烟草环斑病毒研究进展

烟草环斑病毒是豇豆花叶病毒科线虫传多面体病毒属的代表种,是豆类、瓜类、花卉、果树和烟草等重要经济作物病害的病原,分布于美国、加拿大、英国、日本等欧、亚、美、澳和非洲的50多个国家,在我国局部分布,是我国公布的二类进境检疫有害生物。从生物学特性、血清学与株系、检测方法、防治等方面对该病毒的最新研究进展作了综述。     

应用复合RT-PCR同时检测烟草环斑病毒和番茄环斑病毒

将烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus)和番茄环斑病毒(Tom ato ringspot virus)的CP基因及RNA2基因序列引物,合成特异性RT-PCR检测引物,对烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的感病植物组织进行了PCR扩增反应,结果显示,感染了烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的植物组织的PCR产物均出现600 bp和470 bp特异性扩增条带,而其他病毒均未出现扩增条带,证明这两对引物具有烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的鉴定特异性。将提取的烟草环斑病毒和番茄环斑病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果显示,此体系最低可检出烟草环斑病毒和番茄环斑病毒提取的RNA模板浓度为234 pg/μl和264 pg/μl。表明,复合RT-PCR是一种可同时检测烟草环斑病毒和番茄环斑病毒的快速检测方法。     

烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物.建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障.本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、...     

应用分子生物学方法快速检测烟草环斑病毒

根据烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus)CP基因序列,设计并合成了特异性RT-PCR扩增引物,对烟草环斑病毒和非烟草环斑病毒的感病植物组织样本进行了PCR扩增反应。结果,烟草环斑病毒的感病植物组织样本的PCR产物均出现1 760 bp的特异性扩增条带,而非感病植株组织样本均未出现扩增条带,证明该合成引物具有烟草环斑病毒鉴定特异性。将提取的烟草环斑病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果可检出烟草环斑病毒RNA模板最低浓度为234 pg/μl。研究表明,分子生物学测定具有特异性强、灵敏度高、快速准确的特点,可应用于烟草环斑病毒检疫的快速检测。     

RT-PCR方法检测烟草环斑病毒的研究

 根据烟草环斑病毒（TRSV）外壳蛋白基因非编序列设计的引物P1,P2,用感病及健康组织总RNA为模板,进行cDNA 合成和PCR试验,感病组织中扩增出了600 bp的目的片段,而健康组织中无此扩增带。摸索各项实验条件,建立了RT-PCR检测烟草环斑病毒（TRSV）的方法。     

番木瓜环斑病毒株系的生物学和血清学研究

本文对华南地区番木瓜环斑病毒的Ｙｓ，Ｖｂ和Ｓｍ３个株系和夏威夷ＨＡ５－１弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了ＰＲＶ在华南地区至少有３个株系。在株系间亲缘关系方面，华财３个株系间的关系较密切，而与ＨＡ５－１株系的较疏远。在西葫芦植株体内增殖和运转，Ｓｍ株系病毒增殖和运转最快，在体内的浓度最高；Ｖｂ次之；Ｙｓ再次之；而ＨＡ５－１则更次之。     

烟草环斑病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法研究

根据TRSV CP基因的保守序列设计引物,RT-PCR和IC-RT-PCR能从TRSV的2个分离物中分别扩增到与预期大小相同的DNA条带,序列测定和分析表明所扩增序列为TRSV CP基因的部分序列,在系统关系树上与TRSV的其他分离物形成一簇,表明所建立的RT-PCR和IC-RT-PCR检测方法是可靠的。     

基于抗原表位烟草环斑病毒单克隆抗体的制备

基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。     

侵染西瓜的烟草花叶病毒(TMV)的生物学种类鉴定

从西瓜上分离到病毒分离物XC -3 ,此分离物经人工接种可侵染茄科、葫芦科、苋科、藜科的 16种植物。钝化温度为 96℃ ,稀释限点 10 - 6 ～ 10 - 7,病毒汁液在室温下保存 5 5d以上仍有侵染活性 ,分离物粒体杆状 ,长 3 0 0nm ,宽 18nm ,提纯病毒的紫外线最高吸收峰在 2 60nm ,最小吸收峰在 2 5 0nm ,A2 80 /A2 6 0 =0 .86。经琼脂扩散反应、ELISA检测 ,分离物与TMV的抗血清均呈阳性反应 ,分离物XC -3可能为TMV的一个株系。经过ELISA检测该分离物在安徽省西瓜病样分离物中占 8.65 %。     

一步法RT-PCR检测烟草环斑病毒试剂盒的研制与应用

根据烟草环斑病毒基因组序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术研制成一步法检测该病毒的试剂盒,并建立了操作程序。对试剂盒扩增到的预期产物进行测序验证,产物序列与目的序列间的同源性为97.8%,表明该试剂盒的准确性较高。试验结果还表明,该试剂盒在常温、4℃和-20℃下可分别保存2d、7d和60d;灵敏度是DAS-ELISA的100倍;质量控制试验结果一致,具有较高的重复性。     

