科技进展

调查人用疫苗中猪圆环病毒污染情况在两个人用轮状病毒疫苗中发现了猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)的基因,我们继续调查PCV1的基     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV）是迄今发现的最小的动物病毒之一。PCV具有PCV1和PCV2两种基因型。PCV1无致病性。PCV2有致病性,它不仅是断奶猪多系统衰竭综合症（Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原（Bolin等，2001；McNeilly等，2001），     

重组伪狂犬病病毒SA215(C)株的构建及其对小鼠的免疫原性

为了研制猪2型圆环病毒（PCV2）基因工程疫苗,以伪狂犬病病毒（PRV）基因缺失疫苗株SA215为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达PCV2ORF2基因和绿色荧光蛋白基因重组伪狂犬病病毒SA215（C）株。经PCR、Southern blotting、Western blotting等证实SA215（C）构建正确,并能表达具有活性的ORF2基因蛋白和荧光蛋白。SA215（C）在IBRS-2、ST细胞中的增殖滴度与亲本株SA215相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响病毒增殖。用SA215（C）免疫BALB/c小鼠10周后检测免疫小鼠PCV2抗体和PRV中和抗体及细胞免疫反应。结果显示,SA215（C）诱导小鼠产生了PCV2和PRV抗体并出现PCV2的细胞免疫反应。另外,以105TCID50的SA215（C）株接种BALB/c小鼠,接种后28d再接种1次,2次接种后2周,用107TCID50PRVFa和PCV2强毒联合进行攻击,结果免疫小鼠抵抗住强毒的攻击,获得了保护;表明该毒株具有很强的免疫原性,为研制安全、有效的PCV2-PRV二价基因工程疫苗奠定了基础。     

FLEX系列茵格发猪圆环病毒疫苗免疫预防韩国单点生产猪场猪圆环病毒相关疾病的效果研究

猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）是猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）的病原。猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）也叫做断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）。开发有效的猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）疫苗是控制猪圆环病毒相关疾病（PCVAD）的重要环节。高死亡率和高动保开销导致的经济损失每年都在增加。     

PCV2病毒血症对猪的健康极为重要

在猪圆环病毒2型（PCV2）仔猪疫苗进入市场之前，利用定量PCR（qPCR）方法对样本中的PCV2进行检测一直受到质疑。因为PCV2在明显健康和感染动物中都可检测到。这些PCV2检测样本的检测结果实际能说明了什么呢？     

猪圆环病毒2a型和2b型Cap蛋白的原核表达及鉴定

为制备猪圆环病毒2a型（PCV2a）和2b型（PCV2b）Cap蛋白，用生物信息学软件优化PCV2a Cap基因和PCV2b Cap基因密码子、克隆至p ET28a载体中、转化BL21(DE3)、构建重组蛋白表达菌株，通过优化原核表达的温度、IPTG浓度等条件进行蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果显示：重组PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白的分子量约为30 k Da，在不同温度下都以包涵体形式存在，在37℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达的Cap蛋白表达量最高。试验成功制备了PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白，为制备PCV2二价疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗效力检验中参考疫苗的应用

制备了4批不同抗原含量的猪圆环病毒2型（PCV2）灭活疫苗,灭活前PCV2病毒含量分别为107.0、106.5、105.5和104.5TCID50/mL。对此4批PCV2灭活疫苗,利用本实验室建立的小白鼠效力检验标准进行效力检验,即以PCV2参考疫苗作为对照品,测定待检疫苗免疫小白鼠后血清中PCV2抗体效价的高低来判定疫苗效力。3次重复检测结果都显示灭活前病毒含量为107.0、106.5和105.5TCID50/mL批次的疫苗合格,而灭活前病毒含量为104.5TCID50/mL批次的疫苗不合格,这与猪体内的效力检验结果一致,表明建立的针对猪圆环病毒2型灭活疫苗的小白鼠效力检验方法具有良好的准确性和重复性。     

猪圆环病毒2型分子流行病学及疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)在世界范围内广泛分布,主要以PCV2a和PCV2b两种基因型为主,PCV2b亚型为当前流行基因型。现有商品化疫苗主要针对PCV2a型病毒,也可对PCV2b型病毒产生部分交叉保护,但不能显著控制PCV2b型病毒在猪群中的传播。除此之外,由于已有的商品化疫苗以传统疫苗为主,存在种毒增殖难、疫苗生产周期长等缺点。因此,研发PCV2b新型疫苗可能成为未来PCV2疫苗研制的主要方向。对PCV2的分子流行病学及疫苗研究现状进行了综述,以期为PCV2疫苗的研究提供参考。     

