鸡痘病毒PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于 FPV的检测     

禽痘病毒分子生物学 Ⅰ鸡痘病毒分子生物学概论

鸡瘟病毒（FPV）是禽症病毒的代表种，其基因组是线状双股且末端闭合的单个DNA分子，全长约300kb，是目前所知最大的动物病毒基因组。近年来随着人们对鸡瘟病毒载体兴趣的增加，PPV的分子生物学研究亦越来越受到重视，集中表现在对FPV基因排布规律、DNA末端的性质、mRNA转录的特点以及启动子的结构特点有了一定的认识并且分离到许多有意义的单一基因。由于这些研究都是在与瘟菌病毒（Vacciniavirus，VV）相比较的过程中进行的，因而谈及FPV的分子生物学必然离不开痘苗病毒。1FPV基因组的排布规律最早的鸡痘病毒基因组酶切图谱是…     

鸡痘病毒的分离鉴定

本试验对湖北省某鸡场疑为“白喉型”鸡痘的病鸡进行了取样及病毒的分离与鉴定。经 10日龄鸡胚尿囊膜连续传代 3次 ,进行病毒分离、电子显微镜观察、理化特性测定、包涵体检查、血凝性测定及回归鸡试验等 ,证明所分离的病毒是鸡痘病毒。1　材料和方法1.1　病　料　湖北省某蛋鸡场死鸡口腔、喉头气管部病变粘膜及气管组织。1.2　病毒分离　将病料剪碎 ,加灭菌细砂 ,在研磨器中充分研磨 ,用Ｈａｎｋ ｓ液配成 1∶5的混悬液 ,并加入青霉素 10 0 0 0ｕ/ｍｌ,水溶性氟哌酸 0 .3% ,将混悬液移入无菌瓶中并反复冻融 3次。 4℃下 ,将混悬液60 0 0ｒ/…     

鸡痘病毒的分离鉴定

利用鸡胚毛尿囊膜培养、透射电镜观察、包涵体检查及抗原检测，从某种鸡场发病鸡群的鸡冠部痘疹上分离鉴定出两株鸡痘病毒。两株病毒能在尿囊膜上形成痘斑和包涵体，病毒粒子大小为２５０×３５０ｎｍ，具有囊膜和血凝，对乙酰，氯仿和ＰＨ３敏感，５６℃３０ｍｉｎ可灭活，人工感染试验结果表明，两株病毒具有较强的致病性。     

检测鸡痘病毒抗体间接ELISA方法的建立

鸡痘是由鸡痘病毒(FPV)引起的鸡的一种接触性传染病,可引起鸡只大批死亡,尤其对雏鸡造成的损更严重失,使用疫苗进行免疫预防是控制本病的重要措施[1-2]。检测鸡血清中鸡痘抗体,可以了解疫苗免疫状况和机体感染情况。试验采用ELISA方法检测鸡痘病     

鸡痘病毒的人工感染试验

采用鸡冠划痕、翅膀内侧皮下刺种、羽毛囊涂抹，胫部皮下刺种、静脉注射和口腔投服等６种方法，成功地将鸡痘病毒ＭＬ株人工感染试验鸡，感染鸡潜伏期４－１３ｄ，主要表现皮肤及体表无羽毛部位出现痘疹，个别鸡在口腔喉头和气管粘膜及肺脏出现结节；这些痘疹和结节的典型组织学变化是上皮细胞增生，胞浆内可见嗜酸性包涵体。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点.     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法。应用该方法检测鸡痘阳性血清，其灵敏度为琼脂扩散试验的400～800倍，而且还具有特异性强、操作简便、快速等特点。     

鸡痘病毒PCR检测方法的建立及临床应用

根据已发表的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了(P3,P5)1对引物,通过对影响PCR扩增条件的优化,在不同的退火温度下,直接以病毒液为模板扩增出预期的1 107 bp的片段。特异性检测表明,两对引物对FPV102株、FPV282E4(北京)、大华农鸡痘疫苗毒株、重组鸡痘疫苗病毒及临床病料均能扩增出相应的特异性片段,而用鸡马立克氏病毒、传染性支气管炎病毒,鸽痘病毒及鸡胚成纤维细胞制备的模板进行PCR扩增均为阴性。敏感性检测表明,引物能检测0.195 ng/μL的模板量。用此方法检测50份临床样品,其中的阳性率为92%,用琼脂扩散试验方法检测的阳性率为70%。以上结果表明,该方法可以用于FPV临床样品的检测。     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

