苹果链格孢菌侵染条件及致病性研究

温度与保湿时间对苹果链格孢菌的侵染有很大的影响.当温度低于10℃,病原菌潜育期需72h;但当温度为25～30℃时,潜育期仅为6.5～8h.叶面保漫时间愈长,愈利于病原菌的侵染,叶面最少保湿时间为6h.病原菌侵染的最佳温度和保湿时间组合为:温度28～32℃,保湿时间24～48h.不同菌株接种试验表明:各菌株致病性有一定的差异,兰1、天2、平3菌株致病性较强,而武4菌株致病性较弱.品种感病性差异显著.印度、红星最易感病,祝、乔纳金抗病性较强.     

一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata）的巢式 PCR 方法

为建立检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata ）的方法,从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势 A．alternata 病原菌株,对其 rDNA 的内部转录间隔区序列（ITS）进行测序,序列比较表明,分离到的病原菌株与 GenBank 公布的 A．alternata 的 ITS 区序列一致性达到99％～100％。根据 Alternaria 属菌株（A．alternata、A．tenuis、A．tenuissima）和麦类根腐离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana ）的 ITS 序列比对结果,设计出1对 A．alternata 特异性引物 Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证,只有在 A．alternata 中能特异性地扩增出1条443 bp 的 DNA 片段。以真菌通用引物 ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R 为内侧引物进行巢式 PCR 扩增,能检测到 A．alternata DNA 的最低质量浓度为50 pg/μL。因此,建立的巢式 PCR 方法能够快速、特异地检测小麦中的 A．alternata。     

链格孢菌（Alternaria tenuissima）cDNA酵母表达文库的构建

为了解细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)遗传学背景,克隆及研究该菌功能基因,根据Gateway技术构建了既能在酵母细胞中表达外源基因又能在原核细胞大量复制的酵母表达载体pRS-DEST42,构建了细极链格孢菌(A.tenuissima)cDNA酵母表达文库.经检测,文库的平均滴度为2.44×106 cfu/ml,文库总容量为2.44×107 cfu(colony-forming unit),阳性克隆率为100%,平均插入片段约为1.38 kb.细极链格孢菌cDNA酵母表达文库是一个质量较高的表达文库,为克隆与分离全长目的基因及其功能奠定了坚实的基础.     

链格孢菌对空心莲子草致病性的研究

为探讨链格孢菌对空心莲子草的防治潜力,采用离体叶片法检测了链格孢菌不同极性代谢产物、菌丝体及分生孢子对空心莲子草的致病性.结果表明,链格孢菌乙酸乙酯相代谢产物对空心莲子草离体叶片具有较强的致病性,在最高浓度2 000 μg/mL时,石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相及水相导致叶片的病斑直径分别是对照的2.05倍、16.00倍、4.79倍和2.23倍.链格孢菌菌丝体和分生孢子同样对空心莲子草离体叶片具有较强的致病性,且随着浓度的增加致病性增强,在最高浓度9.88×106片段/mL和8.76×106个孢子/mL时,菌丝体和分生孢子所导致的叶片病情指数分别为最低浓度0.62×106片段/mL和0.55×106个孢子/mL时的2.78倍和3.41倍.链格孢菌具有开发为空心莲子草生防菌的潜力.     

深州蜜桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究I.发…

经鉴定，蜜桃黑斑病的病原菌为锭格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｔａ ａｌｔｅｒｎａｔａ（Ｆｒ．）Ｋｅｉｓｓｌ），主要危害果实，病斑最早在果实第２次膨大期（７月下旬）出现，以后着病斑的发展，症状乳突状、黄尖、红尖（红斑）、褐腐和黑斑。     

链格孢属（Alternaria Nees ex Fr.）的2个新记录种

本文报道2种国内未记述过的链格孢属真菌,即分离自一种供观赏的蕨类植物(Pteridophyte)叶片上的多隔孢链格孢[Alternaria phragmospora vanEmden]和引起苋科杂草空心莲子草(Alternanthera philoxeroides(Mart.)Griseb.)叶斑病的莲子草链格孢(Alternaria alternantherae Holcomb etAntonopoulos)。     

