茶树对水分胁迫的生理生化反应

以耐旱性不同的４个无性系茶树品种为材料，测定其强度干旱胁迫过程中叶片生理生化的变化，结果表明：耐旱性强的茶树，在强度干旱的胁迫下，能维持相对较高的叶片含水量及蒸腾速率和气孔导度。水分胁迫过程中有一临界强度，在这一范围内。耐旱性强的茶树，叶片过氧化物酶活性相对较低，超过这一范围，则维持相对较高的过氧化物酶活性，叶片脯氨酸含量在水分胁迫过程中迅速累积，但其变化与茶树耐旱性无明确关系，耐旱茶树具有相对较     

水分胁迫对青冈叶片活性氧的伤害

利用 PEG根际模拟水分胁迫法 ,对青冈苗木进行了不同程度的水分胁迫处理 ,研究了青冈苗木在各种胁迫条件下相对含水量、质膜透性及活性氧代谢的变化规律 .结果表明 ,相对含水量、质膜透性及 MDA含量随胁迫进程呈持续上升趋势 .而活性氧清除酶类 SOD、POD、CAT活性在不同程度水分胁迫前期均呈上升趋势 ,并在保持一段时间的稳定后 ,出现下降趋势 .同时发现 ,适度水分胁迫在一段时间内可使各清除酶活性呈上升趋势 .低度水分胁迫 ,各种酶活性上升较慢 ;但胁迫强度过高 ,反而会导致酶活性的降低 .水分胁迫期间 ,活性氧代谢的这些变化规律 ,是细胞内氧化自由基和抗氧化清除酶系统维持动态平衡的外在反映     

水分胁迫对茶树光合作用的影响

以铁观音茶树品种为材料,测定其干旱胁迫过程中叶片光合作用的和脱落酸含量的变化,结果表明：离体叶片,轻度水分胁迫,气孔导率下降是净光合速率,蒸腾速率下降的主要原因：严重水分胁迫,净光合速度下降是由叶肉细胞光合能力下降引起的。土壤自然干旱过程中,茶树叶片的净光合速率,气孔导度和蒸腾速率随着土壤水势下降而逐渐下降,ＡＢＡ含量逐渐提高;在－３８ｋＰａ开始水分胁迫,临时性萎蔫点在－５０ｋＰａ,永久性萎蔫点在     

氯胁迫对幼龄茶树叶绿素含量及抗氧化系统的影响

为探讨氯胁迫对茶树的伤害机制,为幼龄茶园合理施用氯肥提供科学的理论依据,以1年生龙井43茶苗为材料,采用水培法研究了不同浓度氯离子对茶树叶片叶绿素含量、抗氧化系统的影响。结果表明：随着氯离子浓度的升高,叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量均显著降低,在氯浓度为100 mmol/L时,分别比CK（0 mmol/L）下降了36.2％、22.7％、33.1％;SOD、POD活性均表现为先升高后降低,在氯离子浓度为40 mmol/L时达到最大值,比 CK 分别升高10.8％和9.2％;CAT活性持续下降,最大降幅为45.4％;脯氨酸含量、过氧化氢含量及丙二醛含量均显著升高。这说明高浓度氯离子对细胞质膜系统及细胞器结构和功能产生了破坏,而在低浓度氯离子（20 mmol/L）胁迫下MDA含量与CK差异不显著,说明低浓度氯未对茶树造成伤害。因此,对于幼龄茶园冲施氯肥以氯离子浓度不超过20 mmol/L为宜。     

植物水分胁迫与活性氧保护酶研究进展

水分胁迫对植物活性氧酶促保护系统有着广泛的影响，不同的植物在不同的生育期其抗氧化胁迫的生理响应存在较大差异。介绍了该保护系统的主要组成及其在不同水分胁迫条件下的响应，并对今后进一步研究做出展望。     

水分胁迫与活性氧代谢

水分胁迫使植物细胞产生大量的活性氧，而植物体内的酶促和非酶促清除系统不能及时地将其清除，使活性氧的产生能力大于清除能力，从而使体内的活性氧代谢失调，对植物造成伤害。文中综述了水分胁迫下活性氧代谢：（1）水分胁迫会通过多条途径来增加活性氧自由基的产生，从而造成对植物的伤害；（2）活性氧的清除系统在活性氧自由基的清除中发挥着重要的作用，水分胁迫对各种保护酶的影响是不同的；（3）活性氧代谢与植物的抗旱能力有着密切的关系，它们可以作为抗旱性品种鉴定和选育的参考指标。文中还就活性氧代谢的进一步研究提出了建议。     

