断奶前仔犬死亡原凶及控制方法

仔犬一般是指从出生到45日龄为止这一段时间的犬。搞好断奶前仔犬的饲养管理，为幼犬的生长发育创造条件，是提高养犬经济效益和社会效益的关键技术之一。仔犬断奶前死亡是养犬业的一大损失，如果管理得当，大部分断奶前死亡损失可以避免。     

仔犬生长缓慢的原因及对策

<正>仔犬是指从出生到断奶(约45日龄)的小犬。这个阶段犬比较弱小,身体各项机能不完备,饲养管理中稍有差错,就会影响到仔犬的生长发育,甚至形成所谓的"僵犬"。造成仔犬生长缓慢的原因     

犬α干扰素的克隆、表达及纯化

根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaIFN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定,初步证实为CaIFN-α,用SphⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、SphⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了CaIFN-α,构建了重组表达质粒PQE30/CaIFN-α。将重组表达菌液培养至OD600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析CaIFN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右。将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的CaIFN-α蛋白。本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础。     

初生仔犬的科学饲养与管理

<正>初生仔犬即哺乳期仔犬,一般是指出生至45日龄的幼犬。仔犬的饲养管理主要抓好以下几个工作:1防寒保温初生仔犬体温调节能力很低,因此,要注意保温。1周龄以内适宜环境温度为28～32℃,2～3周龄为27℃,4周龄以后为23℃。2尽早让仔犬吃到初乳母犬分娩7d内分泌的乳汁称为初乳。初乳中     

提高仔犬成活率措施

仔犬一般是指初生至45日龄的幼犬,其生理机能尚不健全,适应能力和抗病力都很差,如果饲养管理不当,会导致生长发育不良,成活率降低。仔犬成活率的高低决定着养犬的成败。因此,如何提高仔犬     

犬α干扰素的原核表达及活性检测

本研究合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段,分别与温度诱导表达载体pBV220和化学诱导表达载体pET20b连接,构建了pBV220-CaIFN-α和pET20b-CaIFN-α重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21,通过温度诱导和IPTG诱导表达,CaIFN-α蛋白表达量分别为25%和20%。对比两方法诱导表达结果,确定最佳诱导方法为温度诱导。表达菌经超声破碎、变性、复性、疏水层析和分子筛层析后,得纯化的CaIFN-α蛋白,纯度约为96%。利用MDCK(犬肾细胞)-VSV(水疱性口炎病毒)体系,测定纯化后CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107U/mg。     

仔犬期的饲养管理

1仔犬期(30日龄以内)的生理和发育特点初生仔犬又瞎又聋,生后10～12天开始睁开眼睛,13～15天有听力,10天能站立,21天可以稳健地行走。仔犬在吃奶的过程,母犬舐仔犬的会阴部,以刺激仔犬排出大小便,生后16～20天,仔犬才能自动控制大小便。1.1消化器官不发达,消化机能不健全仔犬开始只能吃奶,不能消化其他较难消化的食物,这就构成了它对食物的质量、形态和饲喂方法、次数等要求的特殊性。1.2体温调节机能不健全对寒冷的适应能力很差,要加强保温措施。1.3缺乏先天免疫力应特别注意对仔犬的护理。2仔犬出生后一周内的饲养管理2.1保温防风保温是提…     

哺乳仔犬饲养管理要点

哺乳仔犬一般是指初生至30日龄左右的犬。仔犬出生后耳听不到眼看不见,又聋又瞎,完全靠母乳存活。尤其是产后5~7d内的初乳营养价值甚高且富含母源抗体,几乎全部能被仔犬吸收。     

犬IFN-γ的原核表达及其对A型流感病毒H3N2亚型的抑制作用

为研究犬的γ干扰素(IFN-γ)对犬流感病毒H3N2亚型的抑制作用,由经ConA诱导过的健康犬淋巴细胞中特异性地扩增犬IFN-γ(cIFN-γ)基因,构建重组原核表达载体pET-cIFN-γ,转化宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达,以MDCK-VSV法对纯化后产物进行抗病毒活性鉴定,并在MDCK细胞上测定对H3N2亚型犬流感病毒的抑制作用。结果表明,表达产物以包涵体形式存在,经变性、复性、纯化后,所制备犬IFN-γ的抗病毒活性为1.1×10~5 U/mg,重组犬IFN-γ稀释2~6倍后对犬流感病毒的增殖仍具有明显抑制作用。本研究成功表达了具备抗H3N2亚型流感病毒活性的犬IFN-γ,为犬流感病毒新型药物的开发奠定了基础。     

重组犬γ干扰素的分泌表达及抗病毒活性鉴定

为了研究犬γ干扰素在抗病毒方面的应用价值,依据乳酸菌密码子的偏好性和原核表达载体p AMJ399的特点,在不改变编码蛋白的基础上,将原有的犬γ干扰素序列重新优化,构建重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565,获得了分泌表达的犬γ干扰素蛋白,将培养p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565的培养上清液进行5倍浓缩后与MDCK细胞进行作用24 h后,接种VSV病毒,通过观察病变、MTT法检测活细胞数及荧光定量PCR检测方法,均证实该蛋白能够抑制VSV的复制,具有明显的抗病毒活性。为进一步研究犬γ干扰素在临床上的抗病毒应用和作为细胞因子佐剂的研究奠定了基础。     

