犬源奇异变形杆菌噬菌体分离、鉴定及对生物被膜的作用

以犬源奇异变形杆菌为宿主菌,从城市污水中分离出奇异变形杆菌噬菌体,研究其生物学特性及对生物被膜的作用,为治疗和控制奇异变形杆菌感染提供基础。采用双层平板培养法从污水中分离、纯化噬菌体,并观察噬菌斑特征。通过透射电镜观察纯化后噬菌体的形态特征。测定噬菌体的最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、酸碱稳定性、核酸类型、最佳保存条件及对生物被膜的抑制和清除效果。成功分离出3株奇异变形杆菌的噬菌体,分别命名为vB_PmM_S、vB_PmM_W和vB_PmM_X。噬菌体噬菌斑透明、无晕且边缘整齐;电镜观察显示,噬菌体的头部呈二十面体的立体对称,直径（30±3）nm;噬菌体的最佳感染复数为0.001;一步生长曲线的结果表明,vB_PmM_S潜伏期约为20 min,爆发期约为35 min,平均裂解量为70 PFU·cell^-1;3株噬菌体在10~60℃、pH 5.0~8.0滴度稳定;短期内可以将噬菌体（vB_PmM_S）置于SM液直接保存在4℃,长期保存可采用甘油（30%）或者DMSO（5%）置于-80℃。噬菌体鸡尾酒能够破坏奇异变形杆菌生物被膜,预防生物被膜形成。本文分离纯化的3株裂解性噬菌体为奇异变形杆菌及其引起的泌尿系统感染的治疗奠定了基础。     

野生草食动物源奇异变形杆菌的耐药性分析

为了检测从野生草食动物临床标本中分离的62株奇异变形杆菌对23种抗菌药物的体外活性以及这些杆菌产生超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、金属β-内酰胺酶的情况,正确指导兽医临床合理使用抗菌药物。用API-20E对分离获得的菌株进行鉴定,双纸片协同试验和确证试验筛选超广谱β-内酰胺酶,纸片扩散法检测AmpC酶,改良Hodge试验检测金属β-内酰胺酶,药敏试验采用标准的纸片扩散法。实验证实分离获得的奇异变形杆菌产酶率为25.8%（16/62）,其中超广谱β-内酰胺酶为16.1%（10/62）,AmpC酶为9.7%（6/62）、金属β-内酰胺酶为0%（0/62）。头孢曲松钠、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、头孢噻肟钠、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星的敏感率大于80%。这说明产β-内酰胺酶的奇异变形杆菌在野生草食动物临床中占较大的比例,实验室需加强检测。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、亚胺培南、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星是治疗奇异变形杆菌感染的首选药物。     

普通变形杆菌生物被膜形成能力及特性分析

采用结晶紫染色法对18株扬子鳄源普通变形杆菌进行生物被膜测定,并选取其中1株生物被膜形成能力较强的菌株进行特性分析。结果显示,在受试的18株普通变形杆菌中,14株生物被膜形成能力较强,3株具有中等强度的生物被膜形成能力。碳源种类对普通变形杆菌生物被膜形成的能力有一定影响,当在培养基中加0.20%的葡萄糖或蔗糖时,其形成生物被膜能力最强;普通变形杆菌浮游态和生物被膜态对巨噬细胞RAW264.7的抗吞噬能力无明显差异。本研究为进一步研究生物被膜形成机制、变形杆菌抗吞噬机制、生物被膜的清除以及扬子鳄变形杆菌病防治等提供理论基础。     

潍坊市犬奇异变形杆菌分离鉴定及耐药性检测

奇异变形杆菌为人兽共患病原菌,多为继发感染.本研究从潍坊地区宠物医院的犬瘟热患病犬眼鼻分泌物和犬细小病毒感染患病犬直肠粪便中,共采集样品39份,进行奇异变形杆菌分离鉴定和耐药性检测.结果显示:分离鉴定出11株奇异变形杆菌,分离率为28.20％,其中犬细小病毒感染犬的奇异变形杆菌分离率为47.37％;16S rRNA序列...     

