫猪群后,猪只体温升高,平均体温为(40.3±0.2)℃,20％(2/10)的猪只出现呕吐,40％ (4/10)的猪只出现食欲下降和精神不振的临床症状,AD03、AD04佐剂稀释疫苗免疫猪群后,临床表现无异常,与对照组一致;效力试验结果表明,剩余的AD03、AD04两种佐剂稀释疫苗后在第7天均可检测到中和抗体,第60天抗体中和效价平均值达到高峰,分别为69.8±3.3和69.5±2.8,高于对照组的57.8±7.0.筛选结果说明,AD03、AD04两种佐剂均适用于猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株),此研究为提高猪伪狂犬病活疫苗(Bathar-K61株)的使用效果进行了有益的探索.     

The spread of Salmonella gallinarum 9R vaccine strain under field conditions.

A live vaccine based on an attenuated Salmonella gallinarum 9R strain is in use in a Salmonella enteritidis control program in commercial layer flocks in The Netherlands. In a field study, the potential spread of the vaccine strain from vaccinated flocks to nonvaccinated flocks has been studied after both the primary and the booster injection at four different rearing farms and at one layer farm. The vaccinated and the nonvaccinated flocks were monitored at regular intervals by bacteriologic and serologic examination. In this field study, no evidence was found for the fecal spread of the vaccine strain.     

猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗的研究

将广西本地分离并筛选的猪繁殖与呼吸综合征病毒株通过细胞增殖，收获感染细胞培养物，经甲醛灭活疫苗，以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。疫苗物理性状稳定良好，接种猪无不良反应，疫苗免疫原性良好。     

鸭疫里默氏杆菌类似crp基因的鉴定及其突变株对雏鸭免疫效果的评价

旨在鉴定鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)中的crp基因,并探究该基因与菌株毒力的关系,了解crp基因突变株的免疫保护效力,为开发新型R.anatipestifer减毒活疫苗奠定基础。采用P-BLAST在R.anatipestifer蛋白质组中搜寻与沙门菌crp基因相似的蛋白基因,发现R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因与沙门菌crp基因相似度为45%;将B739-0373基因克隆到表达载体上,并回补到沙门菌Δcrp突变株中,利用麦芽糖-麦康凯培养基颜色反应对其糖代谢功能进行鉴定,结果发现该基因可完全回补沙门菌自身crp的缺失,推测R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因具有类似沙门菌crp基因的功能;利用同源重组和自杀质粒,构建R.anatipestifer CH-1Δcrp突变株,比较野生及突变株的生长情况和毒力(包括黏附率、侵染率、LD_(50)、在雏鸭肝脑中的定殖能力),结果表明,crp基因的缺失使菌株生长变得缓慢,黏附力(P0.01)和侵染力(P0.001)显著下降,对雏鸭的半数致死量(LD_(50))显著提高,在雏鸭肝脏、脑中定殖能力也显著下降(P0.01);在CH-1Δcrp突变株免疫雏鸭后7,14,21 d,检测雏鸭血清中IgG水平,并以R.anatipestifer野生株对免疫后的雏鸭进行肌注攻毒,观察其临床症状和免疫保护率,发现Δcrp突变株能刺激雏鸭产生高水平的IgG抗体(P0.01),对雏鸭的免疫保护率为100%。综上表明, B739-0373基因鉴定为R.anatipestifer CH-1株的类似crp基因,可全局调控该菌株的生长和毒力;安全剂量的CH-1Δcrp突变株可诱导雏鸭产生较强的免疫保护效力,可作为新型减毒活疫苗的候选菌株。     

Evaluation of a modified live virus type-1a bovine viral diarrhea virus vaccine (Singer strain) against a type-2 (strain 890) challenge