科技情报

“猪圆环病毒疫苗”在哈兽研研制成功 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所刘长明研究员主持的“猪圆环病毒2型（PCV2）灭活疫苗（LG株）”，经过十年的科技攻关终于获得成功。该疫苗新兽药注册近日通过了农业部兽药评审中心评审，获得了二类新兽药证书。疫苗毒种获得国家发明专利，拥有自主知识产权。     

猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定

从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）淋巴组织病料，经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪圆环病毒2型（PCV2）感染，采用无污染的猪肾细胞系（PK15）分离培养，并连续传代培育成一株细胞培养适应毒，命名为PCV2／LG株。分离毒株经细胞培养，于第25代后毒价显著升高，于第35代毒价可达10^5.6TCID 50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中；病毒感染的阳性细胞呈散在分布，阳性细胞数可达50％以上；免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团，病毒粒子直径约为17nm；病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成，与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96．2％以上。用2mL的病毒细胞培养物（10^5.6TCID 50/mL）接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头，可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。     

猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)Henan株的分离与全基因组序列分析

用PCR方法从河南某猪场送检的1头疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪的腹股沟淋巴结中检测到了猪Ⅱ型圆环病毒（porcine circovirus type2，PCV2）核酸。将该病料研磨、过滤除菌后接种无PCV1和PCV2污染的PK-15细胞，盲传12代后，用PCR方法仍然能够在接种细胞中检测到PCV2核酸。从接种细胞中收获病毒，经超速离心纯化后电镜负染观察．可见直径约17nm、呈二十面体对称结构的病毒粒子，表明从发病猪中分离到了PCV2，将该毒株命名为PCV2Henan株。序列分析表明：该株病毒全基因组长1767bp，包含11个读码框，与PCV1同源性为76．2％～77．3％，与其他PCV2株的同源性为95．5％～99．6％。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白Loops结构及病毒样颗粒制备的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是某种病毒的1种或几种结构蛋白在体外组装而成,由于VLPs不包含病毒基因组,在宿主细胞中不能自我复制,因此VLPs在亚单位疫苗应用中具有较高的生物安全性。自猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在世界范围内流行以来,已经给全球养猪业带来巨大经济损失,因此PCV2的致病机理和疫苗研究具有重要现实意义。PCV2Cap蛋白(capsid protein)是病毒唯一的衣壳蛋白,也是主要的免疫原性蛋白,60个Cap蛋白亚基在体外能自行组装成PCV2VLPs,该VLPs因与天然病毒粒子形态相似并保留了病毒完整的构象表位,已经在PCV2组装和侵染机理研究、亚单位疫苗的研发及其相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的预防研究中得到广泛应用。本文主要对PCV2Cap蛋白的Loops结构及其VLPs的制备研究进展进行阐述,为PCV2侵染机理与亚单位疫苗的研发等提供参考。     

猪圆环病毒Ⅱ型病鉴别诊断技术的研究进展

猪圆环病毒（PCV）属于圆环病毒科,圆环病毒属,是一种无囊膜的二十面体的单链环状DNA病毒,该病毒有两个血清型：猪圆环病毒I型（PCV1）和猪圆环病毒II型（PCV2）。猪圆环病主要是由PCV2引起。本文旨在通过讨论PCV2的临床症状及鉴别诊断方法,为PCV2的现场及实验室鉴定提供理论依据。     

西宁市猪圆环病毒2型感染的流行病学调查

用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了西宁市8个规模养殖场和部分散养户的161份猪血清样品的猪圆环病毒2型（PCV2）抗体。结果显示，所有被检猪场均有PCV2抗体阳性猪存在，161份血清样品中PCV2抗体阳性率为86．95％。从上述样品中随机抽取28份样品，用PCR方法检测了PCV2ORF1基因；结果，从13份血清中扩增到了特异性PCV2ORF1基因，阳性率为46．42％。证实，西宁市猪场和散养猪群中存在PCV2感染。     

2001—2012年国内主要PCV2流行基因型演变趋势

猪圆环病毒2型（PCV2）是严重危害世界养猪业的重要病毒性疾病。本文从GenBank随机选择和下载了281株国内分离的PCV2全基因组序列病毒株,研究PCV2基因型与PMWS的相关性,以及在2001年至2012年期间国内主要PCV2流行基因型的演变趋势。研究分析表明PCV2基因型与PMWS没有明显的相关性,但从2003年后在国内多数省份PCV2流行基因型发生了变化,即基因型从PCV2a（2群）演变成PCV2b（1群）,且PCV2b占主导作用。因此,针对国内PCV2流行基因型的演变趋势,可选择相匹配的疫苗进行有效地防控。     

