冰核活性细菌拮抗菌株的筛选

 从多种植物根际土壤中分离到300个细菌分离物,通过含菌平板培养筛选出F015,F023,F046等近20株对冰核细菌具有较强的拮抗力,室内测定对冰核细菌病原物抑菌圈达0.8～3.0 cm. 挑选出F015,F023,F046进一步进行室内抗菌机理、菌株鉴定和室外田间小区实验。实验结果表明,菌株初步鉴定为芽孢杆菌（Bacillus spp.）和假单胞杆菌（Pseudomonas spp.）。其代谢产物蛋白质粗提物对冰核细菌的生长有明显的抑制作用。室外防霜效果在19.5％～36.9％,可有效地控制霜冻害的发生与危害,具有广阔的应用前景。     

山东马铃薯细菌病害研究

从山东省8个地区18个县市调查和采集766份马铃薯植株样本中,检出带病样本736份,分离到青枯假单孢菌菌株741个,环腐菌菌株269个,软腐欧氏杆菌菌株53个。青枯假单胞杆菌和环腐菌复合侵染同一植株。对34个青枯假单胞杆菌研究表明,它们分别属于生物型Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ以及另一新类型,在血清学上有差异。两个环腐菌菌株在MR试验和血清学上亦有差异,分别属于不同的菌系。8个软腐欧氏杆菌菌株经生化测定分别属于胡萝卜软腐欧氏杆菌黑胫变种和胡萝卜软腐欧氏杆菌胡萝卜变种。     

核盘菌菌核重寄生菌的分离筛选

从云南、四川、甘肃、陕西、山西、湖南、河北、北京、黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等12个省市(区)采集土样103份,采用室内菌核诱捕的方法分离得到了148个真菌菌株,分别属于12个属。其中黏帚霉属(Gliocladium spp.)77个菌株,包括4个种,占全部分离菌的52.03%,为优势种群;其次为青霉菌(Penicillium spp.)21个菌株,分离率为14.19%;镰刀菌(Fusarium spp.)16个菌株,占10.81%;木霉菌(Trichoderma spp.)13个菌株,占8.78%;轮枝菌(Verticillium spp.)8个,占5.41%。对其中寄生率较高的菌株进行回接,结果表明,黏帚霉和木霉寄生核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌核的能力强,接种1周后导致菌核腐烂,但不同菌株之间存在差异;而镰刀菌、轮枝菌对菌核的寄生能力较差。并且,首次用菌核诱捕的方法从云南省玉溪市烟草田土壤中分离获得了一株能寄生菌核的捕食线虫丝孢菌,经鉴定为椭圆单顶孢[Monacrosporium ellipsosporum(Preuss)Cooke&Dickinson]。     

马铃薯疮痂病拮抗菌株B1的鉴定及防效测定

对1株马铃薯疮痂病菌拮抗菌株B1进行了鉴定和盆栽防效试验.在采用皿内抑菌试验、管碟法确定了B1菌株对马铃薯疮痂病的抑制作用后,通过表型特征观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析,对菌株进行了鉴定.结果表明,该菌的形态和生理生化特征与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)一致,其16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌的同源性高达99％,因此将其鉴定为枯草芽孢杆菌.菌株B1的培养液经80％硫酸铵提取后,所得物质对部分马铃薯疮痂病菌也具有一定的拮抗作用.温室盆栽试验结果表明该菌株对马铃薯疮痂病防效较好.     