培养基对链格孢属（Alternaria Nees）真菌种级形态分类特征影响的研究

通过对链格孢属(Alternaria Nees)12个种在自然寄主、PDA培养基、1／4PDA培养基、水洋菜麦秆培养基和滤纸培养基上的测定表明：生长在自然寄主上的本属真菌形态特征典型，滤纸培养纸上的特征最接近自然培养基。分生孢子的着生方式，分生孢子隔膜，分生孢喙部形态和喙长与孢身长的比值等形态特征在不同培养基上生长相对稳定，可做为该属真菌形态分类的种级标准。     

深州密桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究Ⅱ.侵染规律…

桃树健康和枯死组织普遍带有链格孢，枯死组织带菌率更高。病侵染果实主要在盛花期至盛花后约４０ｄ这段时期，侵染主峰在花萎期（４月下旬）。空中孢子捕捉试验证明，当气温稳定在２０℃以上时（５月中旬以后），雨后空中孢子迅速增长，此期空中孢子量与侵染高峰有密切关系。密植树、幼树发病较轻、树下部发病较累，６月中旬以后套袋对黑斑病发病痃无明显影响。     

深州蜜桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究Ⅰ．发生情况、症状和病原鉴定

经鉴定，蜜桃黑斑病的病原菌为链格孢（Ａｌｔｅｒｎａｒｔａａｌｔｅｒｎａｔａ（Ｆｒ．）Ｋｅｉｓｓｌ），主要危害果实，病班最早在果实第２次膨大期（７月中下旬）出现，以后继续发展。随着病斑的发展，症状表现为乳突状、黄尖、红尖（红斑）、褐腐和黑斑。     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性

以空心莲子草离体叶片和植株为材料,采用离体叶片针刺法及离体植株培养法研究链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性。结果表明,细交链孢菌酮酸对空心莲子草叶片具有较强的致病性。在31.25 ～ 500.00 μg/mL浓度范围内,随着毒素浓度的升高,空心莲子草叶片的病斑直径增大,500.00 μg/mL时为2.41 mm;浓度为20.00 μg/mL时,毒素对空心莲子草植株不同部位叶片的致病性存在差异,对幼嫩的顶部叶片致病性较强;细交链孢菌酮酸对空心莲子草植株的生长产生抑制作用,抑制强度随浓度的升高而增强,与对照相比,当浓度达到125.00 μg/mL时,毒素对植株生长的长度、鲜重及平均根长的抑制作用达到显著水平,浓度达到250.00 μg/mL时,植株的生根数也受到显著抑制,在最高浓度500.00 μg/mL时,植株处于零生长,生长长度和生根数均为0,鲜重为负增长,达－0.77 g。本研究表明细交链孢菌酮酸具有开发为防除空心莲子草生物源除草剂的潜力。     

深州蜜桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究Ⅱ．侵染规律和发病诱因

桃树健康和枯死组织普遍带有链格孢，枯死组织带菌率更高。病菌侵染果实主要在盛花期至盛花后约４０ｄ这段时期，侵染高峰在花萎期（４月下旬）。空中孢子捕捉试验证明，当气温稳定在２０℃以上时（５月中旬以后），雨后空中孢子迅速增长，此期空中孢子量与侵染高峰有密切关系。密植树、幼树发病较轻、树下部发病较轻，６月中旬以后套袋对黑斑病发病率无明显影响。     

采自紫茎泽兰的5个链格孢菌菌株致病性和若干特征的比较

链格孢菌是紫茎泽兰的1种致病真菌。利用植物病理学方法和RAPD技术，比较研究了采自紫茎泽兰上的5个链格孢菌菌株的形态、遗传多样性、生长状况、致病性和产毒素能力。结果表明，5个菌株在上述5个方面均存在差异，其中，菌株501具生长速度快、致病性强和产毒素能力高等特点，PCR谱带也存在明显特征，被确定为最具潜力的菌株。此外，致病性与生长速度和产毒素能力存在一定的正相关性。     

链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立

【目的】链格孢菌（Alternaria alternate）苹果致病型是苹果上的重要致病菌,可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系,为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒,含有潮霉素抗性基因,并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因,这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中,然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化,转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选;在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况;用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后,对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后,能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测;采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中;用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数;在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100 μL孢子悬浮液（含10⁵孢子）涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36-48 h后,链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下,在4℃处理6 h,再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养,转化子在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选,转化效率较好,10⁷个分生孢子转化可获得约200个转化子。转化子经过5次继代培养,对潮霉素B的抗性没有改变。特异性引物PCR检测表明外源基因能够成功地整合到供试菌株的基因组中;Southern杂交表明外源基因多以单拷贝形式随机插入到链格孢苹果致病型菌株XP-1细胞的基因组中;转化子的菌丝和分生孢子在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光,说明荧光蛋白基因在菌丝及孢子中均能够成功表达。通过部分转化子的致病性试验,筛选获得数个在苹果果实和叶片上致病性都显著降低的菌株。【结论】建立了农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型稳定高效的分子转化体系,为进一步开展此病菌与其寄主的分子互作研究打下基础。     

