马铃薯茎尖试管苗及微型试管薯繁育的影响因子研究

以广东省引种的荷兰马铃薯费乌瑞它(Favorita)品种为材料,研究了从茎尖脱毒分化到试管微型薯诱导过程中的一些影响因素。结果表明:MS+NAA0.10mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1为诱导愈伤组织的合适培养基;愈伤组织分化培养时,GA3的最适浓度为0.1～0.2mg·L-1;壮苗阶段,液体基本培养基MS加矮壮素CCC1.0～1.5mg·L-1的效果较好;弱光照比连续强光照更有利于结薯,弱光处理40d后黑暗处理一周,结薯诱导培养的时间为50d左右,0.1%的活性炭对诱导结薯有重要的促进作用。     

马铃薯茎尖脱毒效果影响因素的研究

以克新2号、克新16号和克新17号等8个马铃薯品种为试验材料,对马铃薯茎尖脱毒效果的影响因素进行了研究。结果表明:不同种类的植物生长调节剂对茎尖的生长有不同的影响,茎尖在⑤号培养基(MS+1.0mg·L-1KT+0.5mg·L-1IAA+0.5mg·L-1GA3)上可不产生愈伤组织,直接成苗,是最适宜的培养基;6～8℃低温预处理和37℃热空气处理对茎尖脱毒有利;茎尖取材来源对成苗率没有影响,对脱毒效果影响较大,但脱毒效果依品种而异;为避免造成损失,需在15个月内准备出用于更换的基础苗。     

愈伤组织再生马铃薯脱毒苗生产体系的建立

以马铃薯茎尖、茎段、全叶、半叶为外植体,进行愈伤组织的诱导、继代、根芽分化和植株再生的研究,建立马铃薯脱毒再生体系。结果表明:(1)马铃薯茎尖、茎段、半叶、全叶在MS+6-BA1.5 mg·L-1+NAA1 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中,愈伤组织诱导率分别达到97.3%、75.6%、96.8%、97.4%;(2)在MS+6-BA1.5mg·L-(1或ZT2.0 mg·L-1)+NAA0.5 mg·L-1+GA3 5 mg·L-1+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基中不同外植体芽诱导率在15.4%～67.7%,根的分化率21.3%～88.2%。     

黑甘薯脱毒快繁技术研究

以富含硒的日本黑薯的茎尖为材料进行脱毒快繁研究,结果表明剥取小于0.3 mm的甘薯茎尖进行组织培养产生愈伤的最适培养基是MS＋6-BA1.0 mg/L＋NAA0.1 mg/L;继代培养基为MS;生根培养基为1/2MS＋活性炭,填加活性炭的生根培养基能提高生根率。     

马铃薯品种‘陇薯11号’再生体系的构建

采用L_(16)(4~5)正交试验设计,以马铃薯品种‘陇薯11号’为试验材料,分别选用4种植物激素(诱导愈伤的GA_3、6-BA、NAA、2,4-D和诱导分化的GA_3、NAA、IAA、KT)的4个水平对其茎段的离体再生进行了研究,筛选适合‘陇薯11号’的愈伤和芽分化诱导培养基。结果表明,适合‘陇薯11号’的茎段愈伤诱导培养基为MS+GA_3(7.5 mg/L)+6-BA(2.5 mg/L)+2,4-D(0.5 mg/L),诱导率达98.72%,生长状态最好;诱导芽分化的最佳培养基为MS+NAA(0.25 mg/L)+IAA(0.1 mg/L)+KT(3.0 mg/L),不定芽诱导率为95.83%,分化苗健壮。     

白掌的组织培养和快速繁殖

以白掌的茎尖为外植体,研究了影响其初代、继代及生根培养的主要因素。结果表明：最适初代培养基为MS＋6-BA2mg·L-1＋AD0.2mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1;最适增殖培养基为MS＋6-BA2mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1;最适生根培养基为1/2MS＋NAA0.2mg·L-1。     

马铃薯茎尖培养部分无机盐浓度对黄化苗发生的影响

为解决马铃薯茎尖脱毒培养过程中黄化苗形成的问题,以马铃薯品种B01-31-9为试验材料,研究了茎尖诱导培养基中NH4NO3,MgSO4.7H2O,CaCl2.2H2O和铁盐浓度改变对茎尖培养过程中黄化苗发生及成苗率的影响。结果证明:培养基中氮、镁、铁浓度的改变对黄化苗的预防有显著作用,当NH4NO3,MgSO4.7H2O和铁盐的浓度分别在1 600 mg·L-1、400 mg·L-1、83.4 mg·L-1时,黄化苗发生率最低;但以上各因素处理对茎尖诱导分化成苗的影响差异并不显著。     