七株抗青枯病菌生防菌的初步鉴定

为了有效地利用有益微生物，对从湖南省23个烟草区62块烟地烟草根际和根表土壤以及苎麻土中分离筛选的7个抗青枯病菌而相互之间无颉抗作用的生防细菌菌株进行了细菌学性状的研究和DNA（G＋C）含量测定。初步鉴定出这7个菌株分别为：23－3为真养产碱菌（Alcaligene eutrophus)；湘1－2为不动杆菌（Acinetobactersp.)；湘2－3为蜡质芽胞杆菌（Bacillus cereus)；弯2－2为欧文氏菌属的一种（Erwinia sp.)；弯2－4为气单胞菌属的一种（Aeromonas sp.)；2－轻－9为侧胞芽孢杆菌（Bacillus.laterosporus)；1－1－8为黄杆菌属的一种（Flavobacter sp.)。     

嗜碱假单胞菌Ej2对稻瘟病的防治效果及对水稻内源激素的影响

[目的]明确水稻内生菌嗜碱假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)菌株Ej2对镰孢菌(Fusarium spp.)等病原菌的抑菌效果,重点研究对稻瘟病的防治作用及对水稻内源激素的影响,为稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)杀菌剂的研发提供新的生防菌资源.[方法]嗜碱假单胞菌菌株Ej2分离于水...     

薄皮甜瓜采后病害生防菌株的筛选及鉴定

[目的]从薄皮甜瓜体表分离筛选对引起薄皮甜瓜采后病害主要病原真菌具有拮抗作用的生防菌株,并对其进行鉴定确定分类地位,为薄皮甜瓜采后病害的防治提供高效菌株.[方法]采用活体生测的方法从甜瓜瓜表筛选生防菌株,利用非寄养非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒（比色法）API 20 NE自动鉴定系统测定菌株C3的生理生化指标.[结果]从甜瓜表面分离筛选出2株对粉红单端孢（Trichothecium roseum）防治效果达80％以上的生防菌株C3、B3;通过平板对峙试验表明,菌株C3对引起采后病害的2种病原菌粉红单端孢（Trichothecium roseum）和镰刀菌（Fusarium spp.）的抑菌能力均优于B3;菌株C3对粉红单端孢（Trichothecium roseum）的抑菌效果较好,达到67.7％;对镰刀菌（Fusarium spp.）的抑菌率次之,为27.9％;应用API 20 NE系统分析,通过形态学观察、革兰氏染色将菌株C3初步鉴定为浅黄假单胞菌Pseudomonas luteola.[结论]从甜瓜表面分离筛选获得1株生防菌株C3,该菌株对引起薄皮甜瓜采摘后病害的主要病原菌粉红单端孢（Trichothecium roseum）具有较强的拮抗作用,并初步鉴定为浅黄假单胞菌（Pseudomonas luteola）.     

烟草根际溶磷解钾细菌的筛选鉴定及对烟草的促生作用

本试验以山东潍坊烟田土壤为研究对象,对其根际溶磷解钾细菌进行筛选鉴定并分析该类细菌对烟草生长的影响。结果显示:(1)从山东潍坊烟田土壤样品分离得到34个细菌分离物。以烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica)和烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)为指示菌,筛选出对2种病原菌有良好拮抗效果的菌株13株。(2)测定发现8株菌株具有良好的溶磷能力,菌株培养液中可溶性磷含量最高为241mg/L。5株菌株具有解钾能力,菌株培养液中速效钾含量最高为13.95 mg/L。5株菌株具有产IAA能力,最高IAA产量为104.71μg/mL。(3)菌株H1-2、3183可明显促进烟草生长,其浇灌后的烟草地上部和地下部鲜重均高于对照。(4)经16S r DNA序列系统进化分析得出,菌株3183和1441为贝莱思茅芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株H1-2为多黏类芽孢杆菌(Peanibacillus polymyxa),菌株G2-7和D2为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia spp.)。     

马铃薯内生促生菌的促生长作用

1998年从马铃薯块茎内分离到两个菌株A-10'和H1-6。经鉴定,分别为芽孢杆菌(Bacil lus)和荧光假单胞菌(Pfluorescensbiovar)。连续3年大田和温室试验表明,这两个菌株在马铃薯植株的高度、茎粗、地下块茎及大薯率的提高等各项指标上均明显优于对照,说明其促生作用明显而稳定。进一步研究发现,H1-6作用强弱与其定殖力呈正相关。     

番茄青枯病病菌无致病力菌株的分离和控病研究

实验从有青枯病的番茄茎中分离出198株无致病力青枯菌,室内平板喷雾法拮抗试验表明,有39个菌株在PSA培养基上可明显抑制青枯菌Bs 01～05的生长,采用番茄"合作903"品种对这39株平板拮抗菌进行温室盆栽试验,最终筛选出2株(100,134)表现较好的控病效果,其20 d后的防效分别为43%和47%.     

