淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞免疫功能的影响

为探讨淫羊藿苷对小鼠巨噬细胞和淋巴细胞的免疫功能,体外分离小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,以淫羊藿苷进行刺激,同时设空白对照组和阳性对照组,采用MTT法检测淫羊藿苷对巨噬细胞吞噬功能和淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测淫羊藿苷对淋巴细胞分泌IL-2、IL-4、IL-10和IL-12的影响。结果显示,淫羊藿苷能够提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能,促进脾淋巴细胞增殖,刺激淋巴细胞细胞因子的分泌。结果表明,淫羊藿苷能够提高小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的免疫功能。     

家蚕茧壳水解物对小鼠免疫功能的影响

以小鼠为实验动物研究家蚕茧壳水解物的免疫调节功能。分别给正常雄性BALB/c小鼠灌胃低剂量(575 mg/kg)、中剂量(1 150 mg/kg)和高剂量(2 300 mg/kg)家蚕茧壳水解物,30 d后测定小鼠胸腺、脾脏质量计算脏器/体质量比值,并通过脾淋巴细胞增殖试验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、乳酸脱氢酶法和血清溶血素法等,分别检测细胞免疫功能、巨噬细胞吞噬能力、NK细胞活性和体液免疫功能。与对照组相比,中剂量家蚕茧壳水解物灌胃组小鼠的脾指数显著增加(P0.05),低剂量组和高剂量组小鼠胸腺指数显著增加(P0.05);中、高剂量家蚕茧壳水解物灌胃组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞杀伤活性、腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数等显著(P0.05)或极显著提高(P0.01)。此外,家蚕茧壳水解物对小鼠体质量和血清溶血素含量没有显著影响。研究结果表明,家蚕茧壳水解物能促进正常小鼠的免疫器官质量增加,对小鼠的细胞免疫和非特异性免疫功能也有明显的促进作用。     

杨树花提取物对小鼠免疫功能的影响

为研究杨树花提取物对小鼠免疫功能的调节作用,每天给小鼠分别经口灌服0.1、0.2、0.4mg/kg的杨树花提取物和灭菌水30d后,测定其免疫器官指数、脾淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞水平、腹腔巨噬细胞吞噬功能、自然杀伤细胞(NK细胞)活性和IL-2的变化。结果表明,杨树花提取物的低剂量组可明显提高IL-2水平;中、高剂量组均可显著提高(P<0.05)小鼠的免疫器官指数、血清溶血素水平,极显著提高(P<0.01)脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数、NK细胞活性和IL-2水平。说明不同剂量的杨树花提取物均能提高小鼠免疫功能,中高剂量组效果更为显著。     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠淋巴细胞和NK细胞免疫活性的影响

为了提高人参总皂苷的生物学活性,对其进行了硫酸化修饰,并探讨总皂苷及其衍生物对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖（MTT法）和NK细胞杀伤活性（乳酸脱氢酶释放法）的影响。结果表明,2种衍生物质量浓度在50～500 mg/L时可以促进小鼠脾T、B淋巴细胞的分化增殖和NK细胞对YAC-1的杀伤作用,质量浓度较高时促进作用明显优于总皂苷;衍生物质量浓度达到1 400 mg/L时,仍然可以显著促进T淋巴细胞的增殖。试验结果提示,人参皂苷的这种衍生物有可能成为一种毒副作用较小、免疫活性更强的药物。     

紫薯花色苷对小鼠免疫细胞的调节作用

为分析紫薯花色苷(PSPA)对小鼠免疫细胞的调节作用。无菌分离小鼠脾,制备淋巴细胞,腹腔分离巨噬细胞,并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入刀豆蛋白A(Con A)或脂多糖(LPS)及1.5、3.0、6.0和12.0 mg/m L不同浓度的PSPA,经过不同时间培养后,采用MTT法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测淋巴细胞分泌白细胞介素(IL)-2和IL-10的水平,MTT法检测巨噬细胞吞噬能力。结果表明:PSPA能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,能够增强IL-2和IL-10的分泌;能够增强巨噬细胞吞噬能力。因此,PSPA能增强小鼠免疫细胞的调节作用。     

