非洲猪瘟诊断方法研究进展

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪的急性、热性、高度接触性传染病,急性病例的发病率和死亡率几乎达100%。世界动物卫生组织将ASF列为法定报告动物疫病,中国将其列为一类动物疫病。当前中国ASF疫情防控形势十分严峻,且尚无有效的疫苗及其他防治制剂,因此执行严格的卫生措施及监测病原和抗体,进而排查和清除带毒动物是ASF防控的重要措施。笔者就ASFV诊断标识出发,总结了近年来ASF病原检测与血清学监测技术的最新研究进展。抗原检测方面,在PCR基础上发展的多种等温扩增技术如重组酶聚合酶扩增技术、交叉引物扩增技术、环介导等温扩增技术及微滴数字PCR从不同方面克服了常规PCR的缺陷,实时荧光定量PCR检测方法具有速度快、准确、结果客观和可定量基因组含量等优点,新型CRISPR/Cas12a技术无需昂贵的仪器,可为ASFV的检测提供一种更加便携、简单、灵敏和特异性强的新型替代方法;抗体检测方面,基于酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析技术和间接免疫荧光试验等的检测方法灵敏度和特异性也有不同程度的提高。     

非洲猪瘟检测技术进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪烈性接触性传染病,能引起所有品种和年龄的猪发病发病过程急,死亡率高。2018年我国首次发生非洲猪瘟疫情。日前,农业农村部公布了ASF现场快速检测试剂名单多种检测试剂盒上市应对ASF的防控。本文将对酶联免疫吸附试验、聚合酶链反应、环介导等温扩增和重组酶聚合扩增试验等对非洲猪瘟诊断技术的最新研究进展进行介绍,为非洲猪瘟综合防控提供借鉴和参考。     

非洲猪瘟病毒的不同病原学检测方法比较

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染导致的猪高死亡率的传染病,最早起源于非洲,是最复杂的猪传染性疾病之一。非洲猪瘟自首次报道至今已有1个世纪,但在没有疫苗和没有有效治疗方法的情况下,非洲猪瘟病毒的防控仍是一项巨大的挑战。当前,非洲猪瘟病毒已在我国“定殖”,该病毒的检测已经成为养猪企业的一项常规工作。实时荧光定量PCR是检测非洲猪瘟病毒最常用的方法,一些新型的核酸检测技术也被开发用于病毒检测,例如环介导等温扩增法、荧光重组酶介导等温扩增法等,均具有较好的特异性和灵敏度。本文阐述了非洲猪瘟的流行现状及不同病原学检测方法,对不同检测方法进行简单的比较,以期为非洲猪瘟病毒的检测提供参考。     

非洲猪瘟诊断技术研究进展

非洲猪瘟防控目前暂无安全有效疫苗可用,因此快速、可靠的检测方法对其防控至关重要。目前应用的非洲猪瘟诊断技术主要表现在病原、核酸、抗原与抗体四个方面:病原检测主要有红细胞吸附和病毒分离方法,核酸检测目前已开发出实时荧光定量PCR(qPCR)、多重PCR(mPCR)、微滴数字PCR(ddPCR)、巢氏PCR(nested-PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶聚合酶扩增技术(RPA)、交叉引物扩增技术(CPA)、原位杂交技术(ISH)以及生物传感器技术等,抗原检测常用荧光抗体试验(FAT)、抗原ELISA、侧向流动免疫色谱分析(LFA)等,而抗体检测主要通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接荧光抗体试验(IFA)、胶体金快速免疫层析法(GICA)、免疫印迹法(IBT)等方法。每种诊断技术都有其特点,从而为不同情况下的A SFV诊断提供了多种选择。未来,其他技术如CRISPR等与上述技术的结合应用,以及不同诊断技术的联合应用,将成为非洲猪瘟诊断技术发展的趋势。     

非洲猪瘟病毒CRISPR/Cas9敲除技术研究进展

非洲猪瘟(african swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,严重危害着全球养猪业。目前尚无商品化ASFV疫苗用于ASF的防控。传统ASFV疫苗研究存在不同程度的局限性。通过建立ASFV的CRISPR/Cas9基因敲除技术平台,将为非洲猪瘟病毒基因功能研究提供便捷的工具。     

