新疆乌鲁木齐市生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性分析

为了解新疆乌鲁木齐市生鲜乳中金黄色葡萄球菌的污染及耐药情况,采集该地区生产与销售环节生鲜乳104份,利用Baird-Parker培养基平板和显色培养基,分离培养、纯化细菌;采用革兰氏染色、荧光PCR、全自动微生物鉴定系统,对可疑菌落进行鉴定。结果显示:检出金黄色葡萄球菌阳性乳35份,阳性率为33.7%;分离菌株对青霉素等15种抗生素存在不同水平的耐药性。结果表明,乌鲁木齐市生鲜乳中金黄色葡萄球菌污染与耐药情况较严重。结果提示,要加强乳品安全生产管理,规范动物饲料和兽药生产,以及动物饲养管理中抗生素的使用与添加,以保证乳品品质安全,维护公共卫生健康。     

一例鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

采集关节肿胀、关节囊内有浆液性渗出物患病鸡肝脏及骨髓进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、革兰氏染色、生理生化试验、PCR鉴定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果从病鸡样品中分离出一株在普通琼脂平板上形成湿润、表面光滑、隆起的圆形菌落,菌落在血琼脂平板上能产生β溶血;分离菌为革兰氏阳性,符合金黄色葡萄球菌生化培养特性;PCR检测结果显示金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因呈阳性,细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为金黄色葡萄球菌;分离菌对阿莫西林、四环素、青霉素G、氯霉素、复方新诺明和氨苄西林具有耐药性。结果为云南鸡源金黄色葡萄球菌病的临床诊断和防治提供了依据。     

野生岩羊金黄色葡萄球菌感染的诊断

采集发病的野生岩羊肝、脾等组织样品,进行病原分离鉴定.分离的细菌为革兰氏阳性成对或成堆排列的球菌.分离菌在普通琼脂上生长良好,放置2 d～3 d菌落由淡黄色变为黄色,在鲜血琼脂上培养14 h见到菌落周围呈β溶血,对小白鼠有致死作用,凝固酶试验为阳性,动物接种试验、PCR扩增和血清学试验未发现病毒感染.据此,确诊为金黄色葡萄球菌感染.     

湖南部分地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及溶血性分析

为调查湖南省部分地区奶牛场生鲜乳源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出情况，同时调查金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型的分布情况及二者的关系。采用肉汤稀释法对分离自湖南省部分地区奶牛场生鲜乳的54株金黄色葡萄球菌进行18种常见抗菌药物耐药性检测，采用绵羊血琼脂平板检测细菌溶血性，并采用PCR方法扩增分离菌株mecA基因及5个溶血素基因。结果显示，54株金黄色葡萄球菌均表现不同程度的耐药，耐药谱型达21种；21株金黄色葡萄球菌表现为多重耐药，最高耐药重数为9重；对青霉素耐药最严重，耐药率达85.19%,对头孢西丁、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素及大环内酯类药物(红霉素、替米考星)耐药率在20%～30%之间，对多西环素与万古霉素敏感；从24株分离菌中检出mecA基因，鉴定为MRSA。54株分离株在羊血琼脂平板上主要以β和γ溶血为主，α、β及γ溶血率分别为12.9%、44.4%和42.6%;各溶血素基因检出率分别为98.1%(hla)、94.4%(hlb)、96.3%(hld...     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌溶血素基因型和表现型分析

为调查奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌溶血素基因型和表现型分布,并对两者之间的关系进行研究,采用PCR方法对从奶牛乳腺炎病例中分离的33株金黄色葡萄球菌的溶血素基因进行检测,并分别用牛血琼脂平板和绵羊血琼脂平板检测其溶血性。结果表明,各溶血素hla,hlb,hld,hlg,hlg2基因的检出率分别为90.91%,100%,93.94%,78.79%,66.67%;牛血平板检测表明β溶血占84.85%,绵羊血平板检测β溶血只有57.58%,金黄色葡萄球菌在牛血和绵羊血琼脂平板上均以β血为主,但牛血检测出的β溶血比例更高,表明牛红细胞对金黄色葡萄球菌β溶血素更为敏感。综上表明,金黄色葡萄球菌溶血素基因型和表现型之间无对应关系。     

胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16S rDNA) 多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。     

葡萄球菌五项致病性指标相关性的研究

葡萄球菌广泛分布于自然界中，其中致病性葡萄球菌可引起多种动物的疾病，在诊断过程中，常以分离到的葡萄球菌是否溶血、是否产生金黄色色素及血浆凝固酶试验、甘露醇发酵试验、动物试验等五项指标来判断是否为病原。但这几项指标间的相关性如何，哪些应为首选判定指标，未曾见报道。为此笔者对３０株葡萄球菌上述五项致病性指标进行了相关性实验研究。１材料和方法１．１菌株菌株共３０株，其中２５株分自某奶牛场临床健康牛（含隐性乳房炎牛）乳样，５株分自某鸡场病死雏鸡，均经鉴定为葡萄球菌。１．２培养基鲜血琼脂平板、普通琼脂平板…     

鹅源金黄色葡萄球菌分离鉴定及其诊治分析

为确诊昆明市东川区某养鹅场疑似葡萄球菌感染鹅群的致病原因,采集发病鹅的脑组织、肿胀关节脓液及肝脏等病料进行细菌分离鉴定。结果显示,从病料中分离到1株细菌,分离菌在普通营养琼脂平板上形成光滑、湿润、无色、表面凸起的圆形菌落,在血琼脂平板上能产生β溶血,镜检呈革兰氏阳性葡萄串状;生化鉴定结果符合金黄色葡萄球菌反应特征;分离菌16S rRNA扩增序列分析表明,其匹配度最高的均是金黄色葡萄球菌各株系的16S rRNA序列,综合研判分离菌株为鹅源金黄色葡萄球菌。药敏试验显示,该菌株对头孢噻肟、阿米卡星等敏感,对强力霉素、庆大霉素等中度敏感,对氨苄西林、大观霉素等具有耐药性;该分离菌株接种试验小鼠具有较强的致病性。结果表明,金黄色葡萄球菌是引起该场鹅群感染的致病因素之一,该分离菌对多种抗菌药具有耐药性,应引起重视。研究结果为该地区鹅病的临床诊治提供参考。     

昆明某猪场猪皮脓病的病原学诊断

昆明某猪场猪出现以关节及皮肤脓肿、发育迟缓为特征的疾病。为查明病因,本试验采集自各病猪的关节渗出液、脓汁,取病料组织划线于血琼脂平板培养,对形成的溶血性菌落采用高盐培养、革兰染色、触酶试验、凝固酶试验和药敏试验,并使用细菌16S rRNA基因通用引物扩增分离株DNA片段,琼脂糖凝胶电泳胶回收产物,经过TA克隆后测序分析。结果发现,溶血性菌株为革兰阳性的球菌,触酶试验和凝固酶试验均呈阳性,PCR扩增出1 476bp的单一条带,其基因序列与金黄色葡萄球菌DNA同源性达99%。试验结果表明,引起该猪场皮脓病的主要原因是金黄色葡萄球菌感染。     

浙江省一规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定

2017年12月,浙江省杭州市萧山区某规模猪场保育舍猪群出现高热(41.5℃)、咳嗽、腹式呼吸、关节肿胀伴有跛行和被毛粗乱等临床症状。为确诊疾病,明确病因,剖检2头40日龄病死猪,用接种环刮取肺脏病料接种血平板,再用金黄色葡萄球菌作交叉划线,于37℃5%CO2条件下培养24 h。结果显示:病料培养血平板上生长出大量半透明、不溶血小菌落,菌落直径为0.5~1 mm;靠近金黄色葡萄球菌菌苔的菌落较大,随着与葡萄球菌生长线距离的增加而变小或不生长,呈"卫星现象"。挑取可疑菌落进行纯化培养,将纯培养物制成菌悬液,以DNA纯化试剂盒提取DNA并进行PCR检测。扩增产物电泳后,被检菌株电泳道出现一条1 090 bp条带,表明该菌株为副猪嗜血杆菌。     

牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离鉴定

从奶牛分离得到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methieillin—resistant Staphylococcus aureus,MRSA）。按常规方法复苏菌株,用血浆凝固酶试验鉴定SA。用KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法（VITEK32）、聚合酶链反应等鉴定MRSA。常规分离鏊定的葡萄球菌468株,其中凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase negative Staphylococcus,CNS）361株,检出率为77．149,6,金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）105株,检出率为22．44％,MRSA36株检出率为34．29％,2株未定型,占0．42％。而MRSA在乳房炎奶样中检出率高达34．29％,表明新疆兵团部分垦区牛场MRSA已经呈蔓延趋势。     

Some Microbiological Aspects of Staphylococcal Mastitis

(1) Mannitol fermentation is a reasonably reliable method for the detection of coagulase positive staphylococci in milk. This reliability can be improved if mannitol fermentation is carried out under anaerobic conditions.

(2) Among hemolytic strains of staphylococci isolated from milk, beta hemolytic staphylococci predominate. Bovine and sheep blood agar plates give similar hemolytic patterns, but the hemolysis is more pronounced on sheep blood agar.

(3) Gelatin liquefaction cannot be relied upon for the selection of coagulase positive staphylococci in milk.

(4) Urease production is a feature of the majority of coagulase positive staphylococci isolated from milk.

(5) Tellurite Glycine agar medium is not satisfactory for the selection of coagulase positive staphylococci in milk.

     

兔葡萄球菌的分离与鉴定

为了确定重庆市某兔场洪灾后母兔发生化脓性疾病的病原及筛选敏感的药物,试验进行了细菌分离培养、染色镜检、生化试验、血浆凝固酶试验、动物接种试验、16S rRNA基因扩增及测序、药物敏感试验。结果表明:分离的病原菌是金黄色葡萄球菌,其基因序列与金黄色葡萄球菌的同源性高达99%;分离菌对氨苄西林、先锋Ⅴ、菌必治、氨苄西林/舒巴坦高度敏感。     

猪胸膜肺炎放线杆菌四川株的分离鉴定及药物敏感性试验

从四川某猪场疑似胸膜肺炎放线杆菌感染的病料中分离到一株革兰氏阴性小球杆菌。经染色镜检、生化试验、PCR检测、血清型检测,致病性试验和药敏试验,鉴定该菌为猪胸膜肺炎放线杆菌1型,且具有较强致病性。药敏试验结果表明,该菌对四环素、甲氧苄啶,以及链霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那、新霉素等氨基糖苷类药物高度耐药,对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林和恩诺沙星、诺氟沙星等喹诺酮类受试药物敏感。     

Isolation,Identification and Drug Sensitivity Test of a Strain of Aeromonas veronii from Chinemys reevesii

To determine the cause of death of Chinemys reevesii in a pet shop in Changli county, Hebei province, a dominant strain CLW-1 was isolated and purified from the diseased Chinemys reevesii. It was analyzed and identified through anatomical observation, bacterial isolation and culture, Gram staining and microscopic examination, biochemical identification and 16S rDNA gene sequencing, the drug resistance of the strain was detected through drug sensitivity test, and its pathogenicity was detected through zebrafish inoculation test and virulence gene experiment. The results showed that the bacteria formed moist, smooth surface, gray colony with β hemolysis on blood agar medium, and grew smooth and moist yellow colony on RS agar medium; Gram staining and microscopic examination showed negative coccidiosis; Homology analysis of 16S rDNA gene sequence showed that the isolated strain CLW-1 belongs to the same group with Aeromonas veronii, and the homology is above 99%; Inoculation test results of zebrafish showed that the strain had high pathogenicity, and its LD₅₀ was 1.26×10⁶ CFU; The virulence gene amplification results showed that the isolated strain CLW-1 had virulence genes of aerA, Exu, Lip and Ser; Drug sensitivity test results showed that the isolated strain CLW-1 was sensitive to piperacillin, cefazolin and enrofloxacin, etc; Susceptibility to furazolidone, oxacillin and erythromycin, etc; Resistance to midecamycin, clindamycin and vancomycin, etc. According to the test results, the isolated strain CLW-1 is confirmed to be Aeromonas veronii, which carries virulence genes and has high pathogenicity, it has great therapeutic effect by applying corresponding antibiotics, thus laying a foundation for the prevention and treatment of Aeromonas veronii.     

