大蒜脱毒及病毒检测技术研究进展

大蒜(Allium sativum L.)是一种在世界上广泛种植的蔬菜作物。不仅营养丰富,而且还能入药。然而由于大蒜长期进行无性繁殖,导致病毒病普遍发生,给生产造成极大的损失。大蒜感染病毒后鳞茎一般退化变小,使产量和品质大大降低,给生产消费和出口创汇带来严重的障碍。大蒜主要利用鳞茎进行无性繁殖,因此病毒极易通过种蒜传播积累,并逐代加重,严重影响其品质和产量。在生产中,影响大蒜的病毒有:洋葱黄矮病毒(OYDV)、韭葱黄条纹病毒(LYSV)、青葱潜隐病毒(SLV)、大蒜花叶病毒(GMV)、大蒜普通潜隐病毒(GCLV)、洋葱螨传潜隐病毒(OmbLV)、马…     

黑龙江省分蘖洋葱病毒病及综合防治

分蘖洋葱 (ＡｌｌｉｕｍｃｅｐａＬ .Ｖａｒ.ＭｕｌｔｉｐｌｃａｎｓＢａｉ ｌｅｙ) 〔1〕俗称毛葱 ,是黑龙江省传统的农家品种。其食疗价值很高 ,在东南亚市场需求量较大。但由于病毒的侵染 ,造成植株长势弱 ,矮化畸形 ,分蘖减少 ,葱头退化变小 ,致使产量和品质大幅度降低 ,给生产消费和出口创汇带来了严重障碍。为明确黑龙江省分蘖洋葱病毒病病原种类 ,笔者自 1999年 5月起 ,对分蘖洋葱病毒病进行了系统的调查研究 ,初步明确了侵染分蘖洋葱的病毒种类。同时进行组培脱毒技术研究 ,探讨脱毒分蘖洋葱速繁途径 ,为该病害的综合防治提供了理论…     

云南省番茄莴苣褪绿病毒分子检测及遗传进化分析

采集了77份云南省疑似感染莴苣褪绿病毒(lettuce chlorosis virus,LCV)的番茄样本,采用特异性反转录PCR扩增LCV次要外壳蛋白基因(minor coat protein,CPm)近全长序列,常规Sanger测序法测定相应片段序列,并对其进行遗传进化分析.结果 表明,LCV特异性反转录PCR扩增...     

柑橘碎叶病毒巢式RT-PCR检测方法建立及应用

柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leafvius,CTLV)是威胁柑橘生产的重要病原之-.本研究在柑橘碎叶病毒-步法RT-PCR检测体系的基础上建立了CTLV的巢式RT-PCR检测方法,并对其检测灵敏度及特异性进行了分析.结果表明,该方法检测灵敏度比一步法RT-PCR至少提高100倍,检测模板总核酸的最低浓度...     

宁夏银川地区番茄斑萎病毒和南方番茄病毒复合侵染分子鉴定

2021年在宁夏银川地区病害调查时发现番茄植株茎秆和未成熟果实上出现了褐色、不规则形病斑等疑似病毒病的症状.采用Trizol法提取番茄病株样品的总RNA,使用常见侵染番茄的病毒特异性引物进行RT-PCR检测.结果显示:番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)和南方番茄病毒(south...     

运用实时荧光RT-PCR技术检测柑橘碎叶病毒

柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异性、灵敏性和适用性进行了测试。结果表明,该检测体系能特异的检出CTLV,对测试的衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒都不能检出;灵敏度比常规PCR高100倍;适用性广,可检测出多种柑橘类植物中的CTLV。实时荧光RT-PCR检测整个过程完全闭管,无需PCR后处理,且SYBR GreenI荧光染料成本较低,适用于检测柑橘体内含量较低的CTLV病毒。     