副干酪乳杆菌YLZB对小鼠免疫的调节作用

为研究副干酪乳杆菌YLZB对小鼠免疫的调节作用,本试验以Balb/C小鼠为动物模型,灌胃不同剂量的副干酪乳杆菌YLZB 30d,测定小鼠脾淋巴细胞增殖能力、巨噬细胞吞噬能力、NK细胞杀伤能力和血清IgG含量,评价该菌株的免疫调节作用。结果显示,与对照组相比,副干酪乳杆菌YLZB可显著增加小鼠淋巴细胞增殖率、巨噬细胞吞噬能力、NK细胞杀伤能力和血清IgG含量,并呈剂量依赖性。可以得出,副干酪乳杆菌YLZB具有调节小鼠免疫力的作用。     

中药增效抗菌复方对小鼠免疫功能的影响

为明确中药增效抗菌复方的抗感染作用机制,本实验进行其对小鼠免疫功能影响的研究.将受试药物按每千克体质量1 g、5 g和10 g的剂量对小鼠连续腹腔注射15 d,采用脏器系数测定法、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞法、乳酸脱氢酶释放法和MTT法分别对小鼠免疫器官指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、血清溶血素水平和淋巴细胞增殖能力进行测定.结果表明,该药物可以显著增加小鼠免疫器官指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性,也可以明显提高血清溶血素水平和淋巴细胞增殖能力.因此,中药增效抗菌复方对小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能均有增强作用.     

刺五加多糖纳米乳对免疫抑制小鼠的免疫增强作用

为给兽医临床提供一种有效的免疫增强剂，本试验通过建立小鼠免疫抑制模型，检测其免疫器官指数、脾细胞增殖活性、单核巨噬细胞的吞噬活性、自然杀伤(NK)细胞活性等来研究刺五加多糖纳米乳(ASPS-NE)对免疫抑制小鼠的免疫增强作用。结果显示：与CTX模型组比较，ASPS-NE高、中、低剂量组[100、50 mg/(kg·bw)和25 mg/(kg·bw)]均可不同程度提高免疫抑制小鼠的脏器指数，极显著增强刀豆球蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性，增强单核巨噬细胞的吞噬指数，提高NK细胞的杀伤率(P<0.01),尤其以ASPS-NE中剂量效果最佳(P<0.01)。结果表明ASPS-NE可增强免疫抑制小鼠的免疫力，发挥免疫增强作用。     

芝芪菌质多糖的制备及其增强免疫活性的初步研究

为研究芝芪菌质多糖体外免疫活性增强作用,本研究采用水提、醇沉、离子交换层析等方法纯化芝芪菌质多糖,并对各多糖组分(GAP-1、GAP-2、GAP-3、GAP-3)进行小鼠脾细胞增殖、NK细胞活性以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性的测定。结果表明:纯化的4种芝芪菌质多糖在10-3mg/mL～10-1mg/mL浓度范围内均能够显著增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;在25mg/kg～100mg/kg剂量范围内均能够显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性,而且呈剂量依赖性,其中以GAP-3效果最为明显;对NK细胞活性也有不同程度的增强作用,其中,GAP-3在浓度为100μg/mL时,NK细胞的杀伤率为27%,与IL-2阳性对照组比较,有显著增强作用(p0.05)。本研究证明,纯化的芝芪菌质多糖具有较好的体外增强免疫活性,为芝芪菌质作为增强机体免疫力的饲料添加剂提供了理论依据。     