柱花草和芒果胶孢炭疽菌的交互致病性研究

[目的]明确芒果和柱花草胶孢炭疽菌是否存在交互致病性。[方法]选用芒果和柱花草胶孢炭疽菌菌株各20株,通过人工接种方法对这些菌株在芒果和柱花草上的交互致病力进行研究。[结果]不同寄主来源的胶孢炭疽菌对不同寄主存在交互致病性,但致病力存在较大差别,对原寄主的致病性表现最强,而对原寄主以外寄主则表现出不同程度的致病力分化现象。[结论]该研究为预防芒果果园生草中交互感染提供理论依据。     

番红花链格孢菌的分离及其生物学特性研究

从番红花球茎中分离到一种新的内生真菌,经形态学和生长特性等研究初步鉴定其为半知菌类链格孢属链格孢Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissler.该菌能单独引起番红花球茎腐烂,与青霉菌互作时腐烂程度加重.环境和营养因子对该菌的生长繁殖影响较大:①在10～35℃时,菌丝能生长并形成孢子,最适生长繁殖温度为28℃,孢子的致死温度为65℃;②在pH为4.0～7.0时,菌丝生长、孢子形成和萌发均良好,最适pH值为6.0;③当空气相对湿度(RH)高于80%时,菌丝才能生长并形成孢子,RH高于85%,孢子才能萌发;④能直接利用葡萄糖和蔗糖,淀粉和甘油需分解后才能被良好利用;⑤氮源以有机态氮和硝态氮为佳,铵态氮对其生长繁殖有抑制作用.     

蛋白激发子产生菌链格孢(Alternaria spp.)JH505菌株分子系统学研究

在传统真菌形态学分类研究的基础上,运用遗传学、分子生物学研究手段,结合生物信息学方法对具有诱导植物增产抗病的蛋白激发子产生菌链格孢(Alternaria spp.)JH505菌株进行了分子系统学研究.克隆了该菌株长度为1 267bp的rDNA序列.结果表明,rDNA包含部分18S rRNA、28S rRNA序列及完整的5.8S rRNA、转录外间隔区(ITS1、ITS2)rRNA序列,与A.tenuissima、A.cinerariae、A.dianthi、A.brassicae、A.zinniae相应的rDNA分别具有100%、98%、97%、97%和96%的相似性.结合菌落形态、孢子特征以及rDNA分析.鉴定该菌株为细极链格孢菌(A.tenuissima).     

链格孢属(Alternaria Nees)与形态相似属区别的研究进展

本文从孢子形状、孢子梗形态和产孢方式上对链格孢属与匍柄霉属、单格孢属、小匙孢属和陷孢属进行了区别。     

培养基对链格孢属(Alternaria Nees)真菌种级形态分类特征影响的研究

通过对链格孢属(Alternaria Nees)12个种在自然寄主、PDA培养基、1/4PDA培养基、水洋菜麦秆培养基和滤纸培养基上的测定表明生长在自然寄主上的本属真菌形态特征典型,滤纸培养纸上的特征最接近自然培养基.分生孢子的着生方式,分生孢子隔膜,分生孢喙部形态和喙长与孢身长的比值等形态特征在不同培养基上生长相对稳定,可做为该属真菌形态分类的种级标准.     

小口枣黑斑病病原分离鉴定——链格孢属的初步研究

2012年从景泰县采集小口枣黑斑病病果样品,分别在PDA培养基、枣汁培养基、肉质胨培养基上对病原菌进行分离、纯化,统计和计算分离频率,观察菌落形态特征,共分离出三种菌:菌1,菌2,菌3。通过菌落形态、孢子形态的观察,鉴定出菌3为半知菌亚门链格孢属的Alternaria tenuis。进而测定菌3在PDA、肉质胨、枣汁培养基上的生长速率,以及菌3在不同培养基上的产孢量,从而得出菌3最适宜在PDA培养基上生长,同样在PDA培养基上产孢量最大。