基于smad7基因为靶序列的RNA干涉作用研究

本文旨在探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7 mRNA表达的阻断作用。用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs)，脂质体介导瞬时转染BERP35T-2肺癌细胞系，Northern blot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对两个不同靶序列的siRNAs，Northern blot杂交显示，在转染siRNA和BERP35T-2细胞中，不管是内源性的还是外源性的Smad7 mRNA的表达丰度均明显下降，Smad7基因编码区中542bp-563bp及701bp-722bp两个区域均是siRNA作用的有效靶序列；本研究设计并制备的siRNAs能有效抑制smad7基因的表达。     

基于Smad 7基因为靶序列的RNA干涉作用研究

为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对2个不同靶序列的siRNAs;Northernblot杂交显示,在转染siRNA的BERP35T 2细胞中,不管是内源性的还是外源性的,Smad7mRNA的表达丰度均明显下降。说明Smad7基因编码区中542563bp及701722bp2个区域均是siRNA作用的有效靶序列,本研究设计并制备的siRNAs能有效抑制Smad7基因的表达。     

siRNA对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)复制的影响

RNA干涉(RNAi)可以通过短双链RNA(siRNA)介导,特异地降解相应的mRNA,从而抑制基因表达,导致转录后水平的基因沉默(PTGS)。本研究利用这种技术,将鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染体外培养的Vero-E6,使其适应Vero-E6,然后用体外转录合成的针对IBV部分基因的siRNA,对其复制进行RNAi。结果显示,针对IBVM蛋白的siRNA能有效地抑制IBV在Vero-E6细胞中的复制。     

RNAi技术及其应用

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21~23 nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现。目前RNAi技术在基因功能和基因治疗等方面的研究有了广泛的应用,RNAi技术有望成为后基因组时代基因功能分析的有力工具。     

植物microRNA靶基因的预测与验证技术研究进展

MicroRNA(miRNA)是真核生物中具有重要调控功能的一类小分子RNA。植物miRNA通过碱基互补配对方式引导RNA沉默复合体识别靶基因并介导靶基因mRNA被剪切或蛋白质翻译被抑制,所以对植物miRNA靶基因的分析和验证是研究miRNA功能必不可少的一部分。植物miRNA靶基因可通过生物信息学方法预测,主要根据miRNA与mRNA的互补程度进行,然而理论上预测的靶基因尚有待于进一步的试验验证。简要介绍了植物miRNA产生过程的最新研究进展以及靶基因的预测方法,重点综述了植物miRNA靶基因的验证方法,包括RLM-5'RACE、降解组测序、瞬时共表达和转基因系统,为更深入地研究植物miRNA介导的调控机制提供参考。     

siRNA和miRNA的研究进展

RNAi(RNA interference)即RNA干涉,是由外源或内源性的双链RNA(double starand RNA,dsRNA)导入细胞而引起的与dsRNA同源的mRNA降解,进而抑制相应基因表达,可以抑制诸多真核基因的表达s。iRNA(small interferance RNA,siRNA)即小干扰性RNA,是RNA干扰的引发物,不同的siRNA可以引导不同水平的RNAi。非编码RNA中的微小RNA(micro RNA,miRNA),能够识别特定的目标mRNA,通过与mRNAs3’非翻译区结合,影响蛋白翻译水平。miRNA和siRNA在生成机制、作用途径等方面关系密切,既区别又相互联系,小分子RNA的研究将是今后分子生物学的研究热点之一。     

VIGS介导的转复制酶基因番木瓜对PRSV的抗性

将PCR检测呈阳性的T4代转复制酶(replicase,Rep)基因番木瓜植株在苗期接种番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Ys株系,定期采取不同部位的叶片进行Northern blot分析.结果表明:接种PRSV之前,在植株的各部位均能检测到转基因完整的Rep mRNA,但接种后不同时间在接种叶以上部位陆续出现了Rep mRNA的降解;接种后30 d内,接种叶下部第1片叶上始终未出现Rep mRNA的降解;另外,在发生mRNA降解的叶片上都能相继检测到小分子干涉RNA(short interferring RNA,si RNA)的产生.这说明转基因番木瓜的抗病性与mRNA的降解及siRNA的积累有着密切的关系.这种抗性发生在转录后水平上,是由病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)介导产生的.     

RNA干涉与基因功能研究进展

RNA干涉是通过双链RNA的介导，在基因的转录后水平上，特异性抑制具有相应序列的基因表达，即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。迄今，在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、生物体的发育和基因表达调控都有重要作用；它也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干涉的机制及其在基因功能研究方面的最新进展。     

RNA干扰研究现状

RNA干扰(RNAi)是指生物体内利用双链RNA(dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,从而导致转录后基因沉默的现象。其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用。RNAi以其高特异性、高效性等显著优势将成为研究基因功能的全新手段。简要概括RNAi作用机制和siRNA技术的原理,同时也讨论了RNAi技术在其他领域,如在基因信号通路研究、高通量研究基因功能、基因治疗如肿瘤研究和疾病治疗等方面的应用。     

3个水稻RNAi载体的构建与应用

利用RNAi(RNA interference)干扰技术,构建了启动子和干涉区域不同的3种水稻干涉载体,通过农杆菌介导转化水稻粳稻品种中花11。表型和分子分析表明,3种载体都能有效降解靶基因OsUGP2,暗示pRNAi-ubi-UGP2载体能同时沉默OsUGP2家族基因,pRNAi-ubi-UGP2PRO载体能特异沉默OsUGP2,pRNAi-IP-UGP2载体对OsUGP2基因的沉默不具特异性,但其沉默具有人为可调控性。     