“花艽-6”对小鼠非特异性免疫功能的影响

为研究抗类风湿性关节炎蒙药组方花艽-6对正常小鼠和非特异性免疫功能低下模型小鼠非特异性免疫功能的作用,采用碳廓清法、重量法、ELISA法和CCK-8法,研究不同剂量的花艽-6对正常小鼠和氢化可的松(HC)致非特异性免疫低下小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能、免疫器官重量、血清溶菌酶含量、脾NK细胞活性及IL-12分泌量等指标的影响。结果表明,低剂量(4g/kg)的花艽-6能显著恢复HC致非特异性免疫低下小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能、免疫器官重量系数、血清中溶菌酶含量及脾NK细胞的活性,同时提高正常小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能和血清中溶菌酶含量;高剂量(16g/kg)的花艽-6能显著提高和恢复HC致非特异性免疫低下小鼠的器官重量系数、血清中溶菌酶含量及脾NK细胞的吞噬率。提示低、高剂量的花艽-6均可显著提高正常小鼠和恢复HC致免疫低下小鼠的非特异性免疫功能。     

配方羊奶粉对小鼠免疫功能影响的研究

选用雄性BALB/c小鼠,通过腹腔注射环磷酰胺,构建免疫功能低下小鼠模型,评价益生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉对小鼠免疫功能的影响。结果显示,益生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉均可明显增强免疫低下小鼠脾淋巴细胞增殖能力（P<0.05）、自然杀伤细胞（NK）活性（P<0.01）以及碳廓清试验吞噬指数（P<0.01）。表明益生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉对环磷酰胺致免疫力低下模型小鼠具有增强免疫力作用。     

多糖作为兽用疫苗佐剂作用机制的研究进展

多糖可促进免疫调节,具有多靶点、多功能和多因子效应,因此可广泛用作兽用疫苗免疫佐剂。多糖作为疫苗佐剂可提高免疫动物脾脏、胸腺和法氏囊等免疫器官指数,增强巨噬细胞吞噬活性及抗原递呈能力,增强NK细胞杀伤能力,促进树突细胞的成熟和分化,增强机体对抗原的摄取能力,影响T细胞亚群的种类和数量,改变Th1、Th2型免疫应答反应的类型,促进B淋巴细胞增殖,刺激细胞因子及抗体的产生等。而多糖作为配体通过与Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)、甘露糖受体(mannose receptor, MR)、C型凝集素受体(C-type lectins receptor, CLR)、清道夫受体(scavenger receptor, SR)等受体分子结合,激活下游信号通路,进而发挥上述免疫活性。文章主要从上述几方面对多糖作为兽用疫苗佐剂的作用机制进行阐述,以期为多糖的进一步开发和应用提供参考。     

玉屏风复合多糖对环磷酰胺免疫抑制小鼠的恢复作用

为探讨玉屏风复合多糖对免疫功能损伤的调节和保护作用,以环磷酰胺（80mg／kg）诱导的免疫低下小鼠为实验动物模型,观察不同剂量玉屏风复合多糖（150,300,600mg／kg）对免疫器官结构和功能恢复的影响。结果发现,小鼠胸腺和脾脏体积显著增大,脾脏指数显著升高,脾淋巴细胞增殖、转化能力和NK细胞活性均显著增强（P〈0．05或P〈0。01）。脾脏结构中可见2种组织学变化,脾脏固有结构受损,淋巴组织明显增生。在对玉屏风复合多糖阳性对照组（未注射环磷酰胺）的观察中发现,小鼠脾脏结构清晰,出现结构性增生和肥大。结果证实,玉屏风复合多糙可明昂但讲务痴枷制小窜脾噼垂圭柏知功能确．海茸．对正常小赢睥睦功能扣．右明昂柏增强作用     

日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞和NK细胞活性研究

应用红细胞促淋巴细胞转化和促NK细胞活性试验,对不同生理发育时期日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞和NK细胞活性进行研究。结果表明：青年组日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞能力明显高于幼年兔和老年兔（P〈0．01）;老年组红细胞调控NK活性能力明显高于青年组和幼年组（P〈0．01）,青年组高于幼年组（P〈0．01）。日本大耳白兔红细胞调控淋巴细胞能力在青年时期达到了高峰．随后逐渐降低：而红细胞调控NK活性随年龄增长而显著增强,这提示老年兔的免疫活性细胞较多地处于预激活状态,并对刺激显示良好的免疫应答能力。     