禽干扰素基因工程表达技术研究进展

干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白(主要是糖蛋白),是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。根据干扰素产生的来源和结构不同可分为α干扰素、β干扰素和γ干扰素三类。研究发现干扰素通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制病毒的复制,同时它还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力,从而起到免疫调节作用,并增强抗病毒能力。由于干扰素几乎能抵抗所有病毒引起的感染,加     

犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较

根据GenBank中公布的犬α-干扰素（CaIFN-α）基因核酸序列,去掉信号肽后设计并合成1对引物,引入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点。以提取的犬肝脏DNA为模板,利用PCR技术扩增CaIFN-α基因,并分别克隆至表达载体pBV220、pET-32a（His标签）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）原核表达系统。重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。纯化目的蛋白,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性。试验结果表明,与pBV220载体连接的目的基因表达的蛋白活性较低,而与pET-32a（His标签）连接的目的基因表达的蛋白活性较高,达2.56×10⁶ U/mL。通过分析不同载体对IFN-α的表达情况,为生产高活性的IFN奠定基础。     

仔犬的饲养管理要点

<正>仔犬是指从出生到断奶这段时间的犬。由于仔犬对饲养管理的条件要求相对较高,所以,只有采用科学合理的饲养管理措施,才能保证仔犬的正常生长发育,从而培育出品质优良的犬只,达到创收的目的。     

梅花鹿γ 干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT PCR方法扩增出梅花鹿γ 干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI neo CerIFN γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK 21)和牛肾细胞（MDBK）中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16 ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。     

在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的可溶性犬α7干扰素

为了在大肠杆菌表达系统中高效表达具有抗病毒活性的犬0干扰素(CaIFN-α),本研究从犬肝脏中PCR获得CaIFN-α第7亚型(CaIFN-α7)基因,通过重叠延伸PCR方法在CaIFN-α7的N端融合连接内含肽SspDnaB intein (SDI)基因,并将该融合基因连接至pMAL-c2X载体中,构建含有内含肽和麦芽糖结合蛋白基因的CaIFN-α重组质粒.重组质粒在大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导高效表达可溶性CaIFN-α蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析纯化后可以得到纯度较高的目的蛋白.重组蛋白经MDCK-CDV检测系统证明具有生物学活性,为该干扰素的大量生产及临床应用奠定了基础.     

苷肽注射液诱导犬产生γ-干扰素试验的研究

为了探讨新型免疫增强剂———苷肽注射液对犬免疫功能的影响,以20只健康犬为研究对象,随机分为四组,每组5只,分别注射苷肽注射液、苷肽注射液和犬五联疫苗(狂犬病、犬瘟热、副流感、传染性肝炎与细小病毒性肠炎)、犬五联疫苗、生理盐水,各组犬于注射后0、2、7、15、21 d采血,检测不同组间IFN-γ含量的变化。结果表明:苷肽注射液单独应用及其与疫苗联合应用,在注射后2 d就可以显著提高IFN-γ水平,并且可以维持15 d;注射苷肽注射液联合犬五联疫苗组和单独注射苷肽注射液组IFN-γ含量显著高于单独注射犬五联疫苗组(P<0.05),说明苷肽注射液可以诱导γ-干扰素的产生,从而发挥其免疫增强的作用。     

浅谈新生仔犬的饲养管理要点

新生仔犬的饲养管理是繁育工作的重要环节,春季是繁殖仔犬最佳时期,同时也是细菌微生物、病毒等繁殖和传播最快的季节,此季节新生仔犬也最易患上传染病。在现今肉犬养殖中,由于新生仔犬的饲养管理不当造成成活率下降,生长发育迟缓等现象时有发生。因此应重视新生仔犬的饲养管理,争取提高繁育成效。     

哺乳仔犬的养育及异常问题解决方法

在犬的一生中,哺乳仔犬生长发育最强烈、可塑性最大,最有利于定向培育,同时也对饲养管理的要求最高。因此,只有根据哺乳仔犬的生长发育规律及生理特点,采取相应的饲养管理措施,才能有效地提高哺乳仔犬的数量和质量。笔者依据哺乳仔犬的主要生理特点,对实际工作中如何降低仔犬死亡率,提高仔犬质量,特别是对仔犬的养育以及一些异常问题的解决方法进行初步总结。     

提高仔犬成活率的综合措施

1精心饲养母犬母犬在妊娠62天左右分娩,分娩前的30天左右应加强饲养,给予新鲜、优质、适口性好、营养全面的多样化动物性和植物性饲料,满足其营养需要。母犬的泌乳量直接影响到仔犬的生长发育,因为母犬的乳汁量与仔犬的增重及体质强弱是成正比     

犬α-干扰素原核表达及其抗病毒活性检测

干扰素(interferon,IFN)是一类能诱导动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白的细胞因子,具有阻止病毒繁殖、调节机体免疫反应的生物学功能,是当今应用前景最为广阔的重要生物制剂之一[1-2]。干扰素按其细胞来源可分为α、β及γ3种类型,其中α-干扰素(IFN-α)是由能在脊椎动物各种类型的细胞中增殖