水分胁迫对玉米叶片活性氧清除酶类活性的影响

用培养于不同深度聚乙二醇溶液中的玉米幼苗叶片切段研究了水分胁迫对叶片内活性氧清除酶类活性的影响，结果表明，水分胁迫引起叶绿素和蛋白质含量的迅速下降及脯氨酸水平的增加；过氧化氢酶活性开始时随胁迫时间而增强，而后下降，进一步加强胁迫时过氧化氢酶受抑程度取决于胁迫强度；水分胁迫引起叶片增强，而后下降，进一步加强胁迫时过氧化氢酶受抑程度取决于胁迫强度；水分胁迫引起叶片中超氧化物歧化酶活性迅速增强；轻度水分     

水分胁迫对茶树光合作用的影响

以铁观音茶树品种为材料,测定其干旱胁迫过程中叶片光合作用和脱落酸（ＡＢＡ）含量的变化．结果表明：离体叶片,轻度水分胁迫,气孔导度下降是净光合速率、蒸腾速率下降的主要原因;严重水分胁迫,净光合速率下降是由叶肉细胞光合能力下降引起的．土壤自然干旱过程中,茶树叶片的净光合速率、气孔导度和蒸腾速率随着土壤水势下降而逐渐下降,ＡＢＡ含量逐渐提高;在－３８ｋＰａ开始水分胁迫,临时性萎蔫点在－５０ｋＰａ,永久性萎蔫点在－５８ｋＰａ;气孔导度与ＡＢＡ含量呈显著的负相关;复胁迫茶树经过抗旱锻炼后,其抗旱能力明显提高．     

土壤水分胁迫与水稻活性氧代谢

以杂交稻，粳稻，旱稻品种为材料，研究在水分胁迫条件下稻体内超氧化物歧化酶，过氧化氢酶，脂质过氧化的活性及叶绿素含量等变化。结果表明，不同类型水稻品种受水分胁迫后，超氧化物歧化酶，过氧化氢酶活性增强，脂质过氧化提高。     

低温胁迫下茶树叶片活性氧代谢及渗透调节物质含量的变化规律

为了研究茶树对低温胁迫的生理生化反应,揭示茶树适应逆境的生理机制及其与茶树抗寒性关系,本试验以扦插苗福鼎大白和实生苗鸠坑种的两年生枝条为试材,在不同低温胁迫时间下对茶树叶片中超氧阴离子(O2.-)的产生速率以及过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)、脯氨酸、可溶性蛋白和可溶性糖的含量进行了测定。结果表明,随着低温胁迫时间的延长,茶树叶片内O2.-产生速率呈现先增高后降低的趋势,H2O2、MDA含量显著升高,脯氨酸含量变化无明显规律;可溶性蛋白和可溶性糖的绝对含量的增加,减缓了细胞膜透性的增加。     

花粉管通道法对茶树进行dsTCS基因转化的初步研究

以祁门槠叶群体种茶树植株为受体材料,采用花粉管通道法将茶树咖啡碱合成酶dsRNA (dsTCS)注射到茶花子房中.试验共处理茶花500朵,收获T0种子43粒,加温催芽后出苗38棵,随机选取15棵处理后的茶株和5棵对照茶株,剪取相同部位幼叶,用HPLC测定其咖啡碱含量.检测结果为,处理后的15棵茶株,其平均咖啡碱含量均低于对照茶株,初步表明经花粉管通道法导入的dsTCS部分抑制了茶树体内咖啡碱的合成.     

茶树多酚氧化酶基因的SNP分析

选取有代表性的40个茶树品种(系)为材料,先采用PCR-SSCP-银染检测技术,对供试材料的多酚氧化酶(PPO)基因进行SSCP分析,对PPO基因作初步基因分型;根据分型分析结果,对每一类型选择典型品种的PPO基因作进一步的DNA序列分析,用DNASTAR Program进行单核苷酸多态性(SNP)搜寻.结果表明,茶树PPO基因存在丰富的SNP,其类型包括:转换(AG,CT)、颠换(AT,GC,G→T,A→C)与杂合子(C/T,A/G,G/T,A/T,A/C,G/C).在发现的37个SNPs中,有13个SNPs发生在核酸内切酶酶切位点,有10个错义SNPs位点导致氨基酸的改变.在PPO基因的保守序列区,出现SNP的频率较低.     