酶解鸡蛋清小肽混合物对小鼠免疫功能的影响

本研究考察了鸡蛋清经Flourezyme(FL)、Alcalase(AL)、胃蛋白酶(PE)、胰蛋白酶(TR)或木瓜蛋白酶(PA)5种酶水解后制备的5种酶解小肽混合物(MSEE)对小鼠体外免疫功能的影响。采用体外培养,细胞吞噬实验和细胞增殖实验,观察不同种类及不同剂量的MSEE对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力和脾细胞增殖能力的影响。结果发现,不同种类的MSEE均能显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高巨噬细胞的吞噬能力,促进淋巴细胞的增殖,且表现出一定的剂量效应关系;1mg/mL不同MSEE的促吞噬能力大小顺序为:FL>PA>AL>PE>TR>对照,促脾淋巴细胞增殖能力大小顺序为:FL>PE=AL>TR>PA>对照(无丝裂原),FL>AL>PA>TR>PE>对照(LPS刺激),FL=AL>PE>PA>对照>TR(ConA刺激)。这些结果表明,5种MSEE均具有免疫增强活性,其中FL的活性最强。     

Development and functional characterization of monoclonal antibodies recognizing chicken lymphocytes with natural killer cell activity.

We have developed two monoclonal antibodies which detect cell surface antigens present on chicken lymphocytes mediating natural killer (NK) cell activity against the avian tumor cell target. The monoclonal antibodies, K-14 and K-108, stained 17 and 6% of splenic lymphocytes, and 11 and 14% of peripheral blood lymphocytes (PBL), respectively, and fewer than 5% of thymic and bursal lymphocytes. Neither of these monoclonal antibodies stained adherent macrophages or the MC29-virus transformed monocytic cell line. Both monoclonal antibodies significantly inhibited NK cell activity in a standard 4 h 51Cr-release cytotoxicity assay using the LSCC-RP9 tumor cell line as target cells at an effector to target ratio of 50:1. Pretreatment of splenocytes with either monoclonal antibody in the presence of rabbit complement (C) resulted in a significant reduction in NK cell activity. However, the monoclonal antibody K-1 which detects normal chicken macrophages did not interfere with NK cell activity. The monoclonal antibody K-108 significantly blocked Fc receptor-mediated rosette formation of sheep red blood cells coated with IgG antibodies (EA) by 56% while the monoclonal antibody K-14 did not show a significant blocking. These results indicate that the monoclonal antibodies K-108 and K-14 identify different epitopes present on the surface of chicken splenic lymphocytes which mediate spontaneous NK cytotoxicity.     

白细胞介素-2基因表达质粒对犬细小病毒VP2DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒主要抗原蛋白。研究证实由VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为提高VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究在小鼠体内尝试了利用犬白细胞介素2（cIL-2）基因增强VP2DNA疫苗免疫应答的研究。通过RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中分别扩增含终止密码子和不合终止密码子的cIL-2cDNA基因,然后将基因插入到真核表达载体pcDNA3．1中,分别构建成非融合的和与Myc／His融合的clL-2基因真核分泌型表达载体,pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2／MH。将pcDNA-oIL-2／MH表达栽体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达栽体能否介导cIL-2在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2表达载体（pcDNA-CD5sp-VP2,本室构建）单注射和VP2／IL-2表达载体共注射对小鼠进行免疫（用pcD-NA3．1栽体作为阴性对照）。免疫后通过ELISA方法检测免疫后不同时期小鼠血清VP2的抗体水平,并通过细胞增殖试验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。试验结果表明,扩增的小鼠cIL-2基因与GenBank的参考序列一致,构建的cIL-2表达载体能够介导重组cIL-2在HEK293T细胞中进行分泌表达。免疫结果显示,利用cIL-2／VP2表达载体共免疫小鼠,免疫后35d血清中VP2的抗体水平达到1：5120,明显高于VP2表达载体单免疫组（P〈0．01）。淋巴细胞增殖试验表明,2组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于阴性对照组（P〈0．01）,共免疫组的刺激指数又明显高于单免疫组（P〈0．05）。共免疫小鼠淋巴细胞7干扰素的表达水平明显高于单免疫组和阴性对照组（P〈0．01）。由此可见,cIL-2表达载体可明显提高CPVVP2基因疫苗的免疫应答水平。     