RNA干涉技术及其应用

RNA干涉(RNA interference,RNA1)是由双链RNA导入而引起的转录后基因沉默,它可以作为一种有力的工具在多种有机体中抑制特异性基因的表达。文章简要介绍了RNA干涉的发现史、作用机制、特点及该项技术的用途。RNA1的作用机制可以分为起始阶段和效应阶段。双链RNA被Dicer消化成siRNAs(small interfermg RNAs),进一步形成RNA诱导沉默复合物(RNA-mduced silencmg complex,or RISC),在siRNAs的引导下切割靶mRNA。RNAi技术在疾病的基因治疗、功能基因组学及细胞信号通路分析等力面具有广阔的应用前景。     

microRNA与植物花发育调控的研究进展

microRNAs(miRNAs)是约21nt的非编码RNA,主要在转录后水平调节基因的活性。miRNAs通过与靶基因的互补位点结合从而降解靶基因mRNA或抑制其翻译。miRNAs 参与调控植物生长发育的多个方面,包括生长、开花、代谢、激素应答、生物与非生物胁迫。综述了miRNAs在植物花发育中的研究进展,以期为更好地了解miRNA在此过程中的作用机制,并应用于改良植物的农艺性状及培育优良品种奠定基础。     

RNAi技术在植物功能基因组学中的研究进展

文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载体的构建方法以及该技术的优缺点。病毒介导的基因沉默技术方面包括病毒载体及宿主种类,病毒感染方法,试验对照的建立、环境因素的影响以及该技术的优缺点。     

RNA干扰技术及其应用

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默的现象。作为一种简单有效的影响基因表达的工具,RNA干扰已经被广泛应用于许多领域,同时也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干扰的机制及其应用方面的最新进展。     

动物病毒microRNA的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一种含有约22～25个核苷酸的非编码单链RNA分子,广泛存在于人类及其他各种生物中。它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而调节基因的转录后表达水平。病毒microRNA是新发现的一类miRNA,综述了近年来病毒microRNA的产生、作用机制、生物学功能及其在动物上的研究进展。     

dsRNA引发的基因沉默

双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)导入细胞后引起细胞内特定的信使核糖核酸(messenger RNA，mRNAs)降解，从而导致基因沉默，并使生物体产生相应的功能缺陷型，这种由dsRNA介导的基因沉默称为RNA干涉(RNAi)，RNAi普遍存在于植物、动物、真菌中，它的发现改变了人们对细胞如何保护其基因组的理解，并发展了研究基因功能的新战略．对RNAi的发现历史、作用特点、作用机制以及应用前景进行了简述．     

miR-221功能研究进展

miR-221是由内源性发夹(Hairpin)结构转录产物衍生出来的一类长21～28个核苷酸的小分子非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。通过碱基互补配对原则与靶基因mRNA结合,从而在转录水平引起靶基因mRNA的降解或者抑制其翻译成蛋白。miR-221是成簇分布的miRNA,近来研究表明,miR-221参与调控细胞增殖、凋亡、造血、肿瘤发生等一系列生物进程。文章介绍了miR-221功能研究的进展,为进一步研究miR-221提供了理论基础。     

RNAi 3种分子加工机制研究进展

RNAi(RNA interference,RNA干扰)是一种高度保守的由小分子RNA介导的基因沉默过程。根据介导RNAi的小RNA长度以及结合Argonaute(AGO)蛋白家族成员的不同,将小RNA分为miRNA(microRNA)、siRNA(small interfering RNA)和piRNA(Piwi-interacting RNA)3类。根据近年来取得的研究进展,系统地阐述了这3类小RNA的基因组来源及其加工产生机制,归纳总结了这3类小RNA之间的区别和联系,并结合当前RNAi应用于疾病治疗存在的问题提出了自己的看法。RNAi机制的完善对于生物进化、生长发育及癌症等重大疑难疾病治疗具有重要的应用价值。     

RNA干扰机制及其主要蛋白因子研究进展

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是由双链RNA(double stranded RNA, dsRNA)分子介导的、在mRNA水平上关闭相应序列基因表达、使其沉默的过程。RNAi作为一种古老而保守的基因沉默机制,广泛存在于真核生物体内,在细胞的发育调控、抗病毒防御、修复遗传损伤、调节正常的基因等生命过程中起着重要的作用。RNAi机制可以分为3个阶段：启动阶段、效应阶段及扩增阶段。RNAi干扰相关的主要蛋白因子有Dicer酶、Argonaute(AGO) 蛋白家族和RNA依赖的RNA聚合酶(RNA\|dependent RNA polymerase, RdRP)。文章对RNAi机制及其相关主要蛋白因子进行简要综述。     

植物中依赖于RNA的RNA聚合酶研究进展

依赖于RNA的RNA聚合酶(RDR)能够以单链RNA为模版合成互补RNA链,产生双链RNA。双链RNA在细胞内被类似RNaseⅢ的酶DCL加工成20～24 nt的小分子干扰RNA(siRNA)。siRNA可以在转录水平或转录后水平抑制靶基因的表达。RDR通过基因沉默途径参与植物的生长发育调节、逆境应答以及表观遗传修饰等许多生物学过程。加深对植物RDR表达模式、生化活性及生物学功能等方面的理解将有利于植物基因沉默的发展和运用。