提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚,从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难,试用了多种方法都未能获得高质量的RNA.为此,作者借鉴多年生的草本植物RNA提取方法-CTAB法,并在此基础上进行了改进,首次提取茶苗嫩根中的总RNA.电泳检测显示,该方法提取的总RNA 28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮,紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1.93.用于RT-PCR反应,成功克隆了492 bp的谷氨酰胺合成酶基因片段.说明用该方法提取的RNA纯度和完整性好.试用该方法从营养成分丰富的茶籽胚中提取总RNA,效果同样很好.     

茶树的RAPD标记向SCAR标记转化的研究

SCAR标记是在RAPD技术的基础上发展起来的一种新型分子标记技术,相对其他分子标记,它具有开发成本低,稳定性高,单位点多态等特点,将为茶树分子育种开辟一条新的有效途径。通过将随机引物在不同茶树品种基因组DNA中扩增得到的特异性片段,经回收、克隆、测序后重新设计1对特异性引物,将RAPD标记成功转化成SCAR标记,提高了分子鉴定的稳定性。     

茶(Camellia sinensis)花粉及其蜂粮中花粉粒的显微结构

采用光学显微镜和扫描电镜观察茶蜂花粉及其不同酿制时间的蜂粮中花粉粒的外部形态和萌发沟,未发现花粉壁和花粉粒结构被破坏的迹象.通过体外模拟消化试验,采用光学显微镜和透射电镜观察,发现经模拟消化的蜂粮中花粉粒内含物外吐的数量比蜂花粉多,而且随着酿制时间的延长,其内含物外吐的花粉粒所占的比例增加.结果提示,同种粉源的蜂粮比蜂花粉更易于被消化.     

炭疽病对茶树叶片光合特性的影响

茶树炭疽病是一种严重危害茶叶产量和品质的重要病害,在我国各大茶区均广泛发生。以龙井43和中茶108两个茶树品种为材料,研究炭疽病对茶树叶片光合速率、Rubisco活性、光合相关基因表达和过氧化氢(H₂O₂)含量的影响。结果表明:未接种茶树炭疽病病原菌的龙井43和中茶108的叶片光合速率无显著差异;接种炭疽病病原菌后,龙井43和中茶108的叶片光合速率均随着接种时间延长而显著降低,接种6 d后,龙井43和中茶108的叶片光合速率分别降低了61.76%和42.04%,Rubisco最大羧化速率(V_cmax)分别降低了33.78%和20.22%,RuBP最大再生速率(J_max)分别降低了37.67%和20.83%,Rubisco活性也显著下降;接种茶树炭疽病病原菌后光合相关基因表达下调,龙井43和中茶108叶片中CsRbcL的表达量分别降低47.08%和36.36%,CsRbcS的表达量分别降低34.99%和23.90%。此外,接种炭疽病病原菌后,龙井43和中茶108叶片中H₂O₂含量分别提高174.91%和96.69%。以上结果表明,龙井43比中茶108对炭疽病更为敏感,推测茶树炭疽病发生后叶片光合速率和Rubisco活性的降低可能与叶片中H₂O₂的过量累积有关。     