兔奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解拉萨市一种兔场种兔腹泻死亡的病因,本试验从一只种兔的肠道内容物中分离出一株细菌,通过革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA PCR扩增和序列比对、动物回归试验及药敏试验进行了分析。结果显示,分离菌株为单个或成对的短杆状的革兰氏阴性菌;分离菌与GenBank中奇异变形杆菌的同源性为73.5%～99.8%,采用Mega 7.0软件将分离菌株与11株参考菌株的16S rRNA序列进行同源性比对分析,并构建系统进化树,综合分析后确定分离菌株为奇异变形杆菌,命名为T2018。在动物回归试验中有3只试验兔出现了腹泻,但均未死亡,剖检结果显示,空肠、回肠肠壁薄而透明,内有半透明胶冻样物;结肠和盲肠黏膜充血,浆膜上有出血斑点。药敏试验显示,分离菌株仅对阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素和喹诺酮类的氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星5种抗菌药表现出高度敏感,对哌拉西林表现为中介,对其他24种抗生素均表现为耐药。上述结果表明该种兔场种兔腹泻死亡的病原为奇异变形杆菌。     

动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性.从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16S rRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,药敏试验检测分离菌对常用药物的敏感性.结果共分离鉴定出58株沙门菌,包括鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌和阿哥那沙门菌等7种血清型,其中鸡群以鸡白痢沙门菌感染为主,肠炎沙门菌次之;水禽以鼠伤寒沙门菌感染为主.生物被膜测定结果显示51.72％的沙门菌分离株可形成生物被膜,其中83.33％的鼠伤寒沙门菌可形成生物被膜.20种抗生素(氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、林可酰胺类、氯霉素类、青霉素类、四环素类和头孢菌素类)敏感性试验表明所有菌株对林可霉素耐药,51.72％对4种及其以上抗生素耐药,并出现了1株对所有受试抗生素均耐药的鼠伤寒沙门菌.结果表明鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是为目前在家禽中分离的优势血清型;同时具有生物被膜形成能力和多重耐药性的沙门菌将对家禽疾病控制和公共卫生带来更大的威胁.     

10株鸡源奇异变形杆菌的质粒消除及耐药性研究

为建立SDS消除奇异变形杆菌质粒的方法,了解奇异变形杆菌的质粒与奇异变形杆菌耐药性表型之间的关系,采用正交设计的试验方法研究奇异变形杆菌的消除条件,并采用琼脂糖凝胶电泳的方法进行验证,筛选出质粒消除效果最佳的试验条件。采用微量稀释法进行质粒消除前后奇异变形杆菌对13种抗生素的药敏性测定。结果显示,消除效果最好的条件为消除剂SDS浓度0.2%,温度42℃,消除72 h。将该组消除后不含质粒的奇异变形杆菌与原含质粒奇异变形杆进行耐药性试验,结果表明,10株鸡源奇异变形杆菌消除质粒后,其中9株对头孢噻呋的药物敏感性由耐药变为敏感。     

生物被膜形成对猪源沙门氏菌耐药性和毒力的影响

旨在探究猪源沙门氏菌生物被膜形成能力(成膜能力)对其耐药性和毒力的影响.通过96孔微量板法、K-B纸片法、微量稀释法和寇氏改良法,测定来源于腹泻仔猪的69株沙门氏菌的成膜能力、耐药表型、最小抑菌浓度(MIC)和对小鼠的半数致死量(LD50).结果显示,69株沙门氏菌成膜阳性率为92.8％(64/69),以弱阳性(1+)...     

猪源屎肠球菌致病力与耐药性及生物被膜形成能力的相关性分析

为研究猪源屎肠球菌的致病力与耐药性及生物被膜形成能力的相关性,本研究分别对9株猪源屎肠球菌进行动物试验、药敏试验和生物被膜形成能力的测定。结果显示有66.67%的菌株引起小鼠肝脏、脾脏出血等病变,并且其中部分菌株导致接种小鼠急性的高死亡率;9株屎肠球菌中KF-QX-1株耐药率最高为100%,其次为ZKXH01(95.24%)、NY01(90.48%)、NY-XY-4(80.95%)、SBLH(76.19%)、HUAX(71.43%)、NY-XY-1(71.43%)和ZHENGY(66.67%),耐药率低于50%的菌株只有JY02(14.29%);生物被膜检测结果显示9株菌中除NY01株外均有不同程度的的被膜形成能力,其中2株菌(JY02和NY-XY-1)生物被膜形成能力相对较强;通过对上述试验结果综合分析显示,肠球菌菌株对受试动物的致病力与其耐药性和生物被膜形成能力之间缺乏明显的相关性,但具有生物被膜形成及耐药两种特性会增强猪源肠球菌的耐药性和传播性,给人类和动物的疾病控制造成更大的威胁。     

禽源奇异变形杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了鉴定哈尔滨地区某养殖场发生的一起细菌感染的致病菌,试验对送检病料进行病原菌的分离培养和形态学观察,并应用微生物自动分析系统和PCR方法鉴定菌株,再对分离菌进行生化试验和药敏试验。结果表明:该病原菌为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis),对恩诺沙星、丁胺卡那霉素和β-内酰胺类药物高度敏感。     