石河子地区规模化猪场猪圆环病毒病的血清流行病学调查

试验以石河子地区7个规模化猪场为研究对象,收集不同类别猪血液样本共1208份,应用猪圆环病毒2型ELISA抗体检测方法对石河子市规模化猪场的PCV2感染状况进行血清流行病学调查。经过对石河子地区4个未免疫PCV2疫苗规模化猪场的681份血清调查,结果该4个规模化猪场PCV2平均抗体阳性率为49.93%（340/681）;经过对石河子地区3个免疫PCV2疫苗的规模化猪场的527份血清调查,结果平均抗体阳性率为92.03%（485/527）。发现PCV2目前在石河子地区规模化猪场中感染较严重,所以对该地区未免疫PCV2的规模化猪场建议净化后进行该疫苗免疫,建议免疫方案为：1）种公猪、种母猪每年免疫3～4次,1头份/头;2）仔猪14～20日龄免疫1次,间隔3周加强免疫1次,0.5头份/头。3个免疫PCV2疫苗的猪场目前免疫抗体水平比较理想,基本可以有效预防该病。     

猪GM-CSF基因对猪圆环病毒2型DNA疫苗诱导仔猪免疫反应的调节作用

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）能够诱导树突状细胞的成熟和存活，并提高其抗原递呈功能，是非常有潜力的分子佐剂之一。为了探讨猪GM-CSF对猪圆环病毒2型（PCV2）DNA疫苗诱导免疫反应的调节作用，本研究将表达猪GM-CSF和PCV2衣壳蛋白的重组质粒混合物（pcDNA3．1-gm-csf和pcDNA3．1-orf2）及在同一载体上表达PCV2衣壳蛋白与猪GM-CSF的双表达重组质粒（pIRES-orf2／gm-csf），分别接种于7日龄健康仔猪，共肌肉注射3次，每次间隔2周。结果表明猪GM-CSF基因能够明显增强PCV2DNA疫苗诱导的特异性体液免疫反应，提高外周血淋巴细胞（PBLC）对ConA刺激的增殖活性，增强NK细胞的杀伤功能，影响细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平。但GM-CSF基因单独表达和与PCV2衣壳蛋白基因在同一载体上表达，对上述4个细胞因子表达的影响有一定差异。     

猪圆环病毒Ⅰ型全基因组的克隆及生物信息学分析

猪圆环病毒Ⅱ型（PCV2）是引起临床断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）的主要病原之一,而与之遗传相关的猪圆环病毒Ⅰ型（PCVI）无致病性。本研究从病猪的脾脏通过PCR扩增并成功克隆了PCV1的全基因组,在此基础上,对GenBank中发表的所有31株PCV1以及部分PCV2（60株）进行了生物信息学分析。PCV1株间遗传与分子进化分析结果表明：PCV1可分为基因Ⅰ型与基因Ⅱ型两种基因型。PCV1与PCV2之间基因组结构和功能区分析结果表明：PCV1和PCV2基因组之间在复制起始区等功能区高度保守,在主要的编码区,尤其是编码Cap蛋白的ORF2,存在着许多差异。     

2019—2022年河池市屠宰猪群主要疫病监测分析

研究旨在了解河池市屠宰猪群主要疫病感染情况,于2019—2022年采集屠宰猪群组织混合样品,应用实时荧光定量RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、口蹄疫病毒（FMDV）、猪塞内卡病毒（SVA）,应用荧光PCR检测圆环病毒2型（PCV2）、圆环病毒3型（PCV3）、伪狂犬病毒（PRV）。结果显示,检测的1 745份样品中,除FMDV和PRV没有检出外,其余5种病原均有检出,样品总体阳性率由高到低依次为42.87%(PCV2)、11.63%(PCV3)、8.48%(PRRSV)、0.80%(CSFV)、0.80%(SVA);县区检出率依次为100.00%(PCV2)、100.00%(PRRSV)、90.91%(PCV3)、54.55%(CSFV)、27.27%(SVA);5种病原存在不同程度的混合感染。研究表明,圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟在河池市及其周边地区猪群中流行普遍,需进一步加强监测和做好防控措施。     

猪圆环病毒的诊断及防制

猪圆环病毒（PCV）为圆环病毒科圆环病毒属成员,单股环状DNA病毒。PCV有2种血清型,即PCV—1、PCV12。PCV11型多存在于机体各组织器官和某些传代细胞中,不致病。