鸢尾黄素作为MgrA抑制剂对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的治疗作用

本研究旨在从中药小分子库中筛选出金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）转录调控因子MgrA的单体抑制剂,并探讨其对金黄色葡萄球菌主要毒力因子的影响及对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的治疗作用。使用荧光各向异性分析法进行抑制剂的筛选,通过实时荧光定量PCR、溶血试验及纤维蛋白原黏附试验考察药物对MrgA调控的相关毒力基因转录表达及对溶血和黏附的抑制作用,采用热稳定迁移试验对其抑制机制进行初步探讨,最后通过建立小鼠肺炎模型评估鸢尾黄素对金黄色葡萄球菌诱导的小鼠肺炎的治疗作用。结果显示,鸢尾黄素作为MgrA的抑制剂,在不影响细菌生长的低浓度下（IC₅₀=20.35 μg/mL）就能显著抑制MgrA的活性（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,鸢尾黄素可显著降低fnba基因的转录水平（P<0.05）,极显著降低hla和RNAⅢ基因的转录水平（P<0.01）,同时极显著上调ebh、srap和spa基因的转录水平（P<0.01）;溶血试验显示,8 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的溶血作用（P<0.01）;纤维蛋白原黏附试验证实32 μg/mL鸢尾黄素可极显著抑制USA300菌株的黏附活性（P<0.01）;热稳定迁移试验揭示了鸢尾黄素是通过与MgrA结合从而抑制其活性。小鼠肺炎试验结果显示,鸢尾黄素能极显著提高金黄色葡萄球菌感染小鼠的存活率（P<0.01）,极显著减少其肺脏载菌量（P<0.01）,并减轻小鼠肺脏组织的病理损伤和炎症反应。以上结果表明,鸢尾黄素能通过抑制转录调控因子MgrA的活性对金黄色葡萄球菌感染引起的小鼠肺炎起到治疗作用,可作为开发治疗金黄色葡萄球菌感染的先导化合物,并为以毒力因子MgrA为靶标的药物研发提供了理论依据。     

螺旋藻抗炎和免疫增强作用的研究

试验旨在探讨螺旋藻抗炎作用及其对机体免疫功能的影响。试验通过二甲苯致小鼠耳肿胀,构建小鼠体内炎症模型,以地塞米松为阳性对照药物,以小鼠耳肿胀为观察指标,探讨螺旋藻的体内抗炎作用;通过环磷酰胺构建小鼠免疫抑制模型,以不同剂量螺旋藻处理后测定免疫抑制小鼠及正常小鼠的脏器指数、血清白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）水平,同时结合脾脏及胸腺病理组织学观察,探讨螺旋藻对免疫抑制小鼠及正常小鼠免疫功能的影响。结果表明,在螺旋藻对小鼠体内抗炎作用影响的试验中,0.3%螺旋藻灌胃对小鼠耳肿胀的抑制率极显著高于地塞米松对照组和其他螺旋藻处理组（P<0.01）,且螺旋藻对各试验组小鼠的脏器指数无不良影响,差异不显著（P>0.05）;在螺旋藻对小鼠免疫功能影响试验中,与空白对照组相比,环磷酰胺阳性对照组脾脏指数和胸腺指数极显著下降（P<0.01）;肝脏指数极显著上升（P<0.01）,其它各剂量螺旋藻处理组小鼠胸腺指数跟空白对照组相比差异不显著（P>0.05）,各组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平差异不显著（P>0.05）;通过病理组织学观察发现,环磷酰胺阳性对照组小鼠的脾小体萎缩、胸腺小体减少、淋巴细胞及网状细胞变性坏死,而各剂量螺旋藻处理组的脾小体和胸腺小体结构清晰完整、淋巴细胞增多。综上,螺旋藻能降低地塞米松和环磷酰胺对小鼠的免疫抑制,并且能修复小鼠脾脏和胸腺损伤,说明其在抗炎和缓解免疫抑制方面具有一定的作用。     