“神马”菊组织培养技术研究

利用“神马”菊花的茎段作外植体,采用不同的诱导、继代和生根培养基进行菊花组织培养技术研究,结果表明,丛生芽诱导的最佳培养基为MS＋6-BA2mg·L-1,丛生芽继代培养的最佳培养基为MS＋6-BA1.5mg·L-1＋NAA0.05mg·L-1,最佳生根培养基为MS＋NAA0.1mg·L-1。     

蔗糖和外源激素对马铃薯脱毒试管苗的影响

本试验以马铃薯品种大西洋脱毒试管苗为材料,采用正交试验设计,研究了蔗糖和外源激素(6-BA、B9、NAA)对脱毒试管苗生长状况的影响。研究结果表明,对于试管苗的不同指标,其最优组合不尽相同。有利于株高的组合:3%蔗糖+0.01mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.1mg·L-1NAA;有利于茎粗的组合:12%蔗糖+1mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.02mg·L-1NAA;有利于茎节数的组合:3%蔗糖+0.1mg·L-16-BA+35mg·L-1B9+0.1mg·L-1NAA;有利于叶片数的组合:3%蔗糖+0.1mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.02mg·L-1NAA。     

利用农杆菌介导法将PVA-CP基因导入马铃薯品种东农303的研究

以马铃薯早熟品种东农303的微型薯为受体材料,对其再生和农杆菌介导的遗传转化体系进行了研究,成功地将PVA-CP基因导入马铃薯中。结果表明:在加入5mg·L-1ZT和1mg·L-1IAA的培养基上微型薯再生频率最高达95%;农杆菌侵染薯块时,用浓度为OD600=0.5的菌液,侵染5min,共培养2d转化频率最高;在诱导芽阶段加入75mg·L-1的卡那霉素,采用延迟筛选的方法。得到的抗性芽有22株在含100mg·L-1卡那霉素的培养基上生根。经PCR和PCR-Southern杂交检测,15株为阳性植株。初步证明了PVA-CP基因已导入并整合到马铃薯品种东农303的基因组中。     

马铃薯再生体系的建立及其遗传分析

以马铃薯品种中薯2号为试材,筛选不同的培养条件建立了较高效的马铃薯再生体系,并对其再生过程进行了蛋白质检测和RAPD分析。愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA2.25mg.mL-1+NAA0.1￣0.2mg.mL-1,愈伤组织的诱导率达到73.17%～76.01%。自然生长、初代培养和继代培养的马铃薯再生体的水溶性蛋白之间存在着一些差异。利用RAPD标记技术,通过对54个引物的严格筛选,获得了3个扩增产物略有差异的引物。     

滁州白头翁组织培养及再生体系的建立

为建立白头翁再生体系,以白头翁主根的切段和试管苗叶片为外植体,比较2种外植体离体培养差异,探讨不同植物生长调节剂对不定芽和愈伤组织诱导、愈伤增殖和再分化及芽苗生根的影响。结果表明:叶片可以通过愈伤组织再分化和直接产生不定芽2种途径建立再生体系,而根只诱导出了愈伤组织,增殖培养中逐渐褐化死亡;在含6-BA培养基上,叶块死亡,而根只诱导出少量愈伤组织;叶片诱导不定芽的培养基为MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L;愈伤组织增殖的培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L;再分化时,需要转接到TDZ和NAA组合的培养基上,其中处理组合TDZ 0.3 mg/L+NAA0.1 mg/L的再分化率达100%;生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。不同外植体离体培养存在差异,叶片较根易培养;TDZ对白头翁叶片培养效果较好,2,4-D对愈伤组织的诱导能力较强,而NAA适合于不定芽分化,NAA与IBA组合使用生根效果较好。     

不同处理方法对马铃薯茎尖成苗率的影响

试验以带马铃薯病毒的N88为材料,分别在40℃/25℃(4 h/20 h)的变温环境中,培养2、3、4周处理后茎尖剥离;以N88和D575试管苗为材料,在加入0,20,30 mg·L-1病毒唑的培养基中处理40 d后茎尖剥离。茎尖培养基为MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 GA3+4 g·L-1琼脂粉+30 g·L-1白砂糖的改良固体培养基,30 d后开始调查成苗率,每隔10 d调查1次,直到60 d,统计茎尖成苗率。结果表明:2周变温处理的茎尖成苗率和对照接近,但脱毒率有所提高;4周变温处理剥离茎尖成苗率最低,60 d成苗率仅为15%,脱毒率为100%;病毒唑浓度对不同材料的茎尖成苗率影响不同,其中D575经过20 mg·L-1病毒唑处理,茎尖培养60 d后成苗率最高达到83.3%,PVS脱除率为40%;材料N88在加入20 mg·L-1和30 mg·L-1浓度病毒唑的培养基中培养40 d后茎尖剥离,60 d成苗率分别为40.0%和41.7%,PVY、PLRV的脱毒率为100%。     