北京地区南瓜病毒病病原种类鉴定

为明确北京地区南瓜病毒病种类及其主要侵染病原,2016~2017年在北京周边采集疑似感染病毒的南瓜病样84份,并根据南瓜上的6种病毒特异性引物对其进行反转录PCR(RT-PCR)检测。结果表明:共有79份南瓜病样检测显示阳性,其中黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的检出率最高,为52.38%;其次是小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV),检出率分别为44.01%、14.29%,其他病毒暂未检出。此外,16.67%的样品受2种病毒复合侵染,CMV和ZYMV复合侵染占7.14%,ZYMV和WMV复合侵染占9.52%。北京地区南瓜上优势病毒种类为CMV,且存在病毒复合侵染现象。     

三种百香果病毒在贵州的发生分布

前期利用高通量测序鉴定了侵染贵州百香果的3种病毒,为了解其分布情况,本研究采集贵州省镇宁县、贞丰县、关岭县和罗甸县4个百香果主产区疑似感病样品105份,利用RT-PCR方法检测病毒分布情况。结果表明,该方法扩增产物清晰,且特异性和灵敏度较高。夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus,TeMV)检出率最高,为100%;东亚西番莲病毒(East Asian passiflora virus,EAPV)和西番莲潜隐病毒(Passiflora latent carlavirus,PLV)检出率分别为81.9%和74.3%。说明贵州4个主产区的百香果均受到不同程度的病毒侵染,且部分地区病毒侵染情况严重。     

番茄黑环病毒液相芯片快速检测方法的建立

为建立番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)的液相芯片检测技术,对GenBank中的TBRV核苷酸序列进行分析,设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与TBRV的RT-PCR产物进行杂交,用液相芯片检测仪检测荧光信号。结果表明:建立的方法具有良好的特异性,能够有效区分侵染马铃薯的TBRV、马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)、马铃薯A病毒(PVA)及番茄斑萎病毒(TSWV);检测灵敏度约为1pg/μL总RNA,与常规RT-PCR灵敏度相当。实际样品检测结果表明该方法可用于TBRV的日常检测。     

不同贮藏温度下白皮洋葱鳞茎生化指标的比较

以白皮洋葱鳞茎为试材,研究了在室温、15、5℃条件下贮藏7、30、60、90 d对白皮洋葱鳞茎的可溶性蛋白含量(SPC)、可溶性糖含量(SSC)、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物岐化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性等生化指标的影响.结果表明:白皮洋葱鳞茎的可溶性蛋白含量(SPC)、可溶性糖含量(SSC)、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物岐化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性发生了改变,可作为洋葱鳞茎贮藏性检测的指标;鳞茎腐烂数在5、15℃和室温的贮藏条件下达到0.01和0.05差异水平,酶的活性稳定,5℃的贮藏温度最有利于白皮洋葱鳞茎的贮藏.     

蓝莓休克病毒的RT-PCR快速检测方法建立

以蓝莓叶片为试材,提取病毒RNA,根据已报道的蓝莓休克病毒(Blueberry shock virus,BlShV)外壳蛋白基因序列设计特异性引物,建立RT-PCR快速检测方法,并对采集的20份疑似病例进行检测。结果表明:建立的RT-PCR方法具有良好的特异性和较高的灵敏度。仅从感染BlShV的样品中扩增出与预期大小相符的特异性目的片段,而从其它蓝莓病毒及健康样品中未扩增到目的片段;该方法能检测到RNA原液的10-4倍稀释液,灵敏度较高。疑似病例检测结果与ELISA验证结果完全相符。试验表明,建立的RT-PCR方法能够用于BlShV的现地检测。     

柑橘黄化脉明病毒和衰退病毒的二重RT-PCR检测体系的建立与应用

选用柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)两种病毒外壳蛋白保守序列及内参基因Ubiquitin的特异性引物,优化影响二重RT-PCR反应的Mg~(2+)浓度、dNTPs浓度、引物浓度和退火温度,建立了针对两种病毒的一步法二重RT-PCR检测体系。二重RT-PCR获得CYVCV、CTV及Ubiquitin的特异性片段大小分别为614、373和194 bp,克隆测序和序列对比结果显示它们与已报道的病毒序列具有较高的同源性。该体系最低能从40 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CYVCV,从4 ng·μL~(-1)总核酸中检测出CTV,其灵敏度与单一RT-PCR检测灵敏度一致。利用该体系对33份田间样品进行检测,CYVCV和CTV感染率分别为54.5%和66.7%,复合侵染率高达36.4%。该一步法二重RT-PCR技术体系可用于大量田间样品中CYVCV和CTV的快速同步检测。     

