柔嫩艾美耳球虫对盐酸氟乙基硫胺素耐药性的诱导

为评估盐酸氟乙基硫胺素产生抗药性的倾向,采用药物浓度递增法,在实验条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药性的诱导研究。每组动物用10只快大黄肉鸡,每只鸡接种1×105个孢子化卵囊,以50 mg/kg盐酸氨丙啉和盐酸氟乙基硫胺素为起始诱导浓度连续传代,以病变记分、存活率和卵囊数三项指标综合判定耐药性。经过10次传代,盐酸氨丙啉对敏感虫株的ACI为192.6,而对耐药虫株的ACI为109.1;经过12次传代,盐酸氟乙基硫胺素对敏感虫株的ACI为197.5,而对耐药虫株的ACI为110.6,对盐酸氨丙啉耐药虫株的ACI为163.2;结果表明成功地诱导出对盐酸氨丙啉、盐酸氟乙基硫胺素完全耐药的虫株。盐酸氟乙基硫胺素产生耐药速度慢于盐酸氨丙啉,与盐酸氨丙啉有部分交叉耐药性。     

毒害艾美耳球虫卵囊先孢子化后贮存和先贮存后孢子化对其致病力的影响

新鲜收集的毒害艾美耳(Eimeria necatrix)球虫卵囊，一部分未孢子化即贮存在4℃冰箱，另一部分在28℃恒温水浴根荡孢子化48小时后再贮存在4DC冰箱。2个月后将先贮存的未孢子化卵囊在上述同等条件下进行孢子化48小时，然后两部分卵囊作致病力比较试验。结果表明，先贮存后孢子化卵囊的孢子化率和致病力都明显下降，先孢子化再贮存的卵囊存放2个月后其致病力各项指标也略有下降。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106pfu/mL,插入片段约100~3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。     

和缓艾美耳球虫致病性研究

对新分离的和缓艾美耳球虫进行了致病性研究.结果表明,21日龄雏鸡感染1000个和5000个孢子化卵囊未见异常表现,肠道未发现肉眼可见的病理变化.20 000个卵囊感染可引起轻微病变,100 000个和500 000个卵囊感染能产生较明显的致病作用,与对照组相比增重分别为70.3%和56.8%.根据肠道病变记分标准,肠道有明显可见的病变,所有试验鸡均未出现死亡.     

鸡巨型艾美耳球虫卵囊呼吸作用的研究

采用纯种巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)卵囊,人工感染3周龄的石歧杂雏鸡,及时收集卵囊,以0.1N硫酸溶液悬浮,用微量呼吸检压仪检测卵囊呼吸作用。试验表明:孢子化过程中最初十小时内该球虫卵囊的耗氧量为3.59μl/小时/10~6个卵囊。耗氧量的变化与其细胞分裂过程相对应,耗氧量在三次核分裂前夕降低,但在分裂期升高。最高耗氧量出现于子孢子形成期,达18.91μl/小时/10~6卵囊。孢子化后卵囊的呼吸作用较缓慢,耗氧量为0.85μl/小时/10~6个卵囊。完成孢子化所需时间为26小时。     

三种抗球虫药对鸡球虫病的对比疗效

为评价药物阿德呋啉对艾美耳球虫的治疗效果,本试验设70 mg/kg阿德呋啉组、121mg/kg莫能菌素组和125 mg/kg尼卡巴嗪组3个药物试验组,以及阳性和阴性对照组。除阴性对照组外,其余全部试验鸡每只接种球虫孢子化卵囊5.2万个,根据成活率、相对增重率、卵囊值、病变值计算抗球虫指数(Anticoccidial Index,ACI),进而判定药物的疗效。结果显示,121 mg/kg莫能菌素组ACI为115.6,在120以下,不宜作抗球虫药;125 mg/kg尼卡巴嗪组ACI为137.2,在120～160之间,抗球虫效力低;70 mg/kg阿德呋啉组ACI为192.9,为高效抗球虫药。     

3种兔对斯氏艾美耳球虫成都分离株的耐受力比较

为初步探讨3种兔对斯氏艾美耳球虫的耐受力差异及该球虫的毒力,本文分离得到成都地区的斯氏艾美耳球虫,用两种不同剂量的该球虫对新西兰白兔、比利时兔、福建黄兔进行致病性试验。结果发现:感染1×105个孢子化卵囊时,3种兔的死亡率分别为90%、80%和80%;平均增重差异不显著;肝脏病变计分差异不显著;平均死亡时间为感染后的18.67天、20.88天和21天。当感染5×104个孢子化卵囊时,3种兔的死亡率分别为80%、80%和70%;平均增重、肝脏病变计分和肝指数差异不显著;平均死亡时间为感染后的18.63天、20天和21天。结果表明:3个品种兔在感染相同剂量该球虫后,死亡率和死亡时间有差异,福建黄兔死亡时间偏后,死亡率相对较低,但3者在增重和病变计分上并无显著差异;斯氏艾美耳球虫成都分离株的致病力强,5×104个孢子化卵囊可造成幼兔至少70%的死亡。     

柔嫩艾美耳球虫低温保存方法的研究

在对球虫的研究、疫苗生产和球虫病的诊断中离不开球虫的保存和保种,目前常规的保存方法是将球虫的孢子化卵囊保存在2.5%重铬酸钾中,置于4℃,一般保存期不超过1年.1年内必须进行鸡体传代,以保持球虫活力,这不仅浪费大量的人力和物力,而且增加了虫种被污染的机会.     