2,4-D、Dicamba和KT对小麦成熟胚离体培养的影响

为了建立优良小麦品种遗传转化的高效组织培养体系,以扬麦158和郑麦9023成熟胚为外植体,探讨了Dicamba和2,4-D及KT对小麦成熟胚愈伤组织诱导和再生的影响。结果表明,Dicamba和2,4-D的愈伤组织诱导率最低为88.7%,最高可达95.1%,处理间无显著差异。不同激素诱导的愈伤组织在添加KT的培养基上分化时,再生率存在显著差异。两种基因型小麦用Dicamba诱导的愈伤组织比2,4-D诱导的愈伤组织具有更高的再生率。在分化培养时,培养基中添加5mg·L-1 KT比添加3mg·L-1的分化效果更好,但不同浓度KT对愈伤组织分化的效果因诱导激素的配比和基因型而异。扬麦158的综合指标更优,平均再生率可达20.1%,比郑麦9023高6.6%;采用4mg·L-1 Dicamba进行愈伤组织诱导,配合5mg·L-1KT分化培养更有利于小麦成熟胚离体培养。     

氨基酸对小麦成熟胚愈伤组织诱导率的影响

为优化小麦成熟胚愈伤组织诱导体系,以中国春（Chinese Spring）成熟种子为材料,MS培养基为基础培养基,研究酒精、双氧水不同的灭菌时间和不同氨基酸组分对小麦成熟胚愈伤组织诱导与分化的影响。结果表明,当75%酒精浸泡时间控制在180 s、30%双氧水灭菌时间15 s以上时和当30%双氧水消毒时间控制在180 s、75%酒精浸泡时间15 s以上时,成熟胚均不会出现污染。甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸和亮氨酸是小麦成熟胚诱导的必须氨基酸。正交实验结果表明,培养基中最佳的氨基酸配组为甘氨酸60.0 mg·L^-1、天冬氨酸2.0 mg·L^-1、脯氨酸2.0 mg·L^-1和亮氨酸0.1 mg·L^-1。利用该培养体系,小麦成熟胚的出愈率达到97%以上。本研究优化了小麦成熟胚的培养体系,也为研究小麦氨基酸代谢的生理过程提供了参考。     

不同基因型马铃薯的花药培养

马铃薯花药培养在马铃薯育种实践中具有重要的意义。现以杂交圃中77份亲本材料为试验材料,对花药高温前处理、培养基和基因型等因素进行了试验。结果表明:马铃薯花药培养对基因型有很大依赖性,不同基因型马铃薯愈伤诱导率范围是0.16%～9.50%,胚状体发生率范围是0.31%～15.63%。克97G8-4、讷16和白俄3的植株再生率范围为12.00%～23.08%,其余全部没有分化出植株。倍性鉴定表明:双单倍体的发生率为93.75%。诱导培养基以MS+0.5 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-1 KT+0.5%活性炭+100 mg·L-1 AgNO3,即③号效果最好,植株分化培养基以MS+4.0 mg·L-1 GA3+2.0 mg·L-1 ZT+30 mg·L-1蔗糖+0.7%琼脂,即②号效果较好。高温预处理对胚状体的发生有利。     

马铃薯优化再生系统的建立

本试验研究了六种培养基系统对马铃薯东农３０３，Ｆａｖｏｒｉｔａ和极早三个品种来源的不同外植体的愈伤组织诱导和植株再生的影响，筛选出了适合植株再生的最佳外植体、最佳外植体大小及最佳培养基系统。适合植株再生的最佳外植体为叶片；最佳外植体大小为叶片０．５ｃｍ２、茎０．５ｃｍ、块茎０．２５ｃｍ２×０．３ｃｍ，适合于茎、块茎及叶的有效培养基系统分别为：①ＭＳ＋３ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ＋０．０１ｍｇ·Ｌ-１ＮＡＡ（ｐｈ５．６）４周ＭＳ＋０．３ｍｇ·Ｌ-１ＧＡ３（ｏＨ５．６）；②ＭＳ＋１．７５ｍｇ·Ｌ-１ＺＴ＋０．８７ｍｇ·Ｌ-１ＩＡＡ（ｐＨ５．８）；③ＭＳ＋２．２５ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ＋０．１８６ｍｇ·Ｌ-１ＮＡＡ（ｐＨ５．８）２周ＭＳ＋５ｍｇ·Ｌ-１ＧＡ３＋２．２５ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ（ｐｈ５．８）。