健康牦牛源大肠杆菌耐药性、生物被膜能力及Ⅰ类整合子检测

试验分别采用微量肉汤稀释法、改良结晶紫半定量染色法和普通PCR方法对分离自健康牦牛的大肠杆菌进行耐药性、生物被膜能力及Ⅰ类整合子检测。结果表明:分离菌株对利福平、氟苯尼考和头孢噻呋的耐药率较高,对多西环素和庆大霉素次之,对氟喹诺酮类恩诺沙星和左旋氧氟沙星的耐药率在30%以上。96.84%的菌株有不同的生物被膜表型,只有3.16%的菌株无生物被膜形成能力,且大多数菌株表现出弱的生物被膜表型,占菌株总数的57.52%。30.82%的菌株携带Ⅰ类整合酶基因intⅠ1。     

鸡源奇异变形杆菌16S rRNA甲基化酶基因的扩散机制

从某鸡场9日龄鸡群的粪便样本中分离、鉴定出奇异变形杆菌22株,并进行药敏试验和耐药基因(16S rRNA甲基化酶基因和超广谱β-内酰胺酶基因)的PCR检测.然后通过接合试验、电转化试验以及脉冲场凝胶电泳来分析16S rRNA甲基化酶基因的扩散机制.结果显示,22株鸡奇异变形杆菌对庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素均呈现高水平耐药,对头孢噻呋、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考、多西环素呈现不同程度的耐药.PCR检测表明,在7种16S rRNA甲基化酶基因中仅扩增出rmtB基因;同时,这些菌株也携带有blaCTX-M基因.接合试验和电转化试验重复多次均未成功.脉冲场凝胶电泳结果显示,这些菌株具有相近的亲缘关系,提示该场鸡源奇异变形杆菌16SrRNA甲基化酶基因rmtB的扩散以克隆传播为主.     

包头地区仔猪源致泻性大肠杆菌进化分群、生物被膜形成能力及耐药性检测

为分析包头地区仔猪源致泻性大肠杆菌进化分群情况、生物被膜形成能力(BF)及耐药性情况。试验采用PCR法、结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法对48株仔猪源致泻性大肠杆菌进行进化分群、生物被膜形成能力及耐药性检测。结果显示,48株仔猪源致泻性大肠杆菌中以B2群和D群流行为主,分别占分离菌株的35.4%和25.0%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等7种药物耐药率在58.3%以上,对其他药物的耐药率在11.9%～31.3%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌中强形成膜能力菌株有20株、中形成膜能力菌株有16株、弱形成膜能力菌株有7株、不形成BF菌株的有5株,分别占分离菌株的41.7%、33.3%、14.6%、10.4%。经分析,48株仔猪源致泻性大肠杆菌的BF形成能力与多黏菌素、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄西林、阿莫西林7种药物耐药性存在一定的相关性。本试验为临床中合理用药及该病的防控提供科学依据。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定、耐药性分析及毒力基因检测

为确定屠宰场发病猪死亡原因,本研究对从死亡猪内脏中分离到的细菌,进行革兰染色镜检、生化鉴定和16SrRNA基因测序鉴定,并进行药敏试验、毒力基因检测及小鼠攻毒试验.结果显示,革兰染色镜检为细小或中等短杆状或丝状革兰阴性杆菌;生化试验特性分析及16SrRNA基因测序鉴定为奇异变形杆菌,命名为GZ2-2株.药敏试验结果显示...     

广州、成都宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力及耐药性调查

为了解广州、成都两地宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力和耐药情况,为指导宠物临床用药和耐药性监测提供依据,研究采用改良结晶紫半定量方法对300株宠物源性大肠杆菌进行生物被膜形成能力测定,同时采用NCCLS微量肉汤稀释法对之进行头孢噻呋、庆大霉素等14种兽医临床常用抗菌药物MIC值测定.结果表明:广州、成都两地宠物源性大肠...     

