番茄黄化曲叶病毒抗性检测DNA提取方法的优化及应用

通过对传统DNA提取方法进行优化和改进,得到一种快速提取番茄DNA的方法。综合比较改进法、商品化试剂盒(经典法)和其他试剂盒(快速法)提取番茄DNA的效果。结果表明:改进法相比经典法提取的DNA质量稍有差别,但用时较少,完全可以满足后续PCR试验要求,尤其适用于番茄黄化曲叶病毒的大规模抗性检测;同时该法无液氮及其他有毒溶剂的加入,不仅节省了试验时间和试验成本,而且大大降低了试验的危险性。     

番茄育种后代Mi抗性基因植株的筛选

根据已报道的番茄抗根结线虫病Mi基因的CAP标记设计引物,通过微量DNA提取方法提取番茄叶片的DNA,在优化DNA提取方法和PCR反应条件的基础上,对番茄育种后代共306株试材进行抗性标记筛选鉴定.其中264株无PCR扩增产物,即无抗根结线虫病基因住点,其余42株均产生了750 bp的特异片段,即具有抗根结线虫病基因的位点.利用CAP标记,经TaqI酶酶切,有3株产生了570 bp和160 bp二条特异带,为抗性纯合体;8株产生了750 bp,570 bp,160 bp三条特异带,为抗性杂合体.31株不能被TaqI酶消解,只有未消解前750 bp一条带,为感病植株.     

番茄育种后代Mi抗性基冈植株的筛选

根据已报道的番茄抗根结线虫病Mi基因的CAP标记设计引物,通过微量DNA提取方法提取番茄叶片的DNA.在优化DNA提取方法和PCR反应条件的基础上,对番茄育种后代共306株试材进行抗性标记筛选鉴定。其中264株无PCR扩增产物,即无抗根结线虫病基因位点,其余42株均产生了750 bp的特异片段,即具有抗根结线虫病基因的位点。利用CAP标记,经TaqI酶酶切,有3株产生了570 bp和160 bp二条特异带,为抗性纯合体;8株产生了750 bp,570 bp,160 bp三条特异带,为抗性杂合体。31株不能被TaqI酶消解,只有未消解前750 bp一条带,为感病植株。     

影响枣基因组DNA提取因素的探讨

提取高质量基因组DNA是RAPD扩增以及其他分子生物学试验能否成功的关键.不同植物基因组的提取必须采取与其相适应的提取方法,才能保证对所提取DNA进行有效扩增.基于以上理论就影响枣基因组DNA提取质量的因素:材料、方法、提取液、DNA纯化等进行了分析探讨.     

适于AFLP分析的非洲紫罗兰DNA提取方法研究

以非洲紫罗兰同一植株的叶片和茎段为试材,采用新鲜组织提取、烘干组织提取、冷冻干燥组织提取的3种不同预处理方法,并采用DNAKit、CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ3种提取方法,比较分析了DNA片断大小及不同方法提取DNA的纯度与得率,以期确定适用于多酚、多糖、水分含量高的非洲紫罗兰的DNA提取方法.结果表明:采用冷冻干燥组织提取法,经改良的CTABN法,即在2次抽提步骤中,加入一步利用CTAB沉淀液沉淀DNA的方法最适合非洲紫罗兰DNA提取.这样得到的基因组DNA可作为后续分子水平研究的优良PCR模板.     

加工番茄PCR-SSCP分子标记体系的建立与优化

以加工番茄为试验材料,采用PCR-SSCP分子标记技术,对DNA提取方法、PCR反应程序、聚合酶链式反应-单链构象多态性分子标记体系的电泳条件、变性剂等诸多因素进行了研究,筛选和建立了多态性检出率高、带型清晰、重复性好的PCR-SSCP反应体系和反应程序。结果表明:采用CTAB法提取番茄叶片DNA时,在CTAB缓冲液中加入5mol/L NaCl,第一次抽提离心速度和离心时间分别为8 000r/min和15min,可以获得高质量的DNA,PCR扩增程序为94℃5min,94℃1min,52℃30s,72℃1min,72℃10min,29个循环,退火温度52℃,引物大小100~300bp、98℃变性10min,非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度8%,电泳1.5~2.5h,聚丙烯酰胺凝胶中不添加甘油为加工番茄PCR-SSCP分子标记体系最佳的条件组合。     

番茄种质资源分类和品种鉴定研究进展

番茄种质资源的分类和品种鉴定是种质资源收集、保存、研究和利用的基础.综述了形态学标记、花粉学方法、同工酶标记和DNA分子标记等分类方法在番茄种质资源分类和品种鉴定上的应用及研究进展.     

番茄黄化曲叶病毒抗病基因Ty-2的SCAR标记筛选

以抗病杂合体(Ty-2/ty-2)、抗病纯合体(Ty-2/Ty-2)和感病纯合体(ty-2/ty-2)番茄为试材,以提取植物的基因组DNA作为模板,根据与抗病基因Ty-2紧密连锁的RFLP标记设计特异引物,采用DNA聚合酶链式反应的方法,筛选获得了2个与抗病基因Ty-2紧密连锁的、且稳定可靠的SCAR标记,分别命名为T0302-1和T0302-2。结果表明:T0302-1和T0302-2两个标记均为共显性分子标记,可用于番茄抗病育种的辅助选择中。该研究旨在筛选获得与番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-2紧密连锁的分子标记,为番茄抗病育种提供技术支撑。     

不夜城芦荟基因组DNA提取方法的比较研究

以不夜城芦荟的幼嫩叶片为试材,分别采用SDS法和CTAB法以及简化的CTAB法对基因组DNA进行提取,并利用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳法检测其DNA的浓度、纯度及质量,以期筛选不夜城芦荟基因组DNA提取的最合适方法.结果表明:对比不夜城芦荟基因组DNA提取的3种方法,无论从提取浓度还是纯度上来看,SDS法均明显优于其它方法.     

DNA分子标记技术在番茄育种上的应用

主要介绍了分子标记技术应用于遗传育种中的几种方法,并综述了DNA分子标记技术在番茄的遗传育种研究既番茄遗传图谱、亲缘关系和遗传多样性研究、品系指纹图谱构建及品种纯度鉴定、基因定位和标记辅助选择中的一些应用.并对分子标记在番茄育种上的选一步应用做出了展望.