IL-17介导山羊传染性胸膜肺炎小鼠模型肺部炎症反应研究

为阐明IL-17等相关炎性因子在山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP)中的作用,将20只6周龄~8周龄SPF雌性Balb/c小鼠随机分成试验组和对照组,每组10只,建立CCPP小鼠模型,按时间点处死小鼠后采集血液和肺组织,进行组织病理学分析和肺部山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)载量检测鉴定模型。应用real-time PCR检测肺部IL-17及其相关细胞因子、趋化因子及其受体的mRNA水平,应用ELISA检测血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平,应用流式细胞术检测肺组织中中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。结果显示,试验组小鼠精神状态不佳,肺部病理损伤严重,Mccp载量为5.9×10^4 copies/μL,与对照组相比有极显著差异(P<0.001);与对照组小鼠相比,试验组小鼠肺组织IL-17相关炎性因子mRNA表达升高,血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平显著升高(P<0.001,P<0.01),肺部中性粒细胞和巨噬细胞数量极显著增加(P<0.01,P<0.001)。说明成功构建了CCPP小鼠模型,在Mccp诱导小鼠肺部炎症早期,IL-17参与肺部炎症反应。     

肿节风三清颗粒抗炎和抗哮喘作用

本研究旨在考察肿节风三清颗粒的抗炎和平喘作用。MTT法检测200、400、800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒对RAW264.7细胞活力的影响;用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,并采用400、800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒处理,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;用卵清蛋白（OVA）致敏、激发雌性BALB/c小鼠建立哮喘模型,并采用100、200、300 mg/kg肿节风三清颗粒处理,末次激发24 h后,测定哮喘小鼠气道高反应性（AHR）,取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞分类计数,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13浓度及血清中OVA-IgE水平。结果显示,200~16 00 μg/mL肿节风三清颗粒对RAW 264.7细胞增殖有显著或极显著促进作用（P<0.05;P<0.01）,与LPS组相比,800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒能够极显著降低TNF-α和IL-6水平（P<0.01）;与哮喘模型组相比,肿节风三清颗粒明显改善了气道高反应性,明显减少了BALF中的炎症细胞数目及IL-4、IL-5和IL-13浓度,极显著降低了血清中OVA-IgE水平（P<0.01）。综上所述,肿节风三清颗粒可通过抑制炎症因子的表达对炎症细胞模型和哮喘小鼠模型起到良好的保护作用。     

五倍子颗粒止泻与抗炎镇痛作用研究

为评估五倍子颗粒（Galla Chinensis granules,GCG）止泻、抗炎和镇痛的药效作用，通过番泻叶诱导小鼠腹泻模型，二甲苯诱导耳肿胀及角叉菜胶诱导足肿胀急性炎症模型，以及小鼠疼痛模型（热板法和扭体法）的构建，观察GCG对小鼠腹泻、胃肠运动、炎症和痛觉反应的影响，并通过病理组织学及血清炎性细胞因子检测，进一步探究GCG的药效作用。结果表明，与模型组比较，GCG治疗组（50 mg/kg BW、100 mg/kg BW和200 mg/kg BW）对小鼠腹泻具有显著抑制作用（P<0.05），可极显著降低小鼠胃肠蠕动（P<0.01），且对小鼠耳肿胀及足肿胀具有显著抑制作用（P<0.05），极显著抑制醋酸引起的腹部收缩（P<0.01），其中，GCG治疗组（200 mg/kg BW和100 mg/kg BW）分别在给药后0.5 h和1.0 h开始延长小鼠热板试验中热刺激引起的疼痛反应时间（P<0.05），而GCG治疗组（50 mg/kg BW）只在4.0 h延长小鼠疼痛反应时间（P<0.05）。其次，GCG治疗组均可不同程度改善角叉菜胶引起的足病理...     

小鼠急性肺损伤造模条件的探究

为探究构建急性肺损伤模型的条件,本试验选用健康昆明小鼠,经腹腔注射递增剂量脂多糖（LPS）（0、2、4、6、8、10 mg/kg）,观察不同条件下小鼠呼吸频率、死亡率、肺脏干湿重比值及组织结构变化,检测炎症因子IL-10、TNF-α、IL-1β及IFN-γ在不同程度肺损伤中的表达量变化。结果显示,4 mg/kg LPS组肺脏干湿重比值显著高于对照组（P<0.05）;6、8和10 m/kg LPS组肺脏干湿重比值极显著高于对照组（P<0.01）。病理切片分析显示,6 mg/kg LPS组小鼠肺脏出现充血,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡隔增厚,出现少量中性粒细胞浸润;8、10 mg/kg LPS组小鼠肺脏充血明显,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡明显隔增厚,出现中性粒细胞浸润;与对照组相比,6、8、10 mg/kg LPS组肺组织中胶原纤维大量增多,且多出现在肺气管周围,10 mg/kg LPS组现象最明显。炎症因子检测分析结果显示,与对照组相比,2、4、6、8、10 mg/kg LPS组炎症因子均极显著增加（P<0.01）。结合病理组织切片及相关检测指标表明,昆明小鼠腹腔注射8 mg/kg LPS并作用12 h,可成功构建急性肺损伤模型。     