复合菌剂防治马铃薯青枯病研究*

 通过室内生防菌株的亲合性、抑菌研究,筛选出复合菌剂1(C₃∶Xa以1∶1混配)和复合菌剂2(Ynb01∶1J’以5∶1混配),表现抑菌效果增强、稳定的2组生防制剂。温室试验中,复合菌剂马铃薯青枯病的防治效果高于各自复配的单一菌株。田间小区防效试验表明复合菌剂2防治效果最为显著,平均防效为83.3%,高于单菌剂Ynb01,1J’,C₃,Xa和复合菌剂1及参试药剂3%克菌康WP,其防治效果分别为68.5%,54.3 %,32%,39%,41.5%,31.6%。     

Expression,Characterization and Antimicrobial Ability of a Variant T4 Lysozyme in Pichia pastoris

T4 lysozyme was engineered with disulfide bonds and expressed in Pichia pastoris. The secreted proteins were purified and made into powder by lyophiliza-tion. Recombinant protein purity was more than 70% measured by HPLC. The lytic activity of variant T4-lysozyme was measured by the lysis of the cel wal of Xan-thomonas oryzae pv. oryzae, X. oryzae pv. oryzicola, Ralstonia solanacearum comb. nov, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, X. campestris pv. mal-vacearum, Fusarium oxysporium sp. vasinfectum, Verticil ium dahliae kleb. Inhibition zone assay showed that variant T4 lysozyme significantly inhibited X. o. oryzicola and X. c. malvacearum. The antifungal activities of this protein against F. o. vasin-fectum and V. d. kleb were also analyzed.     

Expression,Characterization and Antimicrobial Ability of a Variant T4 Lysozyme in Pichia pastoris

T4 lysozyme was engineered with disulfide bonds and expressed in Pichia pastoris. The secreted proteins were purified and made into powder by lyophilization. Recombinant protein purity was more than 70% measured by HPLC. The lytic activity of variant T4-lysozyme was measured by the lysis of the cell wall of Xanthomonas oryzae pv. oryzae, X. oryzae pv. oryzicola, Ralstonia solanacearum comb.nov, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, X. campestris pv. malvacearum, Fusarium oxysporium sp. vasinfectum, Verticillium dahliae kleb. Inhibition zone assay showed that variant T4 lysozyme significantly inhibited X. o. oryzicola and X. c. malvacearum. The antifungal activities of this protein against F. o. vasinfectum and V. d. kleb were also analyzed.     

蔬菜根际细菌R2–2的鉴定及其抑菌活性

从云南昆明市郊蔬菜根际分离细菌,经平板对峙培养筛选出1株抑菌能力较强的菌株R2-2,通过对其进行形态观察、Biolog微生物自动鉴定系鉴定和16S rDNA序列测定及其系统发育学分析,鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。对R2-2与植物病原细菌(甘蓝黑腐病菌、魔芋细菌性软腐病菌、海棠斑点病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌)和病原真菌(疫霉菌、尖镰孢菌、茄镰孢菌、立枯丝核菌)进行对峙试验,结果显示,R2-2对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌有较强的抑菌效果,抑菌圈直径分别达6.83 cm和7.03 cm。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为JN648098。     