1株草龟维氏气单胞菌的分离鉴定及药敏谱分析

旨在确定河北昌黎县某花鸟鱼店宠物草龟发病死亡的病因,笔者从发病草龟体内分离纯化出1株优势菌CLW-1,通过解剖观察、细菌分离培养、革兰染色镜检、生化鉴定和16S rDNA基因测序对其分析鉴定,并通过药物敏感性测试检测菌株的耐药性,通过斑马鱼接种试验和毒力基因检测其致病性。结果显示,该菌在血琼脂平板形成湿润、表面光滑、呈β溶血的灰白色菌落,在RS琼脂培养基上长出光滑湿润的黄色菌落;革兰染色镜检为阴性短小球杆菌;16S rDNA基因序列同源性分析表明,分离菌株CLW-1与维氏气单胞菌为同一族,相似性均达99%以上;斑马鱼接种试验结果显示,该菌具有较高的致病力,其LD₅₀为1.26×10⁶CFU;毒力基因扩增结果表明,分离菌株CLW-1具有aerA、Exu、Lip和Ser毒力基因;药敏试验结果显示,分离菌株CLW-1对哌拉西林、头孢唑林和恩诺沙星等敏感;对呋喃唑酮、苯唑西林和红霉素等中敏;对麦迪霉素、克林霉素和万古霉素等耐药。通过试验结果确定此分离菌株CLW-1为维氏气单胞菌,携带毒力基因,具有较高致病力,应用对应的抗生素治疗效果较好,为维氏气单胞菌病的防治奠定基础。     

Comparison of three commercial rapid agglutination test kits for identification of coagulase positive staphylococci from foods and animals.

Three rapid agglutination assays for the identification of Staphylococcus aureus Monostaph (Bionor A/S, Skien, Norway), Staphyslide-Test (BioMerieux, Lyon, France) and Staph-Rapid-Test (Roche, Basel, Switzerland), were compared. A total of 104 Gram-positive, catalase positive cocci were tested: Nineteen Staphylococcus reference strains comprising 15 spp. (4 strains were coagulase positive), and 7 Micrococcus reference strains comprising 4 spp.; 22 food isolates comprising 13 S. aureus, 8 coagulase positive Staphylococcus spp., and 1 Micrococcus sp.; 56 animal isolates comprising 11 S. aureus, 9 S. hyicus subsp. hyicus, 2 S. intermedius, 15 coagulase positive and 19 coagulase negative Staphylococcus spp. Totally 54 strains were coagulase positive. Considering agglutination of a coagulase positive strain as a correct identification, Monostaph, Staph-Rapid-Test, and Staphyslide-Test correctly identified 52 (96.3%), 47 (87.0%) and 48 (89.0%) of the coagulase positive staphylococci, respectively. Monostaph, Staph-Rapid-Test and Staphyslide-Test showed 1 (2.0%), 4 (8.0%) and 4 (8.0%) false positive reactions respectively. Monostaph, Staph-Rapid-Test and Staphyslide-Test gave 0 (0.0%), 6 (5.8%) and 7 (6.7%) non-interpretable reactions, respectively. Monostaph may be a good alternative to the tube-coagulase test for rapid and reliable identification of coagulase positive staphylococci from both food and veterinary sources. However, false negative reactions may occur with coagulase positive strains of S. hyicus subsp. hyicus and S. intermedius.     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌，本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定，并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示，从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落，为革兰氏阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇，硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性；16S rRNA基因序列系统进化树分析显示，该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支，同源性 > 99%；细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符；荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段，与荚膜血清A型相符；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；药敏试验结果显示，该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药；经耐药基因PCR检测显示，该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因，与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌，为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

猪肺炎支原体YN200901株的分离鉴定

采集疑似猪肺炎支原体病理变化的肺脏,接种到改良牛心培养基、猪胃消化液培养基进行培养,经瑞特染色、镜检,菌落狄氏染色、PCR鉴定及序列比对、生化试验鉴定,抗猪肺炎支原体血清生长抑制试验,分离获得一株猪肺炎支原体云南地方流行菌株,命名为YN200901。试验结果为云南本地株猪肺炎支原体的后续研究提供了物质基础。