大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织细胞因子表达及损伤程度的影响

本试验旨在研究体外感染金黄色葡萄球菌与大肠杆菌对奶牛子宫内膜组织中细胞因子白介素-6（IL-6）、IL-1β和IL-8的表达及损伤程度的影响。以体外培养的奶牛子宫内膜组织作为研究对象,采用1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌与金黄色葡萄球菌对奶牛子宫内膜组织进行体外感染,通过实时荧光定量PCR和ELISA方法检测两种细菌刺激后奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白的表达量,并用HE染色法观察两种细菌感染后奶牛子宫内膜组织病理学切片。结果显示,1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL大肠杆菌体外感染后,奶牛子宫内膜组织中IL-6、IL-1β和IL-8 mRNA表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）;金黄色葡萄球菌感染浓度为1×10⁵、1×10⁶ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量极显著高于空白对照组（P<0.01）,感染浓度为1×10⁷ CFU/mL时,IL-6、IL-1β mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,感染浓度为1×10⁶ CFU/mL时,IL-8 mRNA表达量显著高于空白对照组（P<0.05）,其他感染浓度均与空白对照组无显著差异（P>0.05）。奶牛子宫内膜组织感染1×10⁵~1×10⁹ CFU/mL金黄色葡萄球菌和大肠杆菌时,IL-6、IL-1β及IL-8蛋白表达量均极显著高于空白对照组（P<0.01）。相同浓度的大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织后,IL-6、IL-1β及IL-8 mRNA与蛋白表达量均极显著高于金黄色葡萄球菌感染组（P<0.01）。HE切片染色结果显示,大肠杆菌感染后仍有部分上皮细胞保留,而金黄色葡萄球菌感染后上皮细胞全部脱落。本试验结果表明,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织后,引起的炎症反应不同。大肠杆菌感染后,促炎性细胞因子被显著上调,而金黄色葡萄球菌感染后破坏子宫内膜上皮细胞程度更加严重。     

黄芪多糖对力竭游泳小鼠生理生化指标的影响

用不同剂量的黄芪多糖给小鼠灌胃（0.4、0.2、0.1 mg/ml）,力竭游泳后测定其13项血液生理指标,肝脏和心脏的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH Px）、过氧化氢酶(CAT)及血清谷丙转氨酶（AST）、谷草转氨酶（ALT）、肌酸激酶（CK）的活性。结果表明,高剂量组可极显著延长小鼠游泳至力竭的时间（P<0.01）,中剂量组可显著延长小鼠游泳至力竭的时间（P<0.05）;高剂量组白细胞总数（WBC）、粒细胞百分数（Gran%）极显著低于对照组（P<0.01）,淋巴细胞百分数（Lym%）、中值细胞百分数（Mid%）、粒细胞数（Gran）极显著高于对照组（P<0.01）,高、中剂量组血红蛋白浓度（HGB）、红细胞压积（HCT）极显著高于对照组（P<0.01）;中剂量组淋巴细胞百分数（Lym%）、中值细胞百分数（Mid%）显著高于对照组（P<0.05）;高剂量组极显著提高力竭小鼠肝、心组织SOD、CAT的活性,极显著降低心、肝组织GSH Px（P<0.01）;中剂量组显著提高力竭小鼠肝、心组织SOD的活性（P<0.05）;高、中剂量组血清AST、CK的活性极显著降低（P<0.01）。由此可见,黄芪多糖具有明显的抗氧化损伤功效。     