茶树谷胱甘肽还原酶基因CsGRs的克隆与表达分析

【目的】克隆谷胱甘肽还原酶基因CsGRs,研究CsGRs在茶树抵御不同逆境胁迫中的作用。【方法】在茶树转录组数据库中搜索茶树CsGRs,根据获得的基因片段,设计反转录PCR（RT-PCR）引物和RACE-PCR特异引物,从茶树中克隆CsGRs的cDNA全长序列,并利用在线生物信息学软件对其进行分析。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析CsGRs在茶树不同组织间的表达差异及其在低温、干旱、高盐胁迫和ABA处理下的表达模式,利用分光光度计测定低温胁迫和干旱胁迫下叶片中还原型谷胱甘肽（GSH）的含量变化。【结果】RT-PCR克隆获得CsGR1的cDNA全长,其长度为1 827 bp,包含1 482 bp开放阅读框（ORF）,编码493个氨基酸;RACE扩增获得712 bp和1 624 bp的5′和3′末端序列,拼接并进行RT-PCR验证后得到CsGR2序列,全长2 282 bp,包含1 698 bp ORF,编码565个氨基酸;CsGR1和CsGR2的GenBank登录号分别为KF906411和KF418080。CsGR1和CsGR2编码的蛋白质分子量分别为53.9 kD和61.0 kD,无信号肽位点,均为非分泌性蛋白。亚细胞定位预测CsGR1主要定位在细胞质等亚细胞中,无叶绿体锚定信号肽位点;CsGR2中N-端的71个氨基酸残基具有叶绿体转运信号功能,主要定位在叶绿体上。序列相似性比较显示,CsGR1与其他植物中胞质GR的相似性均在80％以上,而与叶绿体GR的相似性低于60％;CsGR2与其他叶绿体GR的相似性70％以上,与胞质GR的相似性在50％左右。二者在核酸序列和氨基酸序列水平上分别有63.4％和49.9％的相似性,且蛋白质二级结构也具有较高的相似性。系统发育树显示,CsGR1与胞质GR聚为一类,而CsGR2与叶绿体GR聚在一起,且都与葡萄的亲缘关系最近。二者均含有氧化还原二硫键活性位点、谷胱甘肽结合位点以及NADPH结合的Arg保守位点等结构域。CsGR1为胞质GR,CsGR2为双向定位在叶绿体和线粒体上的叶绿体GR。CsGR1在花和根中表达量较高,在叶片和茎中表达量低;CsGR2在叶片和茎中的表达量比在根和花中的表达量高。在短时胁迫处理24 h过程中,成熟叶片在100 μmol•L-1 ABA处理后,CsGR1和CsGR2的表达均被抑制,且CsGR2的抑制作用较显著;在4℃低温胁迫下,CsGR1的表达被抑制,而CsGR2的表达随处理时间延长逐渐被诱导;250 mmol•L-1 NaCl盐胁迫抑制CsGRs的表达,但胁迫24 h时CsGR2的表达被诱导。10%（w/v）PEG胁迫处理茶树8 h,叶片中的CsGRs均被诱导表达,且在复水48 h后CsGR1的表达被显著上调;根中CsGRs的表达在处理和复水48 h过程中均被抑制。随低温胁迫时间延长,茶树叶片中的GSH含量逐渐升高;干旱胁迫也能促进GSH在叶片中的积累,在复水48 h后又恢复到处理前的水平。【结论】克隆了2个茶树CsGRs,2个基因对4℃低温、NaCl盐、10％PEG和ABA处理均具有响应。推测CsGRs在茶树抵御逆境胁迫中起作用。     

聚乙二醇胁迫对茶树幼苗叶片叶绿素荧光特性的影响

以铁观音为试验材料,研究了聚乙二醇(PEG)胁迫对茶树幼苗叶片叶绿素荧光特性的影响.结果表明,在PEG胁迫下,茶树幼苗叶片的基础荧光(Fo)显著升高,最大荧光(Fm)、可变荧光(Fv)、PSⅡ原初光能转化效率(Fv/Fm)、PSⅡ的潜在活性(Fv/Fo)显著下降,说明PEG胁迫使茶树幼苗叶片PSⅡ反应中心受到伤害;PEG胁迫还降低了茶树的光化学反应速率(Prate),缩短了荧光上升时间(T1/2)、抑制了PSⅡ反应中心电子的传递(ETR降低),导致天线色素热耗散速率(Drate)和光合功能相对限制值[L(PFD)]升高,光化学猝灭(qP)和PSⅡ实际光化学效率(Yield)显著下降.     

用cDNA-AFLP技术研究茶树种子在低温贮藏过程中差异基因的表达

以茶树无性系龙井43种子为材料,利用cDNA-AFLP差异显示方法,分析它在低温贮藏后的基因表达,为顽拗性植物种子的中长期保存提供理论依据。从64对引物筛选出的差异片段中克隆出10个低温差异表达片段,有7个在GenBank数据库中与小分子量热激蛋白、MYB类转录因子、衰老相关蛋白、F-box家族蛋白、蛋白激酶、磷酸二酯酶等基因有较高同源性。