鸡痘病毒基因探针检测方法的建立及初步应用

利用PCR方法成功克隆了鸡痘病毒（Fowl poxvirus，FPV）4b核心蛋白基因549bp片段，序列分析表明，该序列与模板DNA（AF198100）碱基序列的同源性为99．45％，只有3个碱基差异，第215位由C→T，第386位由T→A，第388位由G→A。回收FPV4b核心蛋白基因549bp片段，以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测，结果显示其标记效率为100mg／L；敏感性检测表明，该探针对同源DNA的检出限量为10Pg；特异性检测结果表明，用本试验所标记的探针对提取的FPV282E4和FPV儿株DNA、重组质粒pMD 18-T-4b进行检测结果均呈阳性，而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均成阴性，说明该探针具有较强的特异性。初步应用表明，本试验所建立的FPV的基因探针检测法可用于FPV的检测。     

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗是由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所与哈尔滨维科生物技术公司经过多年的课题攻关，研制而成的世界上第一个传染性喉气管炎的活载体疫苗，该疫苗目前已经获得农业部颁发的新兽药(二类)证书(农业部公告第461号)，是世界上第一个达到国际疫苗应用标准，并且完全拥有自主知识产权的禽痘病毒活载体疫苗。     

鸡痘病毒诱发细胞融合现象的观察

鸡痘病毒在鸡胚绒毛作囊膜及鸡胚成纤维细胞上交替传代后，用本试验提供的条件，可以明显诱发鸡胚成纤维细胞的融合，形成多量多核细胞。经鸡胚及实验鸡回归试验证实，这种细胞融合现象确系鸡痘病毒所为。     

新型鸡痘病毒的分离与鉴定

鸡痘是鸡的一种急性、接触性传染病。本病在１８世纪以前一直是养禽业的主要传染病之一，世界上许多养禽地区几乎都曾流行过本病。过去我国农区亦常见有本病发生，但因普遍采用疫苗接种措施，鸡痘的发生率明显下降。近些年来，我国家禽饲养业发展迅猛，大中小规模及庭院养殖形式普遍存在，再加上饲养管理水平参差不齐，疾病控制能力高低不等，给疾病的发生与传播创造了条件，使疾病的种类及数量不断增多，过去已明显减少的疾病又卷土重来，给养鸡业造成了巨大损失。鸡痘即是其中典型事例之一。近些年，枣庄及周边地区鸡痘发生严重，除传统的…     

鸡球虫体外细胞培养的研究进展

鸡球虫体外细胞培养的研究进展宋翠平①沈永林综述汪志楷审校（南京农业大学动物医学院２１００９５鸡球虫病（Ｃｏｃｉｄｉｏｓｉｓｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓ）是由孢子虫纲（Ｓｐｏｒｚｏａｓｉｏｌ）真球虫目（Ｅｕｃｏｃｉｄｉｏｒｉｄａ）艾美耳科（Ｅｉｍｅｒｉｄａｅ）...     

鸡球虫体外细胞培养的研究进展

球虫的细胞培养是指在体外合适的细胞体系中培养球虫完成其发育过程的方法,该方法经过近50年的发展已逐步形成一种比较完备的体外培养技术,目前该技术已在球虫学研究中广泛应用。作者从鸡球虫体外培养的球虫种类及其发育阶段、细胞类型、影响因素及其应用等4个方面对这一技术研究作一简要综述。     

鸡痘病毒与巴氏杆菌混合感染

鸡痘是由鸡痘病毒引起的一种传染病，多发于秋季和初冬，吸血昆虫库蜢、蚊、蝇是其主要传播媒介，引起雏鸡和育成鸡发育受阻，产蛋率下降，若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时可引起大批死亡，特别是雏鸡死亡率高达50％，造成经济损失更为严重。本试验结合临床症状、病理变化和实验室检查诊断本次疫病是鸡痘病毒和巴氏杆菌混合感染。