拌种灵对植物病原细菌的抑菌活性

在离体条件下，采用浑浊度法测定病原菌的生长量，结果表明，拌种灵对稻白叶枯病菌，稻细菌性条斑病菌，柑桔溃疡病菌及大豆斑疹病菌的有效抑制中浓度分别为0．5745，1．3026，2．6257和7．4970ug.mL^-1，对丁香假单胞病菌，番茄青枯病菌和白菜软腐病菌基本无效，抖种灵对柑桔溃疡病菌的抑菌作用稍优于萎锈灵和噻枯唑，但低于浸种灵和硫酸链霉素，偏酸或偏碱的环境不影响抖种灵的抑菌作用，拌种灵能够抑制柑桔溃疡病菌菌体内葡萄糖的氧化代谢，拌种灵对病原细菌的作用机理有待进一步研究。     

枯草杆菌B826的化学诱变及筛选研究

枯草杆菌Ｂ８２６（ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢ８２６）是一株对水稻白叶枯病菌有强烈拮抗作用的细菌．本研究测定了枯草杆菌Ｂ８２６的对数生长曲线并利用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）处理对数生长期的细胞,获得了１６０个存活的菌株,其中６个菌仍保留拮抗活性或拮抗活性有所提高,其余的均丧失拮抗活性．突变菌Ｎｏ．３５能稳定地保持高效的拮抗活性和遗传．     

拮抗细菌Bacillus subtilis A30对水稻病原菌的抑制作用

由杭州郊区水稻叶围分离得到ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡ３０菌株，平板检测表明它对Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ和Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ等多种水稻病原真菌、病原细菌均有很好的拮抗作用．以水稻白叶枯病、水稻纹枯病为代表进行小区试验，结果表明，Ａ３０菌株的防病效果分别为５８．１％和３９．０％．Ａ３０菌株的培养去菌液经７０％饱和度（ＮＨ４）２ＳＯ４处理，拮抗物可被（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，其拮抗粗提液经Ｄｉｏｌ１５０及ｐｒｏＲＰＣＨＲ５／１０等色谱柱分离得到两种对Ｘ．ｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ的拮抗峰和两种对Ｒ．ｓｏｌａｎｉ的拮抗峰．     

水稻细菌性条斑病菌DNA多态性与致病性研究

利用６０个随机引物对来自我国不同稻区的水稻细菌性条斑病菌株基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,其中２０个引物均出现清晰和重复性的ＤＮＡ扩增片段,扩增片段大小在０．５ｋｂ至３．５ｋｂ;应用Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ软件ＵＰＧＭＡ程序进行树状聚类分析,聚类结果表明,我国水稻细菌性条斑病菌具有明显的遗传分化,在遗传距离为０．３０时,供试菌株可划分为７个遗传相似组（谱系）。其中第１、第２和第５组为优势组群,分别由７、８、６个菌株组成。根据菌株在１２个已知基因品种上的抗感反应,将供试菌株分为１３个致病型,在遗传距离为０．５０水平上聚类归属于６个簇。菌株的致病类群与其ＤＮＡ的遗传变异具有弱相关性。     

消毒剂对烟草漂浮育苗材料表面青枯雷尔氏菌的杀灭作用*

 为了指导烟草漂浮育苗消毒剂使用,通过载体表面菌落杀灭试验,测定了10种消毒剂对聚苯乙烯泡沫苗盘、聚氯乙烯塑料膜和不锈钢刀片表面的青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacoarum,简称青枯菌）的杀灭效果。结果表明,除98％磷酸三钠300 mg/L和24％混脂酸铜80 mg/L对青枯菌几乎没有杀灭作用外,其余消毒剂具有较好的杀灭效果。在聚苯乙烯泡沫苗盘、聚氯乙烯塑料池膜和不锈钢刀片表面,8种消毒剂的90％致死剂量（EC₉₀）差异大,30％有效氯漂白粉为96.4～145.7 mg/L,7％有效氯次氯酸钠为53.7～215.3 mg/L,美国消毒剂为26.2～83.5 mg/L,98％硫酸铜·5H₂O 为93.8～114.0 mg/L; 98％高锰酸钾为14.8～163.0 mg/L;40％育宝为247.7～404.6 mg/L;10％二氧化氯（维绿）为185.7～472.9 mg/L;0.6％菌毒净为101.6～441.0 mg/L。消毒剂的使用剂量需要根据表面材料种类选择。