华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系调查鉴定

根据田间调查、病毒粒子和内含体形态，血清反应，寄主范围和症状，昆虫介体，物理性质，潜育期等试验结果，认为华南４省区的番木瓜病毒病只有ＰＲＶ一种，根据在西葫芦上的症状特点，将ＰＲＶ初步区分为４个株系，即Ｙｓ，Ｖｂ，Ｓｍ和Ｌｃ。在３１３份标样中，它们单独所占比例分别为４０．５７％，１０．２２％，０．６４％，４．４７％Ｙｓ＋Ｖｂ（复合侵染）占４４．０８％这表明Ｙｓ为优势株系，Ｖｂ次之，Ｌｃ和Ｓｍ发生少分     

华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定

根据田间调查、病毒粒子和内含体形态、血清反应、寄主范围和症状、昆虫介体、物理性质、潜育期等试验结果、认为华南４省区的番木瓜病毒病只有ＰＲＶ一种。根据在西葫芦上的症状特点，将ＰＲＶ初步区分为４个株系，即Ｙｓ、Ｖｂ、Ｓｍ和Ｌｃ。在３１３份标样中，它们单独所占比例分别为４０．５７％，１０．２２％，０．６４％，４．４７％，Ｙｓ＋Ｖｂ（复合侵染）占４４．０８％，这表明Ｙｓ为优势株系，Ｖｂ次之，Ｌｃ和Ｓｍ发生少分布不广。研究结果还表明，以前有人报道的ＰＭａＬＶ实则是本研究的Ｖｂ，而不是一个新病毒。     

华南地区番木瓜环斑病毒和畸型花叶病毒调查鉴定研究

调查鉴定了广州、南宁、厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类，发现都是由番木瓜环斑病毒引起的，未发现番木瓜畸型花叶病毒。     

胶体金免疫层析试纸结合RT-PCR法快速检测烟草环斑病毒

利用烟草环斑病毒胶体金免疫层析检测试纸条,对烟草环斑病毒3个分离物进行了快速检测。结果表明,试纸条在10min内,可特异性检出烟草环斑病毒的3个分离物,对番茄环斑病毒、南芥菜花叶病毒、番茄黑环病毒和健康叶片无反应。剪下试纸条上显示的检测带,进行RT—PCR,能扩增到与预期大小相同的DNA条带。试纸条检测烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg·mL^-1,试纸条检测烟草环斑病毒的病汁液,检测灵敏度在10^-3（W／V）,试纸条检测灵敏度与DAS—ELISA方法灵敏度基本相同。     

大豆种传南方菜豆花叶病毒和烟草环斑病毒的GICA-RT-PCR检测

南方菜豆花叶病毒(south bean mosaic virus,SBMV)和烟草环斑病毒(tobacco ringspot virus,TRSV)是我国重要的进境检疫性有害生物,两种病毒均为种传病毒,可随大豆种子实现远距离传播.本研究以这两种病毒的大豆病种子为试材,先用胶体金免疫层析试纸条(GICA)检测,将检测完病毒后的胶体金免疫层析试纸条上的T线和C线剪下,再用RT-PCR的方法将T线和C线上捕获的病毒直接进行扩增,这种将血清学与分子生物学相结合起来所建立的GICA-RT-PCR检测方法,省去了烦琐的总RNA提取的环节,简化了病毒检测的步骤,提高了检测的灵敏度.     

番木瓜环斑病毒的提纯研究

详细报道了影响番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）粗提纯效果的几个主要因素（繁殖寄主种类，有机澄清剂，分散剂，病毒浓缩前的去渣离心力，浓缩病毒的超离心力等）的最佳选择，繁殖寄主以角葫瓜最好。该研究综合上述最佳选择而拟定的一次差速离心和一次３０％蔗糖硫酸连续密度梯度离心３ｈ的简单程序较好地提供了ＰＲＶ提纯的病毒有典型核蛋白紫外吸收曲线，Ａ２６０／Ａ２８０＝１．６８，提纯产量为２．５６ｍｇ／１００ｇ西葫芦病叶，所     

铝毒对大豆农艺性状的影响

以3个大豆品种为材料,采用水培法研究了铝毒胁迫对大豆农艺性状的影响.结果表明,铝毒胁迫抑制了大豆根系的生长,降低了株高,单株干重下降.根据所计算的耐铝毒系数,3个大豆品种的耐铝毒能力为浙春3号＞浙秋3号＞华春18.     

烟草环斑病毒外壳蛋白基因片段原核表达载体的构建及表达

根据烟草环斑病毒外壳蛋白(TRSV-CP)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,获得烟草环斑病毒基因组中编码外壳蛋白部分基因片段,将其插入原核表达载体pET28a中,获得重组表达质粒pET-CP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导蛋白大量表达.重组蛋白经过Ni -NTA纯化后,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,TRSV-CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子质量约为34ku,并具有免疫学活性.以纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,多抗血清效价达1:409600,可以与重组蛋白发生抗原抗体反应.     

新疆杏部分生物学性状的鉴定

<正> 为了给生产和科研提供优良的杏品种资源,我们于1991和1992年在新疆部分杏产区对57个杏品种的物候期、低温需要量、果实性状和矮化特性等进行了鉴定,确定了一批早熟、晚熟、座果率高、大果、仁肉兼用型、高糖、高维生素C含量和矮化等杏资源。1 材料与方法