金黄色葡萄球菌细胞壁变化与β-内酰胺类抗生素耐药的关系

旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016-2018年间，采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样，通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法，分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌；利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性，了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况；通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度，并结合透射电镜进行形态观察，以确定增厚及发生原因。结果显示，分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌，其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）。药敏试验结果显示，金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率，其中氨苄西林为79.69%，青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多；其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明，4种相关基因的转录丰度均极显著上调（P<0.001或P<0.01）。透射电镜观察发现，甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）JY21菌株的细胞壁在64和128 μg·mL^-1的青霉素浓度下，较对照组均极显著增厚（P<0.001），并可见细胞壁表面粗糙，有结节状凸起；但药物浓度从64 μg·mL^-1升高至128 μg·mL^-1细胞壁不再显著增厚（P>0.05）。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚（P>0.05）。综上所述，本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素，存在细胞壁增厚的耐药机制；增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比，细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。     

螺旋藻多糖对猪伪狂犬病毒感染小鼠血清中氧化应激相关因子的调节作用

试验旨在探究螺旋藻多糖（Spirulina platensis polysaccharide,PSP）的抗氧化作用,首先经过酶解水提法得到螺旋藻多糖,然后经过DEAE-52纤维素层析柱和Sephacryl S-200凝胶层析柱分离纯化后得到螺旋藻多糖组分1(PSP-1)。将小鼠分为3个不同剂量药物组（200、100 mg/kg·BW和50 mg/kg·BW）、猪伪狂犬病毒（PRV）组和对照组共5个组别（A、B、C、D、E组）进行试验,采用试剂盒法测定小鼠血清中一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和丙二醛（MDA）的分泌水平以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、髓过氧化物酶（MPO）、黄嘌呤氧化酶（XOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果表明：在使用了不同剂量的药物之后,血清中NO、MDA水平和MPO活性均极显著降低（P<0.01）;iNOS、XOD活性在A组和B组均极显著降低（P<0.01）;同时,血清中SOD活性均极显著升高（P<0.01）;GSH-Px活性和CAT活性在A组和B组极显著升高（P<0.01）,在C组显著升...     

赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素及蛋白A表达的影响

探讨了赤芍水提物在体外对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A分泌及mRNA转录的影响。试验中采用微量倍比稀释法测定赤芍对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最小抑菌浓度(MIC);采用Western blot和实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度下赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A在mRNA转录和毒素蛋白分泌表达的影响。结果表明,赤芍水提物对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC值为6.3mg/mL;在亚抑菌浓度下,赤芍水提物可以明显抑制肠毒素A、B及蛋白A在蛋白水平和转录水平的表达,且呈现明显的浓度依赖性。     

赤芍水提物与抗菌药联合对耐药大肠杆菌抑菌作用的研究

为了探究赤芍水提物与抗菌药联合对耐药大肠杆菌的体外抑菌作用,采用微量肉汤稀释法与微量棋盘法来测定各抗菌药与赤芍水提物的最低抑菌浓度(MIC)及二者联合作用后的分级抑菌浓度指数(FICI)。结果显示赤芍水提物与头孢曲松钠、阿莫西林、环丙沙星、诺氟沙星、左旋氧氟沙星、磷霉素、痢菌净、克林沙星、磺胺间甲氧嘧啶、加替沙星、阿米卡星、头孢他啶、林可霉素、头孢噻呋钠、氟苯尼考、阿奇霉素、头孢噻肟、利福平联合作用后的FICI分别为0.27、2.50、1.02、1.01、3.00、0.28、1.02、1.02、1.02、2.02、1.02、0.75、0.56、0.75、0.50、3.00、0.75、0.38。结果表明赤芍水提物与头孢曲松钠、磷霉素、氟苯尼考、利福平联合作用时有协同作用;与林可霉素、头孢噻呋钠、头孢噻肟、头孢他啶联合作用时有相加作用;与阿莫西林、左旋氧氟沙星、加替沙星、阿奇霉素联合作用时有颉颃作用;与环丙沙星、诺氟沙星、痢菌净、克林沙星、磺胺间甲氧嘧啶、阿米卡星联合作用时表现为无关作用。     

甘草反大戟的试验研究

为观察中药十八反中甘草与大戟同用后的毒副反应,将试验动物分为甘草组、大戟组、甘草与大戟合煎组、甘草与大戟合剂组及对照组5组,分别灌服等量甘草、大戟、甘草与大戟合煎剂、甘草与大戟合剂和生理盐水,连续3d,观察记录动物的自发活动及死亡数。72h后处死取血,测定血清谷丙转氨酶含量,并做病理切片,进行血常规、肝体比、肾体比的测定。结果表明,单纯大戟对动物肝功能有一定影响,配伍甘草后对肝功能影响加重,但对肾功能则无明显影响。对肝脏、肾脏组织形态有一定影响,但停药后可以恢复。     