茯苓散对免疫低下小鼠免疫功能的影晌

用氢化可的松注射液制造免疫功能抑制小鼠模型,以左旋咪唑及黄芪多糖为阳性对照,设计茯苓散高（200mg／kg）、中（100mg／kg）、低（50mg／kg）3个剂量组（以茯苓多糖计）。给各组分别灌注生理盐水或药物,连续14d。试验从3个方面6个试验进行茯苓散药效学方面的考察,即巨噬细胞功能测定（小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、茯苓散对小鼠非特异性免疫功能的影响一碳粒廓清法）、细胞免疫功能测定（茯苓散对小鼠免疫器官的影响、茯苓散对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响）、体液免疫功能测定（抗体生成细胞检测、血清溶血素的测定）。结果显示,茯苓散3个剂量组均能显著提高免疫低下小鼠吞噬细胞的吞噬活性（P〈0．05）,吞噬细胞功能结果为阳性;茯苓散中、高剂量组能刺激脾脏、胸腺质量的增加（P〉0．05）,也能显著促进免疫低下小鼠的迟发型变态反应（P〈0．05）,细胞免疫功能结果为阳性;茯苓散3个剂量组均能显著提高小鼠的抗体生成细胞数（P〈0．05）,且显著增强小鼠血清凝集素水平（P〈0．05）,体液免疫功能结果为阳性。其中中剂量组效果最好,表明茯苓散对免疫低下小鼠的免疫功能有一定的增强作用。     

苦马豆素抗肿瘤作用研究进展

苦马豆素(SW)是一种吲哚里西啶生物碱,最早是从灰苦马豆中分离得到,是疯草类植物的主要毒性成分.它能抑制肿瘤细胞表面糖蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长与转移.此外,SW能促进脾细胞增殖,增强巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,还能促进机体淋巴细胞活性升高,刺激机体骨髓细胞增殖,增强机体杀灭肿瘤细胞的能力.由于SW具有很好的抗肿瘤活性和免疫增强作用,已引起国内外学者的广泛关注,并作为抗肿瘤药物筛选的后备药物.目前,国外SW抗肿瘤药物的研发已进入Ⅲ期临床试验阶段,而国内才刚起步.论文主要介绍了SW抗肿瘤作用及其临床治疗效果,并对SW下一步研究重点及应用前景进行了展望.     

Isolation and characterization of canine natural killer cells

NK cells are non-T, non-B lymphocytes that kill target cells without previous activation. The immunophenotype and function of these cells in humans and mice are well defined, but canine NK cells remain incompletely characterized. Our objectives were to isolate and culture canine peripheral blood NK cells, and to define their immunophenotype and killing capability. PBMC were obtained from healthy dogs and T cells were depleted by immunomagnetic separation. The residual cells were cultured in media supplemented with IL-2, IL-15 or both, or with mouse embryonic liver (EL) feeder cells. Non-T, non-B lymphocytes survived and expanded in these cultures. IL-2 was necessary and sufficient for survival; the addition of IL-15 was necessary for expansion, but IL-15 alone did not support survival. Culture with EL cells and IL-2 also fostered survival and expansion. The non-T, non-B lymphocytes uniformly expressed CD45, MHC I, and showed significant cytotoxic activity against CTAC targets. Expression of MHC II, CD11/18 was restricted to subsets of these cells. The data show that cells meeting the criteria for NK cells in other species, i.e., non-T, non-B lymphocytes with cytotoxic activity, can be expanded from canine PBMC by T-cell depletion and culture with cytokines or feeder cells.