Both type-1 and type-2 bovine viral diarrhea virus (BVDV) infections are responsible for major losses in the cattle industry. However, several commercial BVDV vaccines contain only a type-1 strain. A vaccine trial was conducted to evaluate the efficacy of BVDV type-1 (Singer strain; BVDV-1) vaccine for protecting calves challenged with virulent BVDV type-2 (890 strain; BVDV-2). Thirty-eight BVDV-negative calves were randomly allocated to four groups. One group was treated with a modified live virus (MLV) BVDV-1 vaccine by i.m. injection and another group was treated with the same vaccine by s.c. injection. Two groups served as nonvaccinated controls (one i.m. and one s.c.). Twenty-eight days following vaccination, the calves were challenged with BVDV-2 and monitored for 21 days. Clinical scores and body temperatures of vaccinated calves were significantly (P<.05) lower than for controls on several days, and peak differences occurred 8 days after challenge. The control calves had significantly (P<.05) lower leukocyte counts 3 through 8 days after challenge; leukocyte counts for vaccinated animals did not decline significantly from prechallenge levels. There were no differences in protection between the i.m. and s.c. routes of vaccination. The study demonstrated satisfactory cross protection of the BVDV-1 vaccine against BVDV-2 challenge.     

短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗CH-1R株的免疫增强作用研究

为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV (HP-PRRSV)TJ-F5攻毒,并采用流式细胞术对攻毒前后淋巴细胞亚类T、Th、Tc及NK进行绝对和相对计数.结果显示攻毒后共同免疫组仅在第3d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,28 dTc/T显著高于单独免疫组,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组在攻毒后第3d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,之后于第14和15d再次显著下降后又回升,临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻.单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40％、80％、0.研究结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗具有缓解HP-PRRSV T J-F5的免疫抑制、增强细胞免疫及提高免疫保护力的作用;在抵抗HP-PRRSVT J-F5攻击时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组.     

Efficacy of Fostera PRRS modified live virus vaccine against a Canadian heterologous virulent field strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Vaccination is a useful option to control infection with porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), and several modified live-PRRSV vaccines have been developed. These vaccines have shown some efficacy in reducing the incidence and severity of clinical disease as well as the duration of viremia and virus shedding but have failed to provide sterilizing immunity. The efficacy of modified live-virus (MLV) vaccines is greater against a homologous strain compared with heterologous PRRSV strains. The objective of this study was to evaluate the efficacy of Fostera PRRS MLV vaccine in protecting against challenge with a heterologous field strain widely circulating in the swine herds of eastern Canada. Forty-six piglets were divided into 4 groups: nonvaccinated-nonchallenged; nonvaccinated-challenged; vaccinated-challenged; and vaccinated-nonchallenged. The animals were vaccinated at 23 d of age with Fostera PRRS and challenged 23 d later with a heterologous field strain of PRRSV (FMV12-1425619). Overall, the vaccine showed some beneficial effects in the challenged animals by reducing the severity of clinical signs and the viral load. A significant difference between nonvaccinated and vaccinated animals was detected for some parameters starting 11 to 13 d after challenge, which suggested that the cell-mediated immune response or other delayed responses could be more important than pre-existing PRRSV antibodies in vaccinated animals within the context of protection against heterologous strains.     

猪瘟活疫苗(脾淋源)组织毒生产工艺改进试验

脾淋源猪瘟活疫苗使用的脾淋组织毒生产繁琐,家兔热型判定中测温次数多,工作量大。通过统计、对比,试验在大量测定取得基础体温的基础上,使用48 h、72 h两个时间点测温的方法,进行热型判定,与规程[1]要求生产方法比较,取得较好的一致性,并对最终产品进行效力对比,结果无差异。     

不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响

为研究不同免疫程序对猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响,本试验选取42头未免健康断奶仔猪,随机分为4组。A组对照组,B组免疫弱毒苗组,C组免疫灭活苗组,D组同时免疫弱毒苗和灭活苗组。分别在免疫前和免疫后第14,28,42,56,70天前腔静脉采血,采用ELISA方法检测特异性抗体,同时检测淋巴细胞转化率以及IFN-α、IFN-γ、TNF-α等细胞因子水平。结果显示:免疫后,B组抗体水平显著高于D组(P<0.05)、A组(P<0.01);在免疫后第42天,D组淋巴细胞转化率显著高于B组、C组(P<0.01),显著高于A组(P<0.01),免疫后第56天,B组淋巴细胞转化率高于C、D组(P<0.05);B组细胞因子水平在免疫后第14天高于其他3组,加强免疫后细胞因子水平均有所下降,在免疫后第70天时升高。结果表明,免疫蓝耳病弱毒苗组免疫效果优于免疫灭活苗组和两种疫苗同时免疫组。