侵染番茄的曲叶病毒检测及遗传变异分析

2017—2019年,从甘肃、广西、海南、河北和云南5个省份番茄主产区采集疑似感染曲叶病毒的番茄病叶,进行曲叶病毒检出率分析及种类鉴定.特异性PCR检测结果表明,5个省份曲叶病毒平均检出率为25.00%,其中广西最高,达到50.91%.PCR扩增序列同源性比对结果表明,侵染5个省份番茄的曲叶病毒为中国番木瓜曲叶病毒(p...     

蚕豆萎蔫病毒2号青海辣椒分离物的鉴定与全基因组序列克隆

对青海省循化县的辣椒病毒病进行调查,采集到部分叶片表现萎蔫和皱缩症状的样品,该症状与蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)引起的症状相似。为准确鉴定是否为与该病害相关的病毒,将采集的20个辣椒样品用特异性引物进行RT-PCR检测,其中13个样品检测结果为阳性。在20份循化县辣椒样品中,有13份样品被确认感染了蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)。基于核苷酸序列的系统发育分析表明,检测到的病毒与BBWV2聚类在一起,与其他地区或国家分离物的序列一致性较高,与蚕豆萎蔫病毒1(BBWV1)和野芝麻轻型花叶病毒(LMMV)分离物的序列一致性相对较低。结果表明该辣椒样品感染的病毒是BBWV2。     

柑橘褪绿矮化相关病毒LAMP检测体系的建立

根据GenBank登录的柑橘褪绿矮化相关病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)的移动蛋白(MP)基因序列设计了一组特异性引物,经体系优化,建立了CCDaV的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示该方法能特异扩增CCDaV,与其他5种柑橘病原物(柑橘衰退病毒、柑橘碎叶病毒、柑橘裂皮病类病毒、温州蜜柑萎缩病毒和柑橘黄龙病菌)不发生反应;灵敏度为PCR的100倍,与实时荧光PCR的灵敏度相同。用LAMP方法对50个田间样品进行检测,与PCR和实时荧光PCR的检测结果一致,证明该方法可用于田间样品的检测。该LAMP检测方法可特异、灵敏、快速地对CCDaV样品进行检测。     

甜瓜黄斑病毒(MYSV)RT-LAMP快速检测方法的建立

根据甜瓜黄斑病毒(Melon yellow spot virus,MYSV)N基因的保守序列设计3组特异引物对,通过一系列优化,筛选并获得1组特异引物,建立了MYSV的RT-LAMP检测方法。该方法可在62~64℃,45 min内完成对样品的检测,并且能够特异性扩增MYSV,灵敏度为RT-PCR的100倍,特异性强,灵敏度高,适合对MYSV病样快速检测与鉴定。     

苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立

【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。     

钾肥对洋葱产量与品质的影响

本市丁桥地区土壤缺钾十分严重,成为新菜区建设的一大限制因素.为了解土壤钾素含量状况及其演变规律,探索合适的钾肥种类和施钾水平,更好地为当地蔬菜生产服务,特进行此项试验.试验方法(一)设计方案试验田间设计采用拉丁方和裂区相结合,小区钾肥施用水平及编码见表1.     

基于TaqMan MGB探针的李痘病毒分子检测

李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国对外检疫性有害生物。研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白(coatprotein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan MGB分子探针的PPV实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PPV的2个主要流行株系M株系与D株系,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为14.96和18.22;而对于马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比双抗体夹心酶联免疫检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PPV的检测。