非洲猪瘟病原学检测方法研究进展

目前,非洲猪瘟(ASF)尚无有效疫苗可以预防,快速、准确的病原学检测是防控该病的重要技术手段。本文综述了ASF病原学检测方法:免疫荧光、ELISA、免疫层析试纸条等抗原检测方法,其使用方便、快速,目前主要应用于急性发病或病死猪的快速诊断及群体筛查;PCR、荧光定量PCR、环介导等温扩增等分子生物学检测方法仍是ASF病原检测的主要手段,特别是荧光定量PCR方法以其敏感、特异、快速、稳定的优点在我国实践中广泛应用。随着微流控、化学发光、基因芯片等新技术不断应用,各种自动化、一体化、便携式设备不断研发,将会为ASF防控提供有效技术支持。     

非洲猪瘟病毒及诊断技术研究进展

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情。目前,非洲猪瘟抗原检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、PCR技术、荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。抗体检测技术主要是酶联免疫吸附试验、胶体金试纸条法等。根据非洲猪瘟疫情在我国的发生情况,中国动物疫病预防控制中心组织了非洲猪瘟现场快速检测评审,对各种检测方法进行了技术把关,为非洲猪瘟病毒的检测和防控提供了技术保证。     

CRISPR/Cas12a技术在动物疫病检测方面的应用

CRISPR/Cas系统是由簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)组成的一种基因编辑技术,可以特异地切割和识别靶标核酸基因。该技术具有检测速度快、灵敏度高和特异性强的优势,因此被广泛应用于动物疫病检测领域。本文就CRISPR/Cas12a结合等温核酸扩增技术和可视化技术在动物疫病检测中的应用进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为我国的养殖业和进境动物疫病的监测提供技术支撑。     

猪瘟病毒NASBA-RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究基于核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立了一种针对猪瘟病毒的,快速、灵敏、特异的两步法检测技术。该方法的检测灵敏度与反转录巢式PCR(RT-NestPCR)相当,最低能检测出46 pg/μL的病毒RNA。该方法的建立为猪瘟病毒的快速诊断提供了新思路。     

非洲猪瘟病毒LAMP可视化快速检测方法的建立与应用

旨在建立一种适用于现场快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法.采用针对非洲猪瘟病毒的p72基因编码区序列,设计合成2组引物,对引物进行筛选和反应条件优化,确定敏感性与特异性,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果:建立的LAMP方法在63℃50 min内对ASFV的检测灵敏度为10 cop...     

非洲猪瘟检测方法的研究进展

非洲猪瘟起源于非洲,2018年开始传入我国,对我国的养猪业造成了巨大的影响,目前非洲猪瘟疫苗的开发尚不成熟,有效检测成为了预防非洲猪瘟的主要手段。本文主要从病原学检测和血清学检测对非洲猪瘟的检测方法进行阐述,病原学检测主要包括红细胞吸附试验、聚合酶链式反应、等温核酸扩增技术,血清学检测主要包括酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析技术、免疫印迹法。通过这些方法可以有效的检测出非洲猪瘟。     

非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立

本试验利用环介导等温扩增技术（LAMP）建立了一种快速高效检测非洲猪瘟病毒的方法。整个反应在水浴锅中恒温进行,不需要其他昂贵仪器,30 min即可得到阳性结果,灵敏度是OIE标准PCR方法的100倍,并且与其他常见猪DNA病毒无交叉反应。该方法非常适合在野外现场或缺乏试验条件的边远地区检测非洲猪瘟病毒。     

非洲猪瘟两种核酸提取方法的对比报告

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,非洲猪瘟没有有效的疫苗。建立快速准确的诊断方法对于控制本病的传播至关重要。荧光PCR核酸检测是目前灵敏度最高的检测方法。而荧光PCR检测结果准确与否与非洲猪瘟核酸提取的质量有很大关系。笔者在检测工作中对农业部公布的常用快速检测试剂盒裂解液提取核酸与商品化试剂盒全自动核酸提取仪提取核酸,用同一检测反应液进行扩增,并从检测结果的准确性、操作简便程度、样品的使用范围、成本控制等方面进行比较,从而筛选出最佳的核酸提取方法,以期为非洲猪瘟疫情防控提供技术支撑。     