黄芪、板蓝根对猪细小病毒体外抑制作用研究

为研究中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物的效果及初步机理，利用细胞病变（CPE）抑制实验测定黄芪、板蓝根单独使用及1：1联合使用在PK-15单层细胞上对猪细小病毒（PPV）的抑制作用。结果表明：板蓝根单独使用时体外对PPV有明显的抑制作用，其对PPV的最小直接杀灭浓度为0．62mg／mL，最小阻断浓度为0．31mg／mL；而黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用。板蓝根、黄芪1：1联合使用时对PPV的抑制作用显著增强，其对PPV的最小直接杀灭浓度提高为0．31mg／mL，最小阻断浓度提高为0．075mg／mL。     

赤芍黄柏制剂对致病性大肠杆菌人工感染雏鸡的肠道菌群多样性的影响

为了解不同浓度赤芍黄柏制剂对致病性大肠杆菌（Escherichia coli）感染的雏鸡肠道菌群多样性的影响,本研究对240只15日龄健康雏鸡随机编号后分为空白对照组（CON）、感染组（BC）、低剂量治疗组（TL）和高剂量治疗组（TH）4个组,除对照组外,其余各组（BC、TL、TH）均使用致病性大肠杆菌进行感染,感染0.5 d后,分别用不同浓度的赤芍黄柏制剂对TL组（4 mL·L^-1灭菌水）和TH组（12 mL·L^-1灭菌水）进行饮水治疗,治疗5 d后统计各组发病率及死亡率,采用高通量测序技术检测雏鸡十二指肠肠道菌群多样性。结果显示,与感染组相比,TH组显著降低了雏鸡的发病率和死亡率（P<0.05）。菌群分析显示,赤芍黄柏制剂处理改变了雏鸡肠道菌群多样性组成,提高了乳杆菌属的丰度。CON组优势菌群以厚壁菌门、肠球菌属为主;BC组肠道优势菌群主要为厚壁菌门、变形菌门、肠球菌属、大肠杆菌属及葡萄球菌属;TL组优势菌群以厚壁菌门、乳杆菌属、肠球菌属及葡萄球菌属为主;TH组优势菌群以厚壁菌门、乳杆菌属为主。热图分析显示,乳杆菌属与发病率和死亡率呈负相关,大肠杆菌属与发病率和死亡率呈正相关（P<0.05）。综上,大肠杆菌感染及赤芍黄柏制剂治疗改变了雏鸡肠道菌群多样性及组成,而这种肠道菌群的变化可能对雏鸡腹泻发病及抗病力产生重要影响。     

白头翁水溶性多糖提取工艺的研究

为了探究白头翁水溶性多糖的提取工艺,本研究采用单因素试验和L9（34）正交试验,考察料液比、提取时间、提取次数和提取温度对水溶性多糖提取率的影响,优选白头翁水溶性多糖的最佳提取工艺条件。结果表明,白头翁水溶性多糖最佳提取工艺条件为：料液比为1：17,100℃提取6 h,提取6次,白头翁水溶性多糖含量为5.07%。为白头翁水溶性多糖的进一步研究奠定了基础。     

中药黄芪在家禽生产中的应用研究

文章概述了中药免疫增强剂黄芪在家禽生产中的应用现状,并对其作用机制进行阐述,为进一步深入研究指明方向。     

白头翁水溶性物质的提取工艺研究

为了探究白头翁水溶性物质的提取工艺,本研究采用单因素试验和L9（34）正交试验,考察料液比、提取时间、提取次数和提取温度对水溶性物质浸膏率的影响,从而优选白头翁水溶性物质的最佳提取工艺条件。结果表明,白头翁水溶性物质提取的最佳工艺条件：料液比为1：17,100℃提取6 h,提取6次,白头翁水溶性物质浸膏率为21.12%。本研究为白头翁水溶性多糖的研究奠定了基础。     

红外光谱技术对生地黄整体评价

为对中药材进行整体化学信息表征,针对中药化学成分的整体多样性,红外光谱特征具有化学信息整体全面性的特点,采用红外光谱技术结合HPLC对生地黄进行较为全面的整体分析,把生地黄生态、形态、化学及药学等特征和变化规律作了整体相关性讨论和量化分析,对生地黄整体质量评价具有重要意义。