和缓艾美耳球虫石河子株生物学特性分析

对和缓艾美耳球虫石河子株的部分生物学特性进行了研究。结果表明:该虫株卵囊大小为18.4～20.5μm,卵囊指数为1.11,最小潜在期是93 h,最短孢子化时间为16 h,粪便内卵囊的最短孢子化时间为17 h,卵囊产量高峰是感染后第5天。该研究为进一步利用该球虫株提供了参考。     

基于Gateway技术的E.stiedai孢子化卵囊cDNA表达文库构建

为深入研究斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的分子生物学特征,揭示其与宿主细胞的互作及免疫机理,以E.stiedai阿拉尔分离株的新鲜孢子化卵囊为材料,采用Gateway技术分别构建了E.stiedai孢子化卵囊cDNA原核和慢病毒表达文库,并测定了文库质量。分析表明,表达文库平均插入片段大小为1.5kb,重组率为100%,慢病毒表达文库和原核表达文库容量分别为3.5×106,3.9×106 CFU/mL,符合高质量文库的标准,可用于进一步开展相关基因的克隆及功能研究,为研究E.stiedai的入侵及免疫机制奠定基础。     

阿德呋啉水溶剂治疗鸡球虫病的试验研究

为了观察阿德呋啉水溶剂治疗艾美耳球虫的效果,试验设5个药物试验组、阳性及阴性对照组。70只13日龄的雏鸡随机分为7组,其中药物试验组鸡只开始给药。给药24 h后,除阴性对照组外,其余组鸡只均接种混合的球虫孢子化卵囊(5万/羽),试验后根据抗球虫指数(ACI)判断抗球虫药的疗效。结果显示所有给药组中65 mg/kg阿德呋啉水溶剂组ACI为185.54,抗球虫效果最好,为高效抗球虫药;其余阿德呋啉试验组ACI均低于180,浓度过高抗球虫效果差;妥曲珠利试验组ACI低于120,为低效抗球虫药。试验得到了最佳的使用浓度,为球虫病的防治提供了方法。     

槟榔提取物对球虫感染鸡血液指标及抗球虫效果的影响

本试验旨在研究槟榔提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标及抗球虫效果的影响。选取270只1日龄文昌鸡公鸡,随机分为6个组,分别为空白对照组、阴性对照组、阳性对照组及槟榔1、2、3组,其中,3个对照组均饲喂雏鸡基础日粮,槟榔1、2、3组分别饲喂在基础日粮中添加200、400、600 mg/kg槟榔提取物粉剂的试验日粮。15日龄时,随机从每组中抽取30只体重相近的鸡,除空白对照组外,各组每只试验鸡经口灌服1 mL含1×10⁵个球虫孢子化卵囊的生理盐水混合液。结果表明:①感染后第6、9天,与空白对照组、阳性对照组相比,槟榔1、2、3组和阴性对照组血液中红细胞数、血红蛋白浓度、红细胞比容降低;②感染后第3、9天,与空白对照组相比,阳性对照组和槟榔1组血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白含量升高;感染后第9天,槟榔2、3组血清中谷丙转氨酶含量较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组血清中尿酸含量较阴性对照组、阳性对照组及槟榔2、3组显著降低(P<0.05);感染后第6天,阴性对照组血清中Na⁺、Cl^-浓度较空白对照组、阳性对照组显著降低(P<0.05),槟榔1组Na⁺、Cl^-浓度与3个对照组间差异均不显著(P>0.05);③槟榔1、2、3组的抗球虫指数分别为128.48、126.53和141.11。综上所述,日粮中添加200、400和600 mg/kg槟榔提取物粉剂对于球虫感染鸡抗球虫药效中等;200、400 mg/kg槟榔提取物粉剂可维持感染球虫鸡血清中Na⁺、Cl^-浓度的稳定,降低肝脏损伤。     

沙咪珠利预防鸡球虫病的药效试验研究

为了解一种新型三嗪类抗球虫化合物沙咪珠利在临床预防鸡球虫病的合理使用剂量和对鸡球虫病常见4种病原的有效性和敏感性,采用抗鸡球虫笼养试验模型和抗球虫活性指数、盲肠病变计分、相对卵囊产量、增重等指标评价沙咪珠利的药效。结果显示,沙咪珠利饲料中添加9 mg/kg以上时,对柔嫩艾美耳球虫的抗球虫活性稳定在高效水平,以10 mg/kg作为临床使用推荐剂量是相对安全和合理的。沙咪珠利饲料中添加10 mg/kg,预防鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella),毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)、堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)和巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)引起的球虫病的抗球虫指数分别为197、188、194和190,抗球虫活性达高效水平,沙咪珠利具有预防4种常见致病虫株引发的球虫病的疗效,其作用机理等有待进一步的研究。     

抗鸡球虫病的三嗪类新化合物纳川珠利的药效试验

采用抗鸡柔嫩艾美尔球虫实验室笼养试验模型,对新合成的三嗪化合物纳川珠利进行了2批次的抗球虫活性试验。结果显示,纳川珠利添加剂量5、10和30 mg/kg时,抗球虫指数均大于180。添加剂量1和3 mg/kg时,见有少量血便和盲肠病变,抗球虫活性介于中效和高效之间。表明纳川珠利是一种高效安全的新型三嗪类抗球虫化合物,推荐使用剂量以3~5 mg/kg为宜,有望开发成为一种新的抗球虫药物。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

抗球虫中药方剂对柔嫩艾美尔球虫感染鸡的疗效研究

为研究中药方剂对鸡感染柔嫩艾美尔球虫的疗效,试验将80只AA肉鸡随机分为4组,除空白对照外,其余各组经口感染混合孢子化球虫卵囊;第3组按5%剂量拌料添加中药,第4组按0.06%的比例拌料添加磺胺氯吡嗪钠。试验中药方剂抗球虫指数(ACI)为167.4,属中效抗球虫药。结果表明,该中药方剂可以用于鸡球虫病的防治。