非洲猪瘟疫苗和病原学诊断技术研究进展

非洲猪瘟疫情给我国养猪业造成了巨大经济损失，因而开发安全高效的疫苗和建立快速可靠的病原学诊断方法对该病防控具有重要意义。本文综述了当前国内外非洲猪瘟（African swine fever，ASF）疫苗和病原学诊断技术的研究进展，以期为今后ASF疫苗研制和诊断技术选择提供参考。疫苗研究方面，目前仍无安全有效疫苗上市。灭活疫苗不能提供有效的免疫保护力，已不作为今后研究的重点方向；减毒活疫苗存在生物安全隐患，疫苗接种后的安全性、有效性等有待进一步评估；基因工程疫苗与前两种疫苗相比，成本低且安全性高，但对强毒株攻击的有效保护作用不强。目前认为利用天然分离或敲除非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）毒力基因的致弱毒株开发重组减毒活疫苗具有较好的利用前景，但其安全性和有效性仍有待进一步研究。目前在没有有效疫苗免疫的前提下，建立快速、可靠的早期病原诊断方法对于ASF疫情确认和控制同样至关重要。近年来，ddPCR、LAMP、RPA、CRISPR/Cas等新兴诊断技术相继涌现。这些方法具有操作更简单、检测速度更快、特异性更强等方面的优势，但其检测能力与适用场景尚存在一定不足，还需要进一步完善。未来ASFV病原学检测的研究方向应建立在成本低廉、简单便捷、高效准确、集成化的基础上，或可将多种诊断方法联合应用，各取所长。     

非洲猪瘟检测方法研究进展

非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染而引发的一种发病快、病程短、高病死率的接触性猪传染病。目前缺乏成熟有效的治疗药物和预防疫苗,早期快速有效的检测方法有利于ASF的诊断防控。文章总结了近年来国内外针对非洲猪瘟病毒分离和猪红细胞吸附检测、分子生物学检测、血清学检测方法,以期为ASF的有效诊断提供理论参考。     

非洲猪瘟实验室诊断技术

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的急性、热性传染病.从病原学诊断、血清学诊断等方面对非洲猪瘟的诊断技术进行了介绍.     

猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病毒均为阴性;灵敏度高,所建立的CSFV-RT-LAMP方法灵敏度为10-5,总RNA的检测阈值约为1pg;反应快速,整个扩增反应可在1h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察及电泳检测。本试验为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。     

GIS技术在非洲猪瘟防控和恢复生猪生产中应用之思考

非洲猪瘟自2018年8月进入我国以来,我国生猪产业受到了巨大的冲击,当前,生猪和能繁母猪存栏急剧下降,党和国家领导人高度关注,非洲猪瘟(ASF)防控工作面临着巨大的挑战。文章主要从区域性应对ASF疫情风险的角度出发,探索和分析GIS技术在非洲猪瘟(ASF)防控管理方面的应用,旨在提升以防控ASF疫情为首的重大动物疫情应急处理能力,助力生猪转型升级,提高生猪生产效率。     

非洲猪瘟的诊断技术

非洲猪瘟是一种由非洲猪瘟病毒引发的猪的急性、高致死性传染病。目前还没有可用的疫苗,因此采取快速、高效、精准的诊断检测技术对于防控疫情至关重要。目前可用于非洲猪瘟的诊断技术主要有病原学检测、血清学检测两个方面,其中病原学检测主要分为病毒分离法、红细胞吸附法和核酸检测。目前已经开发出荧光定量PCR检测、微滴数字PCR、多重PCR等技术。抗原检测一般采用荧光抗体试验;抗体检测主要采用酶联免疫吸附实验或间接荧光抗体试验。不同的检测技术特点不同,呈现的准确率也有差异。     

非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。