鸭源鸡杆菌致病力与生物被膜形成能力及耐药性的相关性分析研究

为探究鸭源鸡杆菌的致病力与生物被膜形成能力及耐药性的相关性,分别对20株鸭源鸡杆菌进行动物致病性试验、生物被膜形成能力的测定和药敏试验。动物致病性试验显示有80%的菌株能引起小鼠死亡,出现肝脏、脾脏肿大和输卵管出血等病变,且其中部分菌株(YZ-11-XZ、LH-BJT-11-SLG、Huang-1-SLG)导致迅速的高死亡,48h内死亡率100%;生物被膜检测试验结果显示大部分鸭源鸡杆菌均具有不同程度形成被膜的能力,其中3株菌(SHANXY-1-GZ、Huang-1-SLG、ZZ-HL-1-SLG)具有中等被膜形成能力,2株菌(YZ-11-XZ、F149T)具有较强的生物被膜形成能力;药敏试验结果表明,除标准株F149T对多种抗生素都敏感外,其余菌株耐药率均在38.10%⁷6.19%之间不等。其中LH-BJT-6-XZQ株耐药率为80.95%,其次是XX-HJ-6-QG(76.19%)、ZZ-XC-7-QG(76.19%)、SX-YC-7-QG(71.42%)、ZZ-XY-1-QG(66.67%)、Huang-1-SLG(66.67%)、XX-HJ-6-SLG(61.90%)、ZZ-HL-1-SLG(61.90%)。分析发现,鸭源鸡杆菌对受试动物的致病力与生物被膜形成能力及其耐药性之间缺乏明显的相关性,但具有生物被膜形成及耐药2种特性会增强鸭源鸡杆菌的耐药性和传播性,给动物的疾病控制造成更大的威胁。该研究为鸭源鸡杆菌致病机制的研究提供一定的参考依据。     

广州、成都宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力及耐药性调查

为了解广州、成都两地宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力和耐药情况,为指导宠物临床用药和耐药性监测提供依据,研究采用改良结晶紫半定量方法对300株宠物源性大肠杆菌进行生物被膜形成能力测定,同时采用NCCLS微量肉汤稀释法对之进行头孢噻呋、庆大霉素等14种兽医临床常用抗菌药物MIC值测定。结果表明:广州、成都两地宠物源性大肠杆菌形成生物被膜的能力均以中等和弱成膜能力表型为主,分别占两地分离菌株总数的93.3%和87.2%;广州、成都两地的分离菌株对14种兽医临床常用的抗菌药物表现出不同程度的耐药性,其中多西环素、利福平、氨苄西林、庆大霉素、氟苯尼考和阿莫西林/克拉维酸的耐药率均超过50.0%。     

内蒙古地区犊牛源大肠杆菌的分离鉴定及其生物被膜的形成与耐药性研究

为了了解内蒙古地区犊牛源大肠杆菌生物被膜的形成能力及其耐药情况,试验采用形态学观察、生化试验和PCR方法对大肠杆菌进行分离鉴定,采用改良结晶紫染色法和激光共聚焦倒置显微镜鉴定法,确定犊牛源大肠杆菌生物被膜的形成情况,采用微量稀释法测定分离菌株对20种抗菌药物的敏感性,统计耐药谱型。结果表明:本次试验共分离鉴定得到51株大肠杆菌。在51株大肠杆菌分离株中,生物被膜形成能力强、形成能力中等、形成能力弱和无生物被膜形成能力的菌株分别占比25.5%(13/51)、17.6%(9/51)、25.5%(13/51)和31.4%(16/51)。分离菌株对甲氧苄啶、磺胺嘧啶、氨苄西林、头孢噻吩和头孢噻肟的耐药率分别为90.2%、78.4%、84.3%、68.6%、68.6%;对米诺环素、阿米卡星、头孢西丁和美罗培南的敏感率分别为68.6%、88.2%、86.3%、100%;耐10种药物以上的大肠杆菌分离株中,生物被膜阳性菌株占比76%,而生物被膜阴性菌株仅占24%,其中生物被膜阳性分离株的耐药谱型要广于生物被膜阴性分离株。说明内蒙古地区犊牛源大肠杆菌生物被膜阳性分离菌株流行,51株大肠杆菌分离株对20...     

乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力及多位点序列分型分析

试验以55株乳源金黄色葡萄球菌为研究对象,通过结晶紫染色法分析其生物被膜形成能力,应用PCR技术检测乳源金黄色葡萄球菌的所携带的耐药基因和生物被膜形成相关基因。结果表明,55株金黄色葡萄球菌中34株生物被膜形成能力较强,17株生物被膜形成能力较弱,4株无生物被膜形成能力;55株细菌中17株(31%)携带mec A耐药基因,17株金黄色葡萄球菌分为9个ST型,均属于已发现的ST型,其中ST97和ST398为优势株。上述来源相近的金黄色葡萄球菌分型后,基本位于ST97和ST98两个大簇,说明该地区引起奶牛乳房炎的细菌型别相对较集中。生物被膜相关基因Ica A、Ica D、Ica R、Eno、Atl、aap、Bap和sig B基因的检出率分别为44%、36%、27%、89%、60%、42%、18%和25%。研究表明,乳源金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力较强,生物被膜形成能力较强的菌株均携带多个生物被膜形成相关基因,说明生物被膜的形成